劉詠梅，趙　蓉，李艷玲，李　玲，李勇冀

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，貴州貴陽　550004; 2.貴州醫(yī)科大學(xué)附院中心實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽　550004; 3.貴州市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，貴州貴陽　550004)

?

MICM分型對未治型白血病的診斷價(jià)值＊?

劉詠梅1，2，趙蓉2*，李艷玲2，李玲3，李勇冀2

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，貴州貴陽550004; 2.貴州醫(yī)科大學(xué)附院中心實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽550004; 3.貴州市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，貴州貴陽550004)

［摘要］目的:分析骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)(M)、細(xì)胞免疫學(xué)(I)、細(xì)胞遺傳學(xué)(C)和分子生物學(xué)(M)聯(lián)合方法(MICM分型)在白血病診斷中的價(jià)值。方法:收集196例白血病患者骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)及分子生物學(xué)檢查結(jié)果，比較分析單一的形態(tài)學(xué)分型、單一細(xì)胞免疫學(xué)分型、形態(tài)學(xué)聯(lián)合細(xì)胞免疫學(xué)分型與MICM分型4種檢查方法對白血病診斷的符合率。結(jié)果: 196例患者，單一形態(tài)學(xué)分型、單一細(xì)胞免疫學(xué)分型、形態(tài)學(xué)聯(lián)合細(xì)胞免疫學(xué)分型與MICM分型4種方法對白血病的診斷符合例數(shù)分別為158、159、182例、196例，符合率分別為80.6%、81.1%、92.8%、100%;形態(tài)學(xué)聯(lián)合細(xì)胞免疫學(xué)分型比單一細(xì)胞形態(tài)學(xué)或單一細(xì)胞免疫學(xué)分型診斷符合率高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01) ; MICM分型比形態(tài)學(xué)聯(lián)合細(xì)胞免疫學(xué)分型診斷符合率高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論: MICM分型可提高白血病的診斷率。

［關(guān)鍵詞］白血病;細(xì)胞;形態(tài)學(xué);免疫學(xué)技術(shù);染色體;分子生物學(xué)

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間: 2016－02－23網(wǎng)絡(luò)出版地址: http: / /www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160223.2040.044.html

白血病是一類造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病，克隆性白細(xì)胞因?yàn)樵鲋呈Э?、分化障礙及凋亡受阻等機(jī)制在骨髓和其他造血組織中大量增殖累積，并浸潤其他組織和器官。我國白血病的發(fā)病率在惡性腫瘤中占第六位(男性)和第八位(女性)［1］。白血病的診斷基礎(chǔ)是骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)(morphology，M)檢查，但往往由于細(xì)胞形態(tài)不典型而難以明確診斷，2000年以來，細(xì)胞免疫學(xué)(inmunology，I)、細(xì)胞遺傳學(xué)(cytogenetics，C)和分子生物學(xué)(molecular biology，M)技術(shù)越來越廣泛用于白血病細(xì)胞表面特異性分化抗原、特異性染色體改變及融合基因的檢測，很好地彌補(bǔ)了白血病診斷時(shí)形態(tài)學(xué)檢查的不足，逐漸形成了WHO白血病骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)(M)、細(xì)胞免疫學(xué)(I)、細(xì)胞遺傳學(xué)(C)和分子生物學(xué)(M)聯(lián)合方法(MICM分型)的診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］。本研究對196例初發(fā)未經(jīng)治療的白血病患者的MICM分型診斷結(jié)果進(jìn)行比較，報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1材料

收集2014年1～12月門診或住院初診白血病病例196例，男性115例，女性81例，年齡1～81歲，平均41歲。所有患者均于治療前抽取骨髓完成細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)及分子生物學(xué)檢查。

1.2骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查

于髂前上棘或髂后上棘處骨髓穿刺并涂片，常規(guī)瑞氏、過氧化物酶(POX)、過碘酸雪夫氏(PAS)、酸性α-乙酸萘酚酯酶(ANAE)及中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(NAP)染色，對白血病細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)分型診斷，診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［3］。

1.3細(xì)胞免疫學(xué)檢查

取肝素抗凝骨髓液2～3 mL，常規(guī)分離單個(gè)核細(xì)胞，采用活細(xì)胞間接熒光標(biāo)記，所有單抗購自美國貝克曼公司和BD公司，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行(FACS Calibur，BD公司)檢測，按說明書操作。判斷標(biāo)準(zhǔn):常規(guī)單抗包括淋系(T、B)、髓系及干組系，淋系及髓系抗原＞20%、CD34抗原＞10%為陽性，分型判斷根據(jù)2015年中國免疫學(xué)會血液免疫分會《急性白血病免疫分型中國專家共識》［4－5］。

1.4細(xì)胞遺傳學(xué)檢查

取肝素抗凝骨髓液2～5 mL加入到培養(yǎng)液中，37℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，加入秋水仙酰胺應(yīng)用液配成細(xì)胞懸液，制片染色、水洗鏡檢，采用R顯帶技術(shù)、根據(jù)《國際人類細(xì)胞遺傳學(xué)國際命名法(ISCN)》進(jìn)行核型分析，至少2個(gè)細(xì)胞有同樣的染色體增加或結(jié)構(gòu)異常，或至少3個(gè)細(xì)胞有一致的染色體丟失定義為一個(gè)克?。?］。

1.5分子生物學(xué)檢查

取肝素抗凝骨髓液2～5 mL，分離單個(gè)核細(xì)胞，提取總RNA，并通過微量紫外分光光度儀測定RNA濃度及純度，用逆轉(zhuǎn)錄引物將RNA特異性逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成為cDNA，然后應(yīng)用多重巢式PCR進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠中電泳，采用凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果、Tanon MP軟件攝取圖像［7］。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料用率(%)表示，組間比較用卡方檢驗(yàn)，以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1分型結(jié)果

196例患者骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞免疫學(xué)分型均以急性髓細(xì)胞性白血病(AML)檢出率最高，其次是急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)、慢性粒細(xì)胞性白血病(CML)、急性白血病(AL)未分型及混合型。196例患者中，有52例檢出染色體核型異常，總檢出率為26.5%; 61例檢出融合基因，總檢出率為31.1%。見表1。

表1　白血病MICM分型結(jié)果Tab.1 MICM typing result of various types of leukemia

2.2診斷符合率

單一細(xì)胞形態(tài)學(xué)分型、單一細(xì)胞免疫學(xué)分型、細(xì)胞形態(tài)學(xué)聯(lián)合免疫學(xué)分型及MICM分型相比較，診斷符合例數(shù)分別為158、159、182例、196例，符合率分別為80.6%、81.1%、92.8%、100%。見表2。

表2　白血病MICM分型診斷符合情況(n，%)Tab.2 Analysis of diagnostic accordance rate of MICM typing in 196 cases of leukemia

3　討論

白血病細(xì)胞是造血細(xì)胞在某一分化階段的大量積累，通過對這一群細(xì)胞的檢驗(yàn)分析對白血病進(jìn)行正確的分型，對指導(dǎo)臨床治療與預(yù)后判斷有著重要的意義［8］。骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)分型是診斷白血病應(yīng)用最廣泛的分型及診斷方法。本組196例患者形態(tài)學(xué)分型以AML檢出率最高，其次是ALL; AML 中M2檢出率最高，這與楊崢等［9］報(bào)道不相符，可能與地域、環(huán)境及遺傳等因素有關(guān)。形態(tài)學(xué)是診斷白血病的基礎(chǔ)，本組資料中通過形態(tài)學(xué)分型有13 例AL未診斷類型，說明形態(tài)學(xué)分型對未分化型白血病及一些形態(tài)學(xué)不典型白血病的診斷具有一定局限性。白血病細(xì)胞免疫分型是以流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行，原理是應(yīng)用多種熒光標(biāo)記單克隆抗體對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記檢測，可供檢測的標(biāo)本種類有骨髓、外周血、腦脊液及其他體液，既克服了形態(tài)學(xué)分型方法上的缺點(diǎn)，又具有簡單快速、計(jì)數(shù)細(xì)胞量大、靈敏度高及結(jié)果準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)，可提高白血病診斷的靈敏度及分型的準(zhǔn)確性。流式細(xì)胞學(xué)檢測能分辨出1× 103～1×104個(gè)細(xì)胞中的1個(gè)白血病細(xì)胞，一般鑒定細(xì)胞性質(zhì)準(zhǔn)確率可超過90%。流式細(xì)胞術(shù)對血液有核細(xì)胞胞膜，細(xì)胞核特定生物大分子的分析，可精確判定其來源、分類及分化情況等。本組資料顯示細(xì)胞免疫學(xué)分型中AML檢出率最高，以M2多見，其次是ALL、CML、未分型及混合型;細(xì)胞免疫學(xué)分型診斷符合率為81.1%，比張?jiān)茖帲?0］的診斷符合率相比稍低，可能與標(biāo)本采集、人員工作經(jīng)驗(yàn)有一定的關(guān)系。本研究顯示，形態(tài)學(xué)聯(lián)合細(xì)胞免疫學(xué)分型的診斷符合率為92.8%，較單一形態(tài)學(xué)分型或單一免疫學(xué)分型高(P＜0.01)，說明白血病形態(tài)學(xué)分型與細(xì)胞免疫學(xué)分型相輔相成，兩者聯(lián)合診斷可以提高白血病分型診斷率。本研究還顯示，MICM分型的診斷符合率高于形態(tài)學(xué)聯(lián)合細(xì)胞免疫學(xué)分型(P＜0.01)，196例白血病患者檢出52例染色體核型異常，其中以M3的檢出率最高，其次是M2和ALL;檢出61例融合基因，以M2、M3檢出率最高。說明在白血病的診斷中，MICM分型不但能提高白血病的診斷率，而且對治療方案的選擇及判斷預(yù)后提供重要依據(jù)。

4　參考文獻(xiàn)

［1］譚齊賢，張樹平.臨床血液學(xué)和血液檢驗(yàn)［M］.3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006: 192.

［2］李順義.重視WHO(2008)造血與淋巴組織腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)的普及和推廣［J］.疑難病雜志，2012(8) :573－574.

［3］張之南，沈悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)［M］.3版.北京:科學(xué)出版社，2007: 106－121.

［4］劉艷榮，于弘，常艷，等.四色熒光標(biāo)記抗體在白血病免疫分型中的應(yīng)用及意義［J］.中華實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2002(5) : 423－427.

［5］中國免疫學(xué)會血液免疫分會臨床流式細(xì)胞術(shù)學(xué)組.四色流式細(xì)胞術(shù)用于急性白血病免疫分型的中國專家共識［J］.中華血液學(xué)雜志，2015(4) : 265－271.

［6］谷芳娜，李國輝，劉利.急性髓系白血病染色體核型及免疫表型分布及治療后臨床療效分析［J］.昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015(3) : 113－116.

［7］李志剛，吳敏媛，趙瑋，等.多重RT-PCR方法同時(shí)檢測29種白血病融合基因［J］.中華血液學(xué)雜志，2003 (5) : 256－258.

［8］劉曉紅，季海生.81例急性髓系白血病形態(tài)學(xué)與免疫學(xué)分型分析［J］.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床，2009(5) : 69－71.

［9］楊崢，莫武寧，李山.505例白血病應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)免疫分型與FAB分型的結(jié)果分析［J］.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2010(8) : 1238－1241.

［10］張?jiān)茖?，曹峰，陳靜.158例急性白血病形態(tài)學(xué)與免疫學(xué)分型的比較［J］.海南醫(yī)學(xué)，2011(23) : 28－31.

(2015－08－26收稿，2015－12－22修回)

中文編輯:戚璐;英文編輯:劉華

Diagnostic Value of MICM typing in Leukemia

LIU Yongmei1，2，ZHAO Rong2，LI Yanling2，LI Ling3，LI Yongji2
(1.Department of Medical Laboratory，Guizhou Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China; 2.Central Laboratory，the Affiliated Hospital of Guizhou Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China ; 3.Clinical Laboratory，The Third People＇s Hospital of Guizhou Province，Guiyang 550008，Guizhou，China)

［Abstract］Objective: To explore the clinical value of MICM typing in the diagnosis of leukemia.Methods: 196 cases of patients with diagnosed leukemia were enrolled in this study，and the experimental results of cell morphology，cellular immunology，cytogenetics and molecular biology of their bone marrow cell were collected.4 examination methods including single cell morphology typing，single cellular immunology typing，cell morphology combined with cellular immunology typing and MICM typing were compared for diagnosis accuracy of leukemia.Results: In 196 cases of patients with leukemia，the diagnostic accordance rate of single cell morphology typing was 80.6% (158/196)，the diagnostic accordance rate of single cellular immunology typing was 81.1% (159/196)，the diagnostic accordance rate of cell morphology combined with cellular immunology typing was 92.8% (182/196) and the diagnostic accordance rate of MICM typing was 100% (196/196).The diagnostic accordance rate of cell morphology combined with cellular immunology typing was significantly higher than that of single cell morphology typing or single cellular immunology typing (P＜0.01) while the diagnostic accordance rate of MICM typing was significantly higher than that of cell morphology combined with cellular immunology typing (P＜0.01).Conclusion: MICM typing can improve the diagnostic rate of leukemia.

［Key words］leukemia; cell; morphology; immunology; chromosome; molecular biology

*通信作者E-mail: 546879267@ qq.com

［中圖分類號］R557; R446

［文獻(xiàn)標(biāo)識碼］A

［文章編號］1000-2707(2016) 02-0231-03