韓秀秀，馬　斌，姜　如，王亞云

(北京中醫(yī)藥大學東直門醫(yī)院腦病科，北京 100700)

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缺血性中風病證候生物樣本庫標準化建設(shè)與管理

韓秀秀，馬斌*，姜如，王亞云

(北京中醫(yī)藥大學東直門醫(yī)院腦病科，北京 100700)

摘要：標準化生物樣本庫是實現(xiàn)科研成果快速轉(zhuǎn)化并應(yīng)用到臨床實踐的橋梁，是實現(xiàn)轉(zhuǎn)化醫(yī)學的保證。建設(shè)標準化缺血性中風病證候生物樣本庫十分必要；缺血性中風病證候生物樣本庫的標準化建設(shè)將為中醫(yī)藥領(lǐng)域建設(shè)中醫(yī)特色性生物樣本庫提供參考經(jīng)驗，并推進中醫(yī)藥領(lǐng)域生物樣本庫的建設(shè)進程。

關(guān)鍵詞：缺血性中風?。晦D(zhuǎn)化醫(yī)學；生物樣本庫

人體生物樣本資源是醫(yī)學生命科學研究的基石，是人類疾病轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究的重要橋梁。目前世界范圍內(nèi)大興生物樣本庫標準化建設(shè)之風，旨在規(guī)范化收集海量生物樣本資源，搶占轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究的制高點。伴隨我國人口經(jīng)濟水平的提高及人口老齡化現(xiàn)象的加劇，缺血性中風病已成為危害我國中老年人健康和生命的主要疾病，但是我國目前仍然缺乏高質(zhì)量的缺血性中風病生物樣本庫，導(dǎo)致大量中風病樣本資源浪費。中醫(yī)藥作為我國的傳統(tǒng)醫(yī)學，在中風病的預(yù)防、治療、恢復(fù)中發(fā)揮重要作用，如何充分發(fā)揮中醫(yī)藥對中風病的診療價值促進中西醫(yī)交融以改善中風病的臨床結(jié)局，重點在于中風病樣本資源的海量收集，而建立“病證結(jié)合”的中醫(yī)特色性缺血性中風病證候生物樣本庫是解決問題的關(guān)鍵。

生物樣本庫又稱生物銀行，主要是指標準化收集、處理、儲存及應(yīng)用健康或疾病生物體的生物大分子、細胞、組織和器官等樣本(包括人體器官組織、全血、血漿、血清、生物體液或經(jīng)處理過的生物樣本 (DNA、RNA、蛋白等) 以及與這些生物樣本相關(guān)的臨床、病理、治療、隨訪、知情同意等資料及其質(zhì)量控制、信息管理與應(yīng)用系統(tǒng)[1]。一個高質(zhì)量、標準化的生物樣本庫，可為醫(yī)學研究提供穩(wěn)定可靠的樣本資源，是研究成果快速轉(zhuǎn)化應(yīng)用到臨床、實現(xiàn)轉(zhuǎn)化醫(yī)學的重要保證。

1缺血性中風病證候生物樣本庫建設(shè)背景

1.1國內(nèi)外生物樣本庫的發(fā)展現(xiàn)狀早在20世紀末，美國、歐洲國家以及國際衛(wèi)生組織開始重視并推動標準化生物樣本庫的建設(shè)。1987年美國國家癌癥研究所建立人類組織協(xié)作網(wǎng)(cooperation human tissue network CHTN)，現(xiàn)已收集數(shù)千名患者不同組織器官的標本20萬份以上[2]。隨后英國、加拿大、日本、澳大利亞、瑞典等國家都相繼建立國家級生物樣本庫信息資源庫[3]。國際生物和環(huán)境樣本庫協(xié)會(Internationa Society for Biological and Environmental Repositories,ISBER)定期發(fā)布樣本庫標準化建設(shè)實踐指南以規(guī)范樣本庫建設(shè)的各個環(huán)節(jié)，并于2012年發(fā)布了第3版實踐指南[4]。目前，國際生物樣本庫已向著標準化與規(guī)范化、專業(yè)化與智能化、產(chǎn)業(yè)化與信息化的方向發(fā)展[5]。在國際生物醫(yī)學研究發(fā)展趨勢的影響下,我國逐漸開始推進大規(guī)模的生物樣本庫建設(shè)。如1996年建立的北京大學臨床學院標本庫，2005年北大醫(yī)院建立的人類血液樣本庫，2008年建立的國家肝癌樣本庫,2010年北京啟動重大疾病臨床數(shù)據(jù)和樣本數(shù)據(jù)庫等[6]。中國醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會生物樣本庫分會于2011年發(fā)布《中國醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會生物樣本庫標準(試行)》[7]初步形成了國內(nèi)樣本庫的建設(shè)標準。

目前，世界范圍內(nèi)都在投入大量資源建設(shè)生物樣本庫。中醫(yī)藥行業(yè)領(lǐng)域生物樣本庫建設(shè)起步較晚，并存在樣本、臨床信息采集缺乏規(guī)范化等部分問題，科學研究是嚴謹?shù)模瑯颖編斓慕ㄔO(shè)也必須標準化，因此本領(lǐng)域的生物樣本庫建設(shè)亟需得到發(fā)展和完善。

1.2缺血性中風病中醫(yī)科學研究發(fā)展需要目前，尋找、發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用有價值的生物學指標已成為國內(nèi)外中醫(yī)學研究的熱點。缺血性中風病急性期的相關(guān)生物學指標因其與腦缺血再灌注、血腦屏障破壞、腦水腫等腦梗死后病理過程密切相關(guān)、從微觀層面上反映了疾病病情的變化，而受到中風病學者的廣泛研究[8-9]。研究方向主要為生物學指標與中風病證候診斷、臨床療效評價的相關(guān)性，盡管發(fā)現(xiàn)諸多中風病證候相關(guān)的生物學指標[10-12]，但是目前仍然缺乏特異、敏感、便于實驗室檢測和臨床應(yīng)用的證候診斷、療效評價性生物學指標[13-14]。如何篩選符合要求的生物學指標，研究關(guān)鍵問題在于建設(shè)高質(zhì)量的、規(guī)范的、大規(guī)模的以疾病和證候為核心的缺血性中風病證候生物樣本庫，以保證中風病科學研究所需要的海量生物樣本。

1.3缺血性中風病證候生物樣本庫的建設(shè)基礎(chǔ)生物樣本庫的價值不只在于對樣本的采集及高質(zhì)量的冷凍和存儲，更在于其對于臨床信息的客觀、全面的采集和保存[15]。建設(shè)中醫(yī)藥生物樣本庫不僅要收集受試者一般資料、診療情況等信息，同時重點在于中醫(yī)特色性“望、聞、問、切”四診信息的標準化、準確性、一致性采集。四診信息是證候診斷、證候本質(zhì)研究、中藥復(fù)方研究、臨床療效評價等工作的基礎(chǔ)[16]，其采集主要依靠醫(yī)生的目測觀察、語言描述等來獲取，并受醫(yī)生知識水平、經(jīng)驗累積等多方面的影響，使得信息的精準性、重復(fù)性、可操作性較差[17]。因此如何統(tǒng)一、客觀、規(guī)范的采集四診信息并進行量化以獲取重復(fù)性、操作性、外推性強的樣本資料是中醫(yī)藥生物樣本庫建設(shè)的難點。

目前國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃“缺血性中風病證結(jié)合的診斷標準與療效評價體系研究”(973計劃)制作了《缺血性中風證候要素診斷量表》《缺血性中風證候評價量表》[18]《中醫(yī)四診信息調(diào)查表》和《中風病臨床信息采集規(guī)范》,上述量表通過臨床使用，證實其可以提高中風病四診信息采集的標準性、證候診斷的一致性。這為缺血性中風病四診信息的規(guī)范化采集提供了工具，也為構(gòu)建缺血性中風病證候生物樣本庫提供了條件。

總之，構(gòu)建缺血性中風病證候生物樣本庫不僅是形勢發(fā)展的需要，同時是中風病行業(yè)發(fā)展的需要。湖北省中醫(yī)院于2010年起建立了肝病標本庫，現(xiàn)已形成一定規(guī)模，為建立中醫(yī)藥領(lǐng)域生物樣本庫積累了一定的經(jīng)驗。構(gòu)建缺血性中風病證候生物樣本庫需要結(jié)合中醫(yī)藥“病證結(jié)合”的自身特點、借鑒生物樣本庫成功運作的經(jīng)驗，同時嚴格按照國內(nèi)外制定的生物樣本庫建設(shè)標準，形成缺血性中風病證候生物樣本庫的標準化建設(shè)、管理體系。

2中風病生物樣本庫的標準化建設(shè)、管理

2.1樣本庫的標準化建設(shè)

2.1.1基礎(chǔ)設(shè)施、條件生物樣本庫需具有獨立空間，專屬庫房，庫房供暖、通風、空調(diào)等設(shè)施完善，同時配有雙電源、冷鏈監(jiān)控報警系統(tǒng)；具備樣本取材、運輸?shù)膶僭O(shè)施，樣本貯存使用裝有溫度監(jiān)測系統(tǒng)的超低溫冰箱(-80 ℃)、液氮灌，并定期對其維護、保養(yǎng)，制定冰箱故障應(yīng)急預(yù)案；樣本庫配備裝有樣本管理軟件的計算機，對冰箱實施可視化管理，且軟件設(shè)置痕跡稽查、權(quán)限限制，設(shè)置日志目錄、數(shù)據(jù)自動備份與恢復(fù)等功能保證系統(tǒng)數(shù)據(jù)的安全；此外樣本庫有條碼打印機、掃描槍、耐低溫標簽等設(shè)備用于樣本的標識存儲。

2.1.2樣本及信息采集、存儲高質(zhì)量的生物樣本庫應(yīng)該包括豐富的樣本資源和完整的樣本相關(guān)信息，中醫(yī)藥領(lǐng)域生物樣本庫的建設(shè)應(yīng)根據(jù)中醫(yī)學證候動態(tài)變化的時空性，進行樣本和臨床信息的動態(tài)采集。標準化采集處理獲取高質(zhì)量樣本是獲得穩(wěn)定、可靠科研成果的保障。缺血性中風病證候生物樣本庫主要存儲血清等血液樣本，根據(jù)國內(nèi)外生物樣本庫構(gòu)建中血液標本的采集規(guī)范制定相應(yīng)采集處理的標準化操作流程，所有步驟均由專職人員操作,1)簽署知情同意：采集前，研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準，并同樣本捐獻者簽署知情同意書；2)血液樣本采集：使用真空采血管(抗凝管)采集受試者的空腹外周靜脈血5 mL；3)血液樣本處理：常溫下按照3 500 r/min，離心10 min，留取血清分別裝入凍存管中，每管內(nèi)裝300 μL血清；4)樣本編碼：每個樣本制定唯一的識別碼以條形碼和可讀信息(如患者ID號及采集時間等基本信息)打印在耐低溫標簽上，分別粘貼在凍存管的管蓋和管身；5)樣本存儲：掃描二維碼后樣本入庫，并使用樣本管理軟件追蹤樣本的存儲位置及相關(guān)信息。樣本相關(guān)信息的規(guī)范化采集包括,1)一般資料：人口信息、個人史、家族史等；2)臨床信息：理化檢查資料、影像學資料、診療資料等；3)病證診斷及評價信息:動態(tài)利用《缺血性中風病證候要素診斷量表》進行證候診斷、綜合利用中風病中西醫(yī)量表進行“病證結(jié)合”評價，疾病層面采用美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)、Barthel指數(shù)(BI)、臨床結(jié)局評價量表(PRO)等，證候?qū)用娌捎谩度毖灾酗L證候評價量表》；4)隨訪信息：預(yù)后、生存等。全面客觀規(guī)范的收集生物樣本相關(guān)信息，構(gòu)建生物樣本臨床信息平臺。缺血性中風病證候生物樣本庫標準化建設(shè)管理流程，見圖1。

圖1　缺血性中風病證候生物樣本庫建設(shè)管理流程

2.2樣本庫的標準化管理及質(zhì)量控制樣本庫的標準化管理，1)設(shè)立人員編制相對固定的組織機構(gòu)，明確樣本倫理審核、知情同意、采集、處理、入庫、出庫、質(zhì)量管理等不同職位的人員職責，并根據(jù)職位需要定期進行相應(yīng)的標準化操作流程、信息化管理等培訓；2)制定統(tǒng)一的管理規(guī)范，從樣本的入庫到出庫必須做到有章可循[19]；3)信息化管理，借助信息化管理軟件對生物樣本庫進行實時監(jiān)測以保障生物樣本的安全、有序。樣本庫的質(zhì)量控制，1)在生物樣本采集入庫的全過程中嚴格遵循標準流程，嚴格控制樣本離體時間，減少樣本凍融次數(shù)，確保樣本的質(zhì)量；2)制定一套樣本質(zhì)量評估體系，如定期隨機抽檢機制：定期對樣本庫在存標本進行隨機抽樣盤庫，核對樣本信息是否準確、使用信息是否登記、存放位置是否正確等；質(zhì)量反饋機制：樣本庫所提供的樣本在使用后，對樣本使用者進行問卷調(diào)查并及時反饋樣本質(zhì)量信息和存在的問題，樣本庫工作人員就存在的問題及時分析、解決。

3基于中風病證候生物樣本庫的研究

3.1生物標志物的探索生物標志物對疾病的鑒別、診斷及療效評價具有重要的價值。探索從微觀層面揭示缺血性中風病疾病及證候本質(zhì)、證候演變規(guī)律的生物學指標，并將其納入中風病的早期診斷、疾病及證候療效評價體系中為中風病的辨證論治開辟可供參考的客觀依據(jù)，仍是目前中風病研究的熱點、難點。缺血性中風病證候生物樣本庫的建設(shè)將為生物標志物的探索提供龐大的資源儲備，為中風病臨床研究提供強有力的支撐。

3.2中風病創(chuàng)新藥物研發(fā)長期以來，中風病研究領(lǐng)域缺乏開展系統(tǒng)、持續(xù)的研究，中風病的藥物研發(fā)和落實轉(zhuǎn)化循證指南方面尤為缺少[20]。如何通過中風病的基礎(chǔ)研究和臨床實踐的緊密結(jié)合，提高實驗室到臨床醫(yī)療實踐的科學轉(zhuǎn)化效率，加快中風病醫(yī)藥研發(fā)等產(chǎn)出的步伐，降低中風病的死亡率、致殘率及醫(yī)療負擔是我們的共同目標。缺血性中風病證候生物樣本庫的建設(shè)可實現(xiàn)中風病研究從實驗室到臨床的連續(xù)、雙向、開放的研究過程，改變中風病目前研究現(xiàn)狀并深化其研究層次，缺血性中風病生物樣本庫作為“轉(zhuǎn)化醫(yī)學”基石，其構(gòu)建將為中風病新藥物、新制劑的研發(fā)提供技術(shù)支撐平臺。

4小結(jié)

我國是中風病大國，臨床樣本資源豐富，如果能有效集成我國中風病生物樣本資源、中醫(yī)藥人才和技術(shù)的優(yōu)勢，構(gòu)建中醫(yī)特色性高質(zhì)量缺血性中風病生物樣本庫，將為中風病轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究發(fā)展提供龐大的資源儲備，對于發(fā)揮中醫(yī)藥在中風病醫(yī)學研究領(lǐng)域的作用，提升中醫(yī)藥創(chuàng)新能力、推進中醫(yī)藥領(lǐng)域生物樣本庫標準化建設(shè)進程具有重大意義。中醫(yī)藥領(lǐng)域特色性生物樣本庫的建設(shè)將現(xiàn)代生命科學最前沿技術(shù)與中醫(yī)藥轉(zhuǎn)化醫(yī)學相結(jié)合，將為“中醫(yī)藥國際化”研究提供基石，推動我國在中醫(yī)藥理論研究和中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)中的發(fā)展。

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Standardization construction and management of ischemic stroke syndrome biobank

HAN Xiuxiu,MA Bin*,JIANG Ru,WANG Yayun

(Department of Cerebropathg Dongzhimen Hospital Affiliated to Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100700,China)

Abstract：Standardized biobank is a bridge to achieve the rapid transformation of scientific research to clinical practice,it is the guarantee of realization of translational medicine.This paper introduces the concept of the biobank,standardization construction situation of biobank at home and abroad,traditional Chinese medicine(TCM) scientific research development needs of stroke,and analyses the necessity to construct an ischemic stroke TCM syndrome biobank.At the mean time,this article expoundsthe basic content of standardized construction,management,quality control and application of the biobank.The ischemic stroke TCM syndrome biobank will provide reference experience about constructing biobanks with TCM characters in TCM field and promote the construction process of TCM biobanks.

Keywords：ischemic stroke;translational medicine;Biobank

收稿日期:(本欄責任編輯：張海洋2015-09-22)

文章編號：2095-6258(2016)02-0225-04

中圖分類號：R255.2

文獻標志碼：A

*通信作者：馬斌，男，博士，副主任醫(yī)師，電子信箱-mabin010@yahoo.com.cn

作者簡介：韓秀秀(1989-),女，碩士研究生，主要從事中醫(yī)腦病學研究。

基金項目：國家自然科學基金項目(81173230);國家科技重大專項資助項目(2009ZX09502-028)。

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2016.02.002