摘? 要：為探討不同水平的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）對(duì)南美白對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）機(jī)體非特異性免疫力的影響，該試驗(yàn)選擇600尾體重約為0.45g健康的南美白對(duì)蝦，按照單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，分成4個(gè)組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50尾南美白對(duì)蝦。各組分別投喂含有0%（對(duì)照組）、0.5%、1.0%和1.5%的枯草芽孢桿菌的基礎(chǔ)飼料。投喂8周后，采集血液，檢測(cè)血清非特異性免疫指標(biāo)。結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，試驗(yàn)2組的南美白對(duì)蝦血清中溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、酚氧化物酶活性顯著提高（P<0.05），試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組南美白對(duì)蝦血清中過(guò)氧化氫酶和超氧化物歧化酶活性顯著提高（P<0.05）。研究表明，在南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)中添加一定劑量的枯草芽孢桿菌可以提高機(jī)體的非特異性免疫力，且適宜添加量為1.0%。

關(guān)鍵詞：枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）；非特異性免疫；南美白對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）

中圖分類號(hào)：S966.12文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ?文章編號(hào)：1674-2419（2024）03-0294-03

南美白對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）是中國(guó)主要的蝦養(yǎng)殖品種之一，具有生長(zhǎng)快、適應(yīng)強(qiáng)等特點(diǎn)，養(yǎng)殖量逐漸增加[1]。近些年，南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖中頻發(fā)疾病，給其養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失，主要是由于養(yǎng)殖密度過(guò)大、防治疾病過(guò)程中抗生素的濫用等問(wèn)題[2]。尋找南美白對(duì)蝦的無(wú)抗養(yǎng)殖方式，提高養(yǎng)殖效益，是目前南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖的主要解決問(wèn)題之一。益生菌制劑是一種無(wú)殘留、高效、無(wú)毒副作用的一種飼料添加劑[3]。在動(dòng)物養(yǎng)殖生產(chǎn)中添加適量的益生菌制劑可以抑制腸道中有害微生物的繁殖生長(zhǎng)，刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)機(jī)體的抗病力，提高生長(zhǎng)性能，是抗生素的理想替代品[4-5]。其中，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）是一種好氧型、革蘭氏陽(yáng)性益生菌，具有耐膽鹽、耐高溫等特點(diǎn)，在飼料制粒高溫過(guò)程中仍然保持較高的活性，在極端條件下，可以產(chǎn)生內(nèi)源性孢子[6]。目前，枯草芽孢桿菌在水產(chǎn)生物養(yǎng)殖中應(yīng)用逐漸增多。張晶晶等[7]研究了枯草芽孢桿菌對(duì)氨氮脅迫下半滑舌鰨的免疫力及血液指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌通過(guò)改善半滑舌鰨機(jī)體的免疫力及抗氧化功能減輕氨氮脅迫下對(duì)其機(jī)體產(chǎn)生的負(fù)面影響。李軍亮等[8]研究了枯草芽孢桿菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦機(jī)體免疫力、抗病力及生長(zhǎng)性能的影響，發(fā)現(xiàn)適量的枯草芽孢桿菌可以顯著提高凡納濱對(duì)蝦的免疫力、抗病力，進(jìn)而改善生長(zhǎng)性能，且枯草芽孢桿菌在凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖中的最適添加水平為0.73%。目前，枯草芽孢桿菌在水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用研究結(jié)果不完全相同，因此，該試驗(yàn)以南美白對(duì)蝦為研究對(duì)象，探討不同水平的枯草芽孢桿菌對(duì)其機(jī)體非特異性免疫力的影響，為枯草芽孢桿菌高效地應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖中提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 枯草芽孢桿菌和試驗(yàn)對(duì)蝦

研究中采用的枯草芽孢桿菌活性大于1.0×108 cfu/g，由山東寶來(lái)利來(lái)生物有限公司提供。試驗(yàn)用的南美白對(duì)蝦來(lái)自寧夏回族自治區(qū)銀川市賀蘭縣晶誠(chéng)水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

研究選擇600尾體重約為0.45 g健康的南美白對(duì)蝦，按照單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，分成4個(gè)組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50尾南美白對(duì)蝦。各組南美白對(duì)蝦分別投喂含有0%（對(duì)照組）、0.5%、1.0%和1.5%的枯草芽孢桿菌的基礎(chǔ)飼料。投喂8周，采集血液，檢測(cè)血清非特異性免疫指標(biāo)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

1.3 南美白對(duì)蝦基礎(chǔ)飼料

試驗(yàn)中，南美白對(duì)蝦的基礎(chǔ)飼料購(gòu)買于海大飼料有限公司，其營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2。將購(gòu)買的對(duì)蝦基礎(chǔ)飼料粉碎后，各組按照不同比例的枯草芽孢桿菌混勻，制成1.5 mm的顆粒飼料，風(fēng)干后4℃保存。

1.4 養(yǎng)殖管理

南美白對(duì)蝦蝦苗在水泥池中暫養(yǎng)7 d后，選擇體質(zhì)健康的初重約為4.5 g的南美白對(duì)蝦進(jìn)行試驗(yàn)。將每個(gè)重復(fù)的南美白對(duì)蝦飼養(yǎng)于0.3 m3的玻璃纖維鋼桶中。每日在7：30、13：00和18：30投喂3次，每日根據(jù)天氣、南美白對(duì)蝦的生長(zhǎng)情況調(diào)整投喂量。每日換水量為1/2，水溫控制在30 ℃，pH值控制在8，鹽度約為30‰，氨氮濃度≤0.035 mg/L。

1.5 非特異性免疫指標(biāo)

試驗(yàn)結(jié)束后，從每個(gè)重復(fù)中選擇5尾健康的南美白對(duì)蝦，圍心腔抽取血液，4000 r/min離心8 min，取其上層血清，用于檢測(cè)溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、過(guò)氧化氫酶、酚氧化物酶、超氧化物歧化酶等非特異性免疫指標(biāo)。

1.6 數(shù)據(jù)分析

各組南美白對(duì)蝦的非特異性免疫指標(biāo)采用SAS 9.5進(jìn)行差異顯著性分析，差異顯著后，采用LSD方法比較組間數(shù)據(jù)差異性。結(jié)果用平均值表示，P<0.05代表數(shù)據(jù)采用顯著。

2 結(jié)果

不同水平的枯草芽孢桿菌對(duì)南美白對(duì)蝦機(jī)體非特異性免疫力的影響見(jiàn)表3，與對(duì)照組比較，試驗(yàn)2組的南美白對(duì)蝦血清中溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、酚氧化物酶活性顯著提高（P<0.05），試驗(yàn)組2和試驗(yàn)組3南美白對(duì)蝦血清中過(guò)氧化氫酶和超氧化物歧化酶活性顯著提高（P<0.05）。研究表明，在南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)中添加一定劑量的枯草芽孢桿菌可以提高機(jī)體的非特異性免疫力，且適宜添加量為1.0%。

3 討論

隨著水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖密度的加大，水質(zhì)污染、機(jī)體免疫力下降等問(wèn)題，導(dǎo)致水產(chǎn)動(dòng)物疾病頻發(fā)，給養(yǎng)殖者帶來(lái)一定的負(fù)面經(jīng)濟(jì)影響。該研究中，在南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖中添加適量的枯草芽孢桿菌可以提高其血清中的非特異性免疫酶活性，增強(qiáng)了機(jī)體的抵抗力。于道德等[9]在凡納濱對(duì)蝦的試驗(yàn)中，使用適量的枯草芽孢桿菌顯著降低了機(jī)體谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性，顯著提高了酚氧化物酶、超氧化物歧化酶活性及溶菌酶活性，并提高了血細(xì)胞吞噬率，明顯改善了機(jī)體的非特異性免疫力，進(jìn)而提高了對(duì)蝦的增重率及特定生長(zhǎng)率等生長(zhǎng)性能指標(biāo)。在羅非魚的試驗(yàn)中，添加適量的枯草芽孢桿菌也顯著增強(qiáng)了機(jī)體的非特異性免疫功能[10]?？莶菅挎邨U菌在魚類腸道中消耗氧氣，抑制有害菌的生長(zhǎng)，促進(jìn)消化酶的分泌，提高機(jī)體的消化吸收能力，增強(qiáng)了機(jī)體的抗病力。

4 結(jié)論

該試驗(yàn)條件下，在南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)中添加一定水平的枯草芽孢桿菌可以有效提高血清中溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、酚氧化物酶、過(guò)氧化氫酶及超氧化物歧化酶活性，提高了機(jī)體的非特異性免疫力，綜合各項(xiàng)指標(biāo)數(shù)據(jù)考慮，枯草芽孢桿菌的最適添加水平為1.0%。

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Effects of different levels of Bacillus subtilis on immunity of Litopenaeus vannamei

WEI Chunli

（Helan County Agriculture and Rural Affairs Bureau， Yinchuan 750200， Ningxia China）

Abstract：In order to explore the effects of different levels ofBacillus subtilis on the nonspecific immunity of the organism of Litopenaeus vannamei， 600 healthy Litopenaeus vannamei weighing about 0.45 g were selected for this experiment， which were divided into four groups of three replicates each according to a one-way experimental design， with each replicate of each group was divided into four groups with three replicates， each with 50 shrimps. Each group was fed a basal diet containing 0% （control）， 0.5%， 1.0% and 1.5% Bacillus subtilis， respectively. After 8 weeks of feeding， blood was collected and tested for serum non-specific immunity indexes. The results showed that lysozyme， alkaline phosphatase， acid phosphatase， and phenoloxidase activities were significantly higher （P<0.05） in the serum of Litopenaeus vannamei in test group 2 compared with the control group， and catalase and superoxide dismutase activities were significantly higher （P<0.05） in the serum of Litopenaeus vannamei in both test group 2 and test group 3. The study showed that the addition of a certain dose of Bacillus subtilis in the production of Litopenaeus vannamei culture can improve the non-specific immunity of the organism， and the appropriate amount is 1.0%.

Keywords：Bacillus subtilis; non-specific immunity; Litopenaeus vannamei

作者簡(jiǎn)介：魏春麗（1983.2- ）女、漢族，遼寧人。主要從事水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)工作。E-mail：470516089@qq.com。