馬　文，杜　娟，張先明，王　焰

(1.貴州醫(yī)科大學附院呼吸內科，貴州貴陽　550004; 2.貴州醫(yī)科大學附院中心試驗室，貴州貴陽　550004)

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脫落細胞DNA倍體分析及胸水CEA與血清CEA比值的診斷價值＊?

馬文1，杜娟1，張先明1，王焰2

(1.貴州醫(yī)科大學附院呼吸內科，貴州貴陽550004; 2.貴州醫(yī)科大學附院中心試驗室，貴州貴陽550004)

［摘要］目的:探討胸水脫落細胞DNA倍體分析及胸水癌胚抗原(CEA)與血清CEA比值測定對惡性胸腔積液的診斷價值。方法: 41例惡性胸腔積液患者為試驗組，84例良性胸腔積液患者為對照組，抽取2組患者胸水和血液，采用全自動細胞圖像分析系統(tǒng)對胸水脫落細胞進行DNA倍體分析，用蛋白芯片－化學發(fā)光法檢測血及胸水癌胚抗原水平，計算胸水CEA與血清CEA比值;比較2種方法單獨應用或聯(lián)合應用時診斷惡性胸腔積液的靈敏度、特異度及youden值。結果:試驗組胸水脫落細胞DNA倍體分析陽性率和胸水CEA與血清CEA比值陽性率均高于對照組(P＜0.05) ;胸水脫落細胞DNA倍體分析對惡性胸腔積液診斷靈敏度為85.37%、特異度為66.67%、youden指數(shù)0.52，胸水CEA與血清CEA比值對惡性胸腔積液診斷靈敏度為78.05%，特異度為77.38%，youden指數(shù)0.55，2種方法比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05) ; 2種方法聯(lián)合診斷惡性胸腔積液的靈敏度為96.79%，特異度為92.46%，youden指數(shù)0.59。結論:胸水脫落細胞DNA倍體分析聯(lián)合胸水CEA與血清CEA比值測定，對鑒別良、惡性胸腔積液具有更好的診斷價值。

［關鍵詞］胸水;脫落細胞; DNA;倍體分析;癌胚抗原

網絡出版時間: 2016－02－23網絡出版地址: http: / /www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160223.1905.020.html

在胸水中查找腫瘤細胞是目前鑒別良、惡性胸腔積液的主要方法，該方法敏感度低，只有50%～60%［1］;而利用血清學及免疫學等檢查鑒別良、惡性胸水的特異性又有限，所以研發(fā)新的診斷技術十分必要。有研究表明，DNA含量是監(jiān)測細胞增殖和腫瘤轉化的指標，DNA的非整倍體性質是惡性腫瘤的特征之一，測定和分析細胞DNA含量的倍體對良、惡性腫瘤的診斷、鑒別診斷、療效判斷及預后測定等有重要價值［2－3］。癌胚抗原(CEA)是腫瘤細胞產生的物質，正常細胞和某些良性疾病只能分泌極少量［4－5］。本研究主要采用全自動細胞圖像分析系統(tǒng)對胸水脫落細胞DNA含量進行測定，探討其對惡性胸腔積液診斷的靈敏度、特異度及youden指數(shù);同時檢測胸水CEA與血CEA比值，評估2種方法獨立及聯(lián)合應用對惡性胸腔積液的診斷價值。

1　對象與方法

1.1對象

選擇2011年6月～2013年6月在呼吸科、心內科、感染科、腎病風濕科住院的胸腔積液患者125例，男74例，女51例，年齡18～89歲，平均(61.78±7.03)歲。41例惡性胸腔積液為試驗組，男24例，女17例，平均(62.42±7.35)歲，均經胸水脫落細胞學、電子支氣管鏡肺活檢、淋巴結穿刺活檢、經皮肺穿刺活檢或胸膜活檢、開胸肺活檢等病理檢查，并結合臨床常規(guī)檢查確診為惡性胸腔積液; 84例良性胸腔積液為對照組，男50例，女34例，平均(60.35±6.81)歲，根據(jù)病史、臨床表現(xiàn)、體征、血生化、胸水生化、腺苷脫氨酶(ADA)、抗酸染色等實驗室檢查及肺功能、胸片、B超及對治療的反應等，綜合確診為良性胸腔積液。

1.2主要儀器及試劑

全自動DNA圖像分析儀、TDZ5-WS多管架自動平衡離心機、Motic BA600 Mot顯微鏡系統(tǒng)、lu-07生物芯片閱讀器、電熱恒溫水箱5648、恒溫搖床HDYC-2004B、Feulgen-thionin專用染液。

1.3方法

所有患者于治療前行標準胸腔穿刺術，抽取胸水10 mL，均分為2管于2 h內送檢，同時抽取外周血2 mL送檢。胸水脫落細胞DNA倍體分析采用全自動細胞DNA分析系統(tǒng)，測定細胞核積分光密度(IOD)，按照公式DNA指數(shù)(DI) =被測細胞核DNA的IOD值/正常細胞核DNA的IOD值，計算胸水脫落細胞DI。CEA采用蛋白芯片－化學發(fā)光法進行檢測，將CEA的單克隆抗體固定在膜上制備成蛋白芯片，利用CEA的酶標記抗體來測定血清和胸水中CEA的濃度，計算胸水CEA與血清CEA的比值。

1.4判斷標準

正常細胞的DI =1，DI＞2.5提示細胞有癌變可能。根據(jù)文獻［6］標準: (1)有3個或3個以上DI＞2.5的細胞; (2)可識別的異倍體峰; (3)異常細胞增生＞10%。滿足3條中的1條或以上者，判定為胸水脫落細胞DNA倍體(+)，反之則為(－)。胸水CEA/血CEA＞1為(+)，＜1為(－)。胸水脫落細胞DNA倍體分析和胸水CEA與血CEA比值2種方法聯(lián)合判斷的標準為只要有1種方法結果呈現(xiàn)(+)即診斷為(+) ; 2種方法獨立診斷的標準是必須兩項同時陽性。

1.5統(tǒng)計學分析

采用SPSS(V13.0)統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差(±s)表示，計算靈敏度、特異度和youden指數(shù)，組間比較采用卡方檢驗和u檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1胸水脫落細胞DNA倍體或胸水CEA與血清CEA比值

胸水脫落細胞DNA倍體分析顯示，試驗組41例患者陽性35例，陰性6例，陽性率85.37 %;對照組84例患者陽性28例，陰性56例，陽性率33.33%; 2組陽性率比較有統(tǒng)計學意義(χ2= 14.47，P＜0.05)。試驗組41例患者胸水CEA與血清CEA比值陽性32例，陰性9例，陽性率78.05%;對照組84例患者胸水CEA與血清CEA比值陽性19例，陰性65例，陽性率22.62%; 2組陽性率比較有統(tǒng)計學意義(χ2=19.32，P＜0.05)。見表1和表2，表2結果提示，2種方法獨立應用時，只有兩項結果陽性時才能診斷惡性胸水，試驗組41例患者陽性28例，可能漏診。

表1　胸水脫落細胞DNA倍體或胸水CEA/血清CEA檢測結果Tab.1　Results of DNA ploidy analysis of hydrothorax shedding cells and CEA ratio of hydrothorax/blood

表2　胸水脫落細胞DNA倍體和胸水CEA與血清CEA比值聯(lián)合檢測結果Tab.2　Results of DNA ploidy analysis of hydrothorax shedding cells combined with CEA ratio of hydrothorax/blood

2.2靈敏度、特異度及Youden指數(shù)

胸水脫落細胞DNA倍體分析或胸水CEA與血清CEA比值單獨應用診斷惡性胸腔積液均有較高的靈敏度和特異度，且2種方法靈敏度、特異度及youden指數(shù)比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見表3。胸水脫落細胞DNA倍體分析和胸水CEA與血清CEA比值測定2種方法聯(lián)合診斷惡性胸水的特異度、靈敏度均高于2種方法單獨應用時，說明2種方法聯(lián)合應用更能提高對惡性胸水的診斷靈敏度和特異度，具有更高的診斷價值，可減少漏診，見表4。

表3　胸水脫落細胞DNA倍體分析和胸水CEA與血清CEA比值單獨診斷惡性胸水的靈敏度、特異度及Youden指數(shù)Tab.3　The sensitivity，specificity and youden＇s index of DNA ploidy analysis of hydrothorax shedding cells and CEA ratio of hydrothorax/blood in their separate diagnosis

表4　胸水脫落細胞DNA倍體分析和胸水CEA與血清CEA比值診斷惡性胸水的效果評價Tab.4　Effect evaluation of DNA ploidy analysis of hydrothorax shedding cells and CEA ratio of hydrothorax/blood in diagnosis of malignant pleural effusion

3　討論

胸腔積液是臨床常見疾病，導致胸腔積液的原因很多，按病因可分為良性和惡性，兩者的鑒別非常重要。胸水脫落細胞檢查是診斷惡性胸腔積液的“金標準”，但因靈敏度較低，限制了該方法在臨床上的運用。正常人體細胞具有較恒定的DNA含量，為整倍體細胞，而惡性腫瘤組織發(fā)生染色體突變，導致異倍體細胞的出現(xiàn)，所以測定細胞DI，可以幫助發(fā)現(xiàn)異常的細胞，而且DI值越高，生存期越短，提示異倍體腫瘤的增值活性越高，預后越差［7］。CEA是目前研究最廣泛的腫瘤標志物之一，在正常人血清中含量很低。CEA是一種大分子的糖蛋白，腫瘤發(fā)生胸膜轉移時合成的CEA釋放到胸水中，不易進入血循環(huán)，因此其在胸水中出現(xiàn)較早，含量也較血清水平高。本研究發(fā)現(xiàn)，胸水脫落細胞DNA倍體分析和胸水CEA與血清CEA比值測定2種方法的陽性率，試驗組高于對照組(P＜0.05)，說明這2種方法在臨床上均可用以診斷惡性胸腔積液。本研究對照組中有28例患者胸水脫落細胞DNA倍體分析為異倍體，而臨床診斷為良性疾病，出現(xiàn)假陽性可能原因是: (1)反應性間皮細胞增生，使G2M期細胞百分數(shù)增高，造成假陽性; (2)標本制備不當造成染色體機械缺損誤差。試驗組中有6例患者未檢測到倍體細胞，出現(xiàn)假陰性的原因可能是: (1)腫瘤細胞的分化程度較高，二倍體腫瘤或近二倍體腫瘤的發(fā)生; (2)胸腔積液中惡性細胞含量少，有抽樣誤差可能性。本研究顯示胸水脫落細胞DNA倍體分析對惡性胸腔積液的診斷靈敏度為85.37%，特異度為66.67%，與文獻報道的相近［8］。文獻報道，以胸水與血清CEA比值＞1為界診斷惡性胸腔積液的靈敏度約為40%～80%，特異度為70%～88%［9］，本研究顯示胸水與血清CEA比值測定診斷惡性胸腔積液的靈敏度為78.05%，特異度為77.38%，與其基本一致，但2種方法比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。臨床上為了提高篩檢效果，可采用多項篩檢試驗檢查同一受試對象，以提高篩檢試驗的靈敏度和特異度，這種方式稱為聯(lián)合檢驗，本研究顯示，聯(lián)合胸水脫落細胞DNA倍體分析和胸水與血清CEA比值測定2種方法診斷惡性胸腔積液的靈敏度為96.79%，特異度為68.29%。Youden指數(shù)為0.48，較2種方法獨立應用時有較好的臨床價值。

4　參考文獻

［1］Osterheld MC，Liette C，Anca M.Image cytometry: an

aid for cytological diagnosis of pleural effusions［J］.Diagn Cytopathol，2005(3) : 173－176.

［2］郭立光，張立波，陳功，等.DNA倍體分析系統(tǒng)鑒別良惡性胸腔積液的價值［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2008 (2) : 183－185.

［3］Chen LM，Lazcano O，Katzmann JA，et al.The role of conventional cytology，immunocytochemistry，and flow cytometric DNA ploidy in the evaluation of body cavity fluids: a prospective study of 52 patients［J］.Am J Clin Pathol，1998(109) : 712－721.

［4］況成明.三種腫瘤標記物聯(lián)合檢測對肺癌臨床應用價值的探討［J］.中國腫瘤臨床，2000(5) : 388.

［5］王新榮.胸水ADA、CEA、CA125、CA153水平在結核性與惡性胸水中的表達與意義［J］.中國老年學雜志，2014(12) : 3290－3292.

［6］Motherby H，Nadjari B，F(xiàn)riegel P，et al.Diagnostic accuracy of effusion cytology［J］.Diagn Cytopathol，1999 (6) : 350－357.

［7］胡艷平，賀蘭湘，于丁，等.非小細胞肺癌DNA含量與其生物學行為關系的初步研究［J］.中華腫瘤雜志，2003(1) : 55－58.

［8］李德昌，任力，李煒.全自動細胞圖像分析系統(tǒng)在良惡性胸水診斷中的價值［J］.臨床軍醫(yī)雜志，2010(6) : 1024－1026.

［9］Radjenovic-Petkovic T，Pejcic T，Borovac D，et al.Diagnostic value of CEA in pleural fluid for differential diagnosis of benign and malign pleural effusion［J］.Med Arh，2009(3) : 141－142.

(2015－05－08收稿，2015－12－24修回)

中文編輯:戚璐;英文編輯:劉華

Diagnostic Value of DNA Ploidy Analysis of Hydrothorax Shedding Cells Combined with Ratio of Pleural Fluid CEA to Serum CEA in Diagnosis of Malignant Pleural Effusion

MA Wen1，DU Juan1，ZHANG Xianming1，WANG Yan2
(1.Departments of Respiratory，the Affiliated Hospital of Guizhoug Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China;2.Central Laboratory，Departments of Respiratory，the Affiliated Hospital of Guizhoug Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China)

［Abstract］Objective: To explore the diagnostic value of DNA ploidy analysis of hydrothorax shedding cells by automatic DNA image cytometry and the ratio of pleural fluid CEA to serum CEA in diagnosis of malignant pleural effusion.Methods: Forty-one cases of patients with malignant pleural effusions were enrolled in experimental group while 84 cases of patients with benign pleural effusion in control group.The serum and pleural fluid specimens were collected from two groups and DNA ploidy analysis of hydrothorax shedding cells was conducted by automatic DNA image cytometry.The levels of CEA were determined by protein chip-chemoluminescence and the ratio of pleural fluid CEA to serum CEA were calculated.Then，the sensitivity，specificity and youden＇s index were compared between two groups when single method or two methods combined were adopted.Results: The positive rates of DNA ploidy analysis of hydrothorax shedding cells and the ratio of pleural fluid CEA to serum CEA in experimental group were significantly higher than their counterparts in control group (P＜0.05).The sensitivity of the DNA ploidy analysis of hydrothorax shedding cells in diagnosis of malignant pleural effusion was 85.37%，the specificity was 66.67%，and the youden＇s index was 0.52.The sensitivity of the ratio of pleural fluid CEA to serum CEA in diagnosis of malignant pleural effusion was 78.05%，the specificity was 77.38%，and the youden＇s index was 0.55.There was no statistical difference be-book=210,ebook=91tween the two methods (P＞0.05).The sensitivity of the DNA ploidy analysis combined the CEA ratio of hydrothorax/blood was 66.63%，the specificity was 92.46%，and the youden＇s index was 0.59.Conclusion: The DNA ploidy analysis of hydrothorax shedding cells combined the CEA ratio of hydrothorax/blood may have a better diagnostic value in distinguish benign pleural effusion from malignant pleural effusion.

［Key words］pleural fluid; shedding cells; DNA; ploidy analysis; carcinoembryonic antigen

［中圖分類號］R734.2

［文獻標識碼］A

［文章編號］1000-2707(2016) 02-0209-04