趙京　王曉陽　郭佳　趙占正

(1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院 腎內(nèi)科　河南 鄭州　450052； 2.鄭州大學(xué)腎臟病研究所　河南 鄭州　450052；3.河南省高等學(xué)校臨床醫(yī)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科開放實(shí)驗(yàn)室　河南 鄭州　450052)

?

尿VEGF在2型糖尿病腎病中表達(dá)水平的變化分析

趙京1,2,3王曉陽1,2郭佳1,2趙占正1,2

(1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院 腎內(nèi)科河南 鄭州450052； 2.鄭州大學(xué)腎臟病研究所河南 鄭州450052；3.河南省高等學(xué)校臨床醫(yī)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科開放實(shí)驗(yàn)室河南 鄭州450052)

【摘要】目的分析尿血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在2型糖尿病腎病中表達(dá)水平的變化情況。方法選擇2015年4月至10月于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診的94例2型糖尿病患者，依據(jù)尿微量白蛋白排泄率(UAER)分為糖尿病伴正常蛋白尿組(DM1組，n=30)，糖尿病伴微量蛋白尿組(DM2組，n=33)以及糖尿病伴大量蛋白尿組(DM3組，n=31)，同時選取健康體檢者30例作為正常對照組(NC組)，收集各組患者清晨首次中段尿液，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測各組尿VEGF表達(dá)水平，同時分析尿VEGF與UAER的相關(guān)性。結(jié)果與NC組比較，尿VEGF在DM1組、DM2組、DM3組均有所升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；尿VEGF與UAER具有明顯的正相關(guān)性(r=0.748，P<0.01)。結(jié)論尿VEGF可能是診斷早期糖尿病腎病的生物標(biāo)志物，并對糖尿病腎病病情進(jìn)展有一定的預(yù)測價值。

【關(guān)鍵詞】糖尿病腎??；尿血管內(nèi)皮生長因子；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；尿微量白蛋白排泄率

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病患者主要的微血管并發(fā)癥之一。隨著糖尿病發(fā)病率在全球范圍內(nèi)的逐年增加，DN已經(jīng)成為終末期腎病的首位原因[1]。DN的發(fā)生發(fā)展與多種細(xì)胞因子密切相關(guān)，其中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一種內(nèi)皮細(xì)胞特異性的絲裂原，具有高度保守的同型二聚體糖蛋白，在DN微血管病變中具有重要作用，與血管再生及血管滲透性密切相關(guān)[2]。本研究通過觀察DN不同發(fā)展階段尿VEGF水平的變化及其與尿微量白蛋白排泄量的相關(guān)性，探討尿VEGF在DN不同發(fā)展階段的變化及臨床意義。

1材料及方法

1.1一般資料選擇2015年4月至10月于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診的94例2型糖尿病患者(實(shí)驗(yàn)組)，其中男48例，女46例，年齡(54.71±4.34)歲，均符合1999年WHO制定的《糖尿病的診斷及分型標(biāo)準(zhǔn)》中關(guān)于2型糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。依據(jù)尿微量白蛋白排泄率(urine albumer excretion rate，UAER)將上述患者分為3組。糖尿病伴正常蛋白尿組(DM1組)：共30例，其中男16例，女14例，年齡(55.90±2.96)歲，UAER<20 mg/min；糖尿病伴微量蛋白尿組(DM2組)：共33例，其中男15例，女18例，年齡(52.42±4.53)歲，20 mg/min200 mg/min。同期無糖尿病、高血壓、腎臟疾病及內(nèi)分泌疾病等基礎(chǔ)疾病的30例健康體檢者作為正常對照組(NC組)，其中男15例，女15例，年齡(54.52±3.53)歲。實(shí)驗(yàn)組排除標(biāo)準(zhǔn)：糖尿病發(fā)生急性并發(fā)癥；合并急慢性感染、發(fā)熱、心肺疾患；腎功能進(jìn)行性惡化，行腎臟替代治療者；原發(fā)或繼發(fā)性肝、腎疾病和其他內(nèi)分泌代謝性疾病及嚴(yán)重器官疾??；2周內(nèi)使用過血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑和(或)血管緊張素受體拮抗劑等藥物。

1.2方法

1.2.1尿標(biāo)本收集收集實(shí)驗(yàn)組及對照組入選者清晨首次中段尿液5 ml，尿液以2 000 rpm離心10 min，留取尿上清，置于-80 ℃冰箱保存待測。

1.2.2尿VEGF檢測采用武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)的人血管內(nèi)皮生長因子ELISA試劑盒，應(yīng)用美國Thermo多功能酶標(biāo)儀(VARIOSKAN LUX)進(jìn)行檢測，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行。

2結(jié)果

2.1各組尿VEGF及UAER表達(dá)水平比較DM1組、DM2組和DM3組尿VEGF及UAER表達(dá)水平較NC組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與DM1組比較，DM2組、DM3組尿VEGF及UAER表達(dá)水平較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；DM3組UAER表達(dá)水平較DM2組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而兩組尿VEGF差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　各組尿VEGF及UAER表達(dá)水平比較

注：與NC組比較，aP<0.05；與DM1組比較，bP<0.05；與DM2組比較，cP<0.05。

2.2尿VEGF與UAER相關(guān)性分析尿VEGF表達(dá)水平與UAER呈顯著正相關(guān)性(r=0.748，P<0.01)，且在糖尿病伴正常蛋白尿時期，尿VEGF水平較正常對照組已有明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3討論

VEGF是由兩條相同多肽鏈通過二硫鍵構(gòu)成的同源二聚體糖蛋白，分子量為36～46 KD，人VEGF基因位于6號染色體短臂1區(qū)2帶(6p12)，具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷徙，增加血管通透性，改變細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)血管生成及維持等作用[3]。VEGF 主要表達(dá)于腎小球足細(xì)胞、遠(yuǎn)端腎小管和集合管，在近端腎小管也有少量表達(dá)，對維持腎小球?yàn)V過屏障的完整性和足細(xì)胞的活性具有重要作用[4]。VEGF的 5種亞型中最主要的為VEGF-A，已經(jīng)證實(shí)其在T2DM中顯著增加，且其表達(dá)水平和尿白蛋白/肌酐比率(albumin creatinine ratio，ACR)顯著相關(guān)。VEGF-A對血管內(nèi)皮細(xì)胞的活性具有維持作用，但是當(dāng)其表達(dá)水平過高時則參與內(nèi)皮細(xì)胞損傷的一系列病理變化[5]。Bonnefond等[6]認(rèn)為VEGF及其受體可通過抑制下游信號從而抑制血管生成，改變腎臟血流，最終維持體內(nèi)的平衡，但是如果VEGF過度表達(dá)則可導(dǎo)致腎小球功能的障礙引起蛋白尿，最終加重DN的進(jìn)展。本研究的結(jié)果中，尿VEGF水平隨病情進(jìn)展逐漸上升，該觀點(diǎn)同國外報(bào)道相一致，究其原因可能為實(shí)驗(yàn)性DN中，腎小球抑制VEGFR1而增加VEGFR2的表達(dá)，通過PI3K-Akt、FoxO3a和eNOS-NOx信號通路產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而誘導(dǎo)腎小球細(xì)胞的凋亡[7]。

Kim等[8]發(fā)現(xiàn)DN早期患者尿VEGF顯著增加，且尿VEGF的排泄量隨DN病程進(jìn)展而逐漸增多，因此可認(rèn)為尿VEGF是DN的敏感性生物標(biāo)記物，可預(yù)測DN的病程進(jìn)展。在DN早期，近端小管對于尿蛋白和尿VEGF具有重要作用，這可能與糖基化終產(chǎn)物的干預(yù)作用相關(guān)[9]。本研究中糖尿病患者伴正常蛋白尿時期尿VEGF表達(dá)較正常對照組顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且隨著糖尿病腎臟損害過程中進(jìn)一步增多，表明尿VEGF排泄的升高早于糖尿病腎小球早期病變的UAER的變化，尿VEGF參與了早期糖尿病腎損害的發(fā)生、發(fā)展，可作為早期評價糖尿病腎損害的指標(biāo)。

糖尿病患者尿VEGF排泄的增加與糖尿病腎損害病變的程度成正相關(guān)，VEGF分泌的增加可能為糖尿病腎組織VEGF表達(dá)及合成分泌增多有關(guān)，已經(jīng)明確VEGF在糖尿病視網(wǎng)膜病中的作用，并將該認(rèn)識應(yīng)用于臨床治療。因此我們推測，抑制或阻斷VEGF的作用可能作為防治糖尿病腎損害的有效措施。

綜上所述，DN患者尿VEGF表達(dá)水平隨DN進(jìn)展逐漸增加，提示VEGF可能在DN的發(fā)生及DN疾病進(jìn)程發(fā)揮重要作用，尿VEGF的異常高水平可能與DN的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，其濃度變化可用于監(jiān)測DN病程進(jìn)展及轉(zhuǎn)歸。因此，檢測DN患者尿液中的VEGF水平，對于臨床早期診斷DN及藥物防治等提供策略，具有一定的臨床參考價值。

參考文獻(xiàn)

[1]Bloomgarden Z T.Diabetes: East meets West. The Joint American Association of Clinical Endocrinologists-Chinese Society of Endocrinology (AACE-CSE) Symposium[J].J Diabetes,2012,4(3):221-226.

[2]Maeshima Y,Makino H.Angiogenesis and chronic kidney disease[J].Fibrogenesis Tissue Repair,2010,3(1):13.

[3]Watanabe T.Is vascular endothelial cell growth factor (VEGF) involved in the pathogenesis of diabetic nephropathy[J].Nephrology(Carlton),2007,12(3):S27.

[4]楊緒楓,汪年松.血管內(nèi)皮生長因子與糖尿病腎病的研究進(jìn)展[J].中華臨床醫(yī)師雜志(電子版),2011,5(22):6707-6710.

[5]Brosius F C,Coward R J.Podocytes, signaling pathways, and vascular factors in diabetic kidney disease[J].Adv Chronic Kidney Dis,2014,21(3):304-310.

[6]Bonnefond A,Saulnier P J,Stathopoulou M G,et al.What Is the contribution of two genetic variants regulating VEGF levels to type 2 diabetes risk and to microvascular complications[J].PLoS One,2012,8(2):e55921.

[7]Yang K S,Lim J H,Kim T W,et al.Vascular Endothelial Growth Factor-Receptor 1 Inhibition Aggravates Diabetic Nephropathy through eNOS Signaling Pathway in db/db Mice[J].PLoS One,2014,9(4):e94540.

[8]Kim N H,Kim K B,Kim D L,et al.Plasma and urinary vascular endothelial growth factor and diabetic nephropathy in Type 2 diabetes mellitus[J].Diabet Med,2004,21(6):545-551.

[9]Petrica L,Vlad A,Gluhovschi G,et al.Proximal Tubule Dysfunction Is Associated with Podocyte Damage Biomarkers Nephrin and Vascular Endothelial Growth Factor in Type 2 Diabetes Mellitus Patients:A cross-sectioal study[J].PLoS One,2014,9(11):e112538.

(收稿日期：2015-12-22)

【中圖分類號】R 587.1

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.03.021