張 婷（中國(guó)刑事警察學(xué)院 遼寧 沈陽(yáng) 110035）

調(diào)味料中罌粟殼的主要生物堿LC-MS檢驗(yàn)

張 婷
（中國(guó)刑事警察學(xué)院 遼寧 沈陽(yáng) 110035）

罌粟作為一類(lèi)麻醉類(lèi)物質(zhì)被非法添加在調(diào)味料及食品中會(huì)危害人體的健康。建立罌粟殼中5種生物堿成分的液相色譜-質(zhì)譜檢驗(yàn)（LC-MS）方法，且用于調(diào)味料的檢測(cè)。結(jié)果表明該方法具有前處理操作簡(jiǎn)便，測(cè)定靈敏度高等特點(diǎn)，對(duì)食品安全的檢驗(yàn)和監(jiān)督有一定作用。

罌粟 調(diào)味料 LC-MS

食品中使用罌粟殼(籽)將被追究為違法行為。調(diào)味料中的罌粟殼(籽)常被研磨成細(xì)粉末狀而喪失外觀檢驗(yàn)的條件，因此，其化學(xué)物質(zhì)檢測(cè)是證明此類(lèi)違法行為的重要證據(jù)。有關(guān)罌粟殼中幾種生物堿的化學(xué)檢測(cè)方法包括有薄層色譜法、化學(xué)顯色法、電化學(xué)法、免疫分析法、以及氣相色譜法(GC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC/MS)、高效液相色譜(HPLC)和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)等儀器分析方法[1-4]。調(diào)味料中的罌粟殼物質(zhì)檢測(cè)容易受到調(diào)味料中其他組分的干擾，因此，本文選用液相色譜-串聯(lián)離子阱質(zhì)譜（LC-IT-MS/MS）建立了罌粟殼中生物堿的快速分析方法，同時(shí)在網(wǎng)絡(luò)及市場(chǎng)上隨機(jī)購(gòu)買(mǎi)了8批次的調(diào)料進(jìn)行方法的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。通過(guò)本文的研究以期對(duì)調(diào)味料中罌粟類(lèi)物質(zhì)的檢測(cè)提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 設(shè)備及材料

液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀；漩渦混合器；高速冷凍離心機(jī)。

食用調(diào)味料：麻辣火鍋底料，4批次（超市購(gòu)買(mǎi)）；調(diào)味粉料，4批次（網(wǎng)絡(luò)購(gòu)買(mǎi)）。

嗎啡、罌粟堿、那可汀、可待因、蒂巴因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均購(gòu)置于公安部物證鑒定中心，純度大于97%。

罌粟殼：現(xiàn)場(chǎng)繳獲的罌粟殼，每枚重約3.5克。

1.2 檢材前處理

取樣品1g加入2mL水將檢材稀釋，加0.2%鹽酸溶液3滴，加入環(huán)己烷0.5mL，渦旋混合，高速離心后，棄去有機(jī)相，取水相清液于另一個(gè)試管，加入pH8.9的緩沖溶液0.5mL，并用乙醚分2次進(jìn)行提取，合并提取液，經(jīng)N2氣流下濃縮揮干，加0.5mL流動(dòng)相溶液復(fù)溶，將溶液通過(guò)0.22μm濾膜過(guò)濾后，取10μL進(jìn)LC-MS分析。

1.3 儀器分析條件

液相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)由Finnigan的液相色譜儀和Thermo Fisher的LXQ離子阱質(zhì)譜儀組成。色譜條件：色譜柱Thermo Gold ODS C18（150mm×2.1mm，5μm）；色譜柱溫：35℃；流動(dòng)相組成及配比：甲醇0.2%，冰醋酸5mmol/L，醋酸銨水溶液（pH 4.0）（60∶40，v/v），流速為0.2mL/min。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子化源，正離子方式檢測(cè)（ESI+）二級(jí)質(zhì)譜全離子掃描，掃描范圍：50～450Da；毛細(xì)管溫度：350℃，霧化氣、加熱輔助氣和吹掃氣流量分別為30.00、8.00和2.00arb；源電壓、毛細(xì)管電壓和套管透鏡補(bǔ)償電壓分別為5.00kv、20.0v 和10.0v。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

取生物堿的標(biāo)準(zhǔn)溶液混合后進(jìn)樣分析，經(jīng)質(zhì)譜全掃描后確定5種生物堿基峰強(qiáng)度最高的母離子，在選定各自母離子后，進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜全掃描的檢測(cè)，其中嗎啡的母離子為m/z286，可待因的母離子為m/z 300，蒂巴因的母離子為m/z312，罌粟堿的母離子為m/z340，那可汀的母離子為m/z414，LC-MS分析的SRM色譜及質(zhì)譜圖如圖1，圖2所示。

圖1 5種生物堿的SRM色譜圖

圖2 5種生物堿的SRM質(zhì)譜圖

3 結(jié)果及討論

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

罌粟殼中含有20多種生物堿，其中罌粟堿、那可汀、嗎啡、可待因、蒂巴因5種具有代表性的生物堿含量較高。5種生物堿的含量不相同，在儀器中響應(yīng)能力和抗干擾能力不同，結(jié)合多種因素，最終建立了4種生物堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍，以生物堿的濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，以色譜的吸收峰面積為縱坐標(biāo)，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)表1。

表1 4種生物堿LC-MS檢測(cè)的線性范圍及檢出

3.2 檢材提取

調(diào)味品和麻辣火鍋湯料中油脂和色素含量較高，樣品的前處理方法以及雜質(zhì)去除的程度對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響。

近些年，食品中罌粟生物堿的提取方法中應(yīng)用固相萃取法較多，所用的固相萃取材料如ChemElut、PCX、MCX、PSA和無(wú)水硫酸鎂等，檢材經(jīng)過(guò)固相萃取材料后，收集洗脫液再濃縮或者直接過(guò)膜后分析測(cè)試。上述操作過(guò)程存在步驟較繁瑣，固相萃取材料價(jià)格高，各種生物堿極性差異富集效果不理想等問(wèn)題。

采用簡(jiǎn)便的液液提取方法是利用了生物堿具有在堿性條件下可溶于有機(jī)溶劑，在酸性條件下溶于水的反應(yīng)原理。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[5-10]，液液萃取法中有機(jī)萃取溶劑多選用混合溶劑，如三氯甲烷-甲醇（3∶1）溶液、三氯甲烷-異丙醇（4∶1）溶液、三氯甲烷-乙醇（9∶1）溶液等，但文獻(xiàn)方法中有機(jī)溶劑用量較大，提取和旋轉(zhuǎn)揮發(fā)等操作次數(shù)多，較為繁瑣。

因此，本文采用了冷凍去油及酸堿反提的液液提取法。在冷凍先去除部分油脂后，再在溶液中加酸性溶液和有機(jī)溶劑，離心后再次去除油脂，在剩余的水相體系中調(diào)節(jié)pH值為8.9，此時(shí)可以兼顧提取屬于兩性化合物的嗎啡和堿性的生物堿成分。

3.3 調(diào)味料及火鍋底料的檢測(cè)

采用本文所建立的方法對(duì)從網(wǎng)絡(luò)上及超市中購(gòu)買(mǎi)的調(diào)味料進(jìn)行LC-MS檢測(cè)，結(jié)果如表2所示。

表2 8種調(diào)味料中生物堿的LC-MS檢測(cè)結(jié)果

上述調(diào)味料的檢測(cè)中，生物堿測(cè)定的含量差別較大，其中嗎啡含量最高的3號(hào)和4號(hào)樣品，除嗎啡物質(zhì)，3號(hào)樣品中還檢測(cè)有可待因成分，4號(hào)樣品中檢測(cè)出罌粟堿成分。

此次檢測(cè)中火鍋底料的結(jié)果好于調(diào)味料，原因一是火鍋底料均為超市購(gòu)得，而調(diào)味料均為有針對(duì)性的網(wǎng)絡(luò)購(gòu)得，安全保障差些。另外的原因是火鍋底料的油脂含量遠(yuǎn)高于調(diào)味料，前處理凈化方法的選擇中，如果選用強(qiáng)凈化方法，生物堿易在凈化中損失，如果選用普通凈化方法，雜質(zhì)易干擾生物堿的測(cè)定。

據(jù)文獻(xiàn)[11,13,14]報(bào)道，分析火鍋底料中生物堿的檢驗(yàn)均采用極性的色譜HILIC柱，并在討論中提及C18色譜柱對(duì)生物堿保留較差，但通過(guò)本文及其他文獻(xiàn)的[12,15]的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，C18柱對(duì)生物堿成分的檢驗(yàn)結(jié)果良好、重現(xiàn)性好。

3.4 調(diào)味料中生物堿檢測(cè)的其他問(wèn)題

長(zhǎng)期以來(lái)，在歐美發(fā)達(dá)國(guó)家，罌粟籽（粉）及其制品主要作為制作面包、漢堡、餡料、沙律醬等的添加物[16，17]。

據(jù)報(bào)道[18，19]匈牙利成年人們每日食用源自食物中的嗎啡含量為78.6μg/kg左右，兒童是116.9μg/kg。在食用者的尿液中均會(huì)檢出生物堿成分，咖喱飯中食用的嗎啡含量為200.4μg～1002μg；可待因?yàn)?5.9μg～479.5μg，這些食用者的尿液中會(huì)檢測(cè)到的嗎啡濃度范圍在0.12μg/mL～1.27μg/mL，可待因的濃度范圍為0.04μg/mL～0.73μg/mL從此可見(jiàn)，調(diào)味料中少量罌粟殼（籽）的食用是否會(huì)產(chǎn)生成癮性，其生物檢材中代謝物的含量與毒理作用的研究還有很多空缺。

隨著檢測(cè)儀器靈敏性的顯著提高，是否可以對(duì)食品中罌粟類(lèi)物質(zhì)的各種成分規(guī)定一定的檢測(cè)閾值將既保證食品的安全，又保證法律的嚴(yán)肅性。

綜上添加在食品中的罌粟所含有生物堿的檢驗(yàn)方法存在標(biāo)準(zhǔn)方法制定滯后、自建檢驗(yàn)方法存在科學(xué)性未驗(yàn)證，以及檢驗(yàn)鑒定結(jié)論表述針對(duì)性和指導(dǎo)性差等多方面問(wèn)題，這些問(wèn)題制約了對(duì)食品安全違法行為的有效監(jiān)督和管理。希望有關(guān)部門(mén)能盡快從標(biāo)準(zhǔn)制定、快速檢驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)室確證檢驗(yàn)、安全性閾值設(shè)定、實(shí)驗(yàn)室間能力驗(yàn)證等幾個(gè)方面深入研究和討論，盡可能保障食品安全。

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2095-7939(2016)01-0074-03

2015-09-29

張婷（1975-），女，遼寧沈陽(yáng)人，中國(guó)刑事警察學(xué)院法化學(xué)系講師，博士，主要從事刑事毒物毒品分析研究。

孟凡騫）