王天藝 阮良鵬 鐘昌艷

摘? 要：為了研究養(yǎng)殖密度對欽州鋸緣青蟹非特異性免疫能力的影響，挑選規(guī)格統(tǒng)一、體重（47.28±3.03）g的鋸緣青蟹（Scylla serrata）共1800只，共設(shè)置4個養(yǎng)殖密度組，分別為密度1組、密度2組、密度3組和密度4組。每個密度組飼養(yǎng)的鋸緣青蟹密度分別為40只/桶、80只/桶、160只/桶和320只/桶。每個密度小組分3個重復(fù)小組，每個重復(fù)小組的鋸緣青蟹均分別飼養(yǎng)在1.0 m×0.8 m×0.4 m規(guī)格的塑料桶中。飼養(yǎng)時間為期14 d。飼養(yǎng)結(jié)束后對鋸緣青蟹的非特異性免疫指標進行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ACP和LZM以密度1組的最高，隨著養(yǎng)殖密度的增加，ACP和LZM呈逐漸降低的趨勢，ACP除了密度2組和密度3組相比差異不顯著（P>0.05），其他各個小組間均達到差異顯著的水平（P<0.05），密度1組和密度4組的ACP相比差異極顯著；密度1組、密度2組和密度3組LZM對比組間差異不顯著，但是密度1組和密度3組的LZM相比差異顯著（P<0.05），密度1組和密度4組的LZM相比差異極顯著（P<0.01）；ALP密度2組的高于密度1組，但是差異不顯著（P>0.05），密度1組和密度2組的ALP均顯著地高于密度3組（P<0.05），極顯著地高于密度4組（P<0.01）。試驗說明高養(yǎng)殖密度抑制了ACP、ALP和LZM的活性，造成鋸緣青蟹的免疫功能下降

關(guān)鍵詞：養(yǎng)殖密度；鋸緣青蟹（Scylla serrata）；非特異性免疫

中圖分類號：S966.12文獻標志碼：A? ?文章編號：1674-2419（2024）03-0291-03

青蟹是印度洋和太平洋等地區(qū)的主要的經(jīng)濟蟹種之一，主要分布于熱帶和亞熱帶的咸水港灣或者紅樹林區(qū)域[1]。青蟹具有個體大、肉量多、肉質(zhì)鮮美等特點，深受中國眾多消費者的喜愛，所以在中國對于青蟹的市場需求量非常大[2]。據(jù)相關(guān)研究統(tǒng)計，青蟹屬有4種，分別為欖綠青蟹（Scylla olivacea）、鋸緣青蟹（Scylla serrata）、紫螯青蟹（Scylla tranquebarica）和擬穴青蟹（Scylla paramamosian）[3]，中國廣西欽州地區(qū)分布的青蟹以鋸緣青蟹為主，是欽州市名貴的海產(chǎn)之一。近幾年，欽州鋸緣青蟹養(yǎng)殖有了較大的發(fā)展，是當?shù)貪O民主要的經(jīng)濟來源之一，所以提高當?shù)劁従壡嘈返酿B(yǎng)殖效益顯得尤為重要。當前在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中養(yǎng)殖戶為了獲得較大的水體利用效率，經(jīng)常采用增加養(yǎng)殖密度來提高養(yǎng)殖經(jīng)濟效益[4]；但是養(yǎng)殖密度不是越高越好，過高的養(yǎng)殖密度會影響水生動物的生長，且高密度養(yǎng)殖下，會給水生動物造成密度脅迫應(yīng)激，使得水生動物的抗氧化和免疫功能均受到影響，嚴重的話會導(dǎo)致水生動物死亡[5-6]。所以，該研究以提高欽州地區(qū)鋸緣青蟹養(yǎng)殖效益為出發(fā)點，探討不同的養(yǎng)殖密度對該地區(qū)鋸緣青蟹免疫力的影響，以期為該地區(qū)鋸緣青蟹的合理養(yǎng)殖以及提高養(yǎng)殖經(jīng)濟效益做理論參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗所用的鋸緣青蟹購于欽州某青蟹養(yǎng)殖基地，規(guī)格統(tǒng)一質(zhì)量為（47.28±3.03）g；購買來的鋸緣青蟹先暫養(yǎng)于塑料桶中，暫養(yǎng)期間桶中的水質(zhì)鹽度要保持在（4.8±0.5）‰，同時保證溶解氧≥5.2 mg/L，水溫控制在（28.0±1.0）℃，同時桶中水要求每天更換1次；堿性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）和溶菌酶（LZM）等免疫相關(guān)酶測定試劑盒購置于南京建成生物工程研究所有限公司。

1.2 試驗方法

選擇鋸緣青蟹共計1800只。試驗共設(shè)置4個養(yǎng)殖密度組，分別為密度1組、密度2組、密度3組和密度4組。每個密度組飼養(yǎng)的鋸緣青蟹密度分別為40只/桶、80只/桶、160只/桶和320只/桶。每個密度小組分3個重復(fù)小組，每個重復(fù)小組的鋸緣青蟹分別飼養(yǎng)于規(guī)格為1.0 m×0.8 m×0.4 m的塑料桶中，飼養(yǎng)時間為14 d；飼養(yǎng)結(jié)束后每個密度組隨機抽取3只鋸緣青蟹，取其鰓部位組織0.1 g，然后根據(jù)質(zhì)量比加入15的生理鹽水研磨后離心取上清液，置于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試驗指標測定以及數(shù)據(jù)處理

取通過1.2步驟保存的離心上清液，利用采購的非特異性免疫相關(guān)的酶檢測試劑盒，根據(jù)使用說明書對堿性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（ACP）和溶菌酶（LZM）指標進行測定，測定出的檢測結(jié)果采用SPSS 22.0軟件進行單因素方差分析（One-way ANOVA），若組間存在顯著差異，則采用Duncans法進行多重比較，試驗結(jié)果均以“平均值±標準差”，P<0.05表示組間差異顯著。

2 結(jié)果

養(yǎng)殖密度對鋸緣青蟹非特異性免疫指標存在顯著的影響（表1）。酸性磷酸酶和溶菌酶以密度1組的最高，隨著養(yǎng)殖密度的增加，酸性磷酸酶和溶菌酶呈逐漸降低的趨勢。酸性磷酸酶除了密度2組和密度3組相比差異不顯著（P>0.05），其他各個小組間均達到差異顯著的水平（P<0.05）。密度1組和密度4組的酸性磷酸酶相比差異極顯著，密度1組、密度2組和密度3組溶菌酶對比組間差異不顯著，但是密度1組和密度3組的溶菌酶相比差異顯著（P<0.05）。密度1組和密度4組的溶菌酶相比差異極顯著（P<0.01）。堿性磷酸酶密度2組高于密度1組，但是差異不顯著（P>0.05）。密度1組和密度2組的堿性磷酸酶均顯著地高于密度3組（P<0.05），極顯著地高于密度4組（P<0.01）。試驗結(jié)果說明，高養(yǎng)殖密度抑制了酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和溶菌酶的活性，造成鋸緣青蟹的免疫功能下降。

3 討論

鋸緣青蟹的非特異性免疫系統(tǒng)包括免疫器官組織、體液免疫和免疫細胞三大部分，ACP和ALP是甲殼動物機體免疫機制過程中直接參與磷酸基團的代謝和轉(zhuǎn)運，可以消除入侵機體的病原物，從而使得機體免受侵襲，是水解酶系統(tǒng)的重要組成部分[7-8]。黃永春等[9]人研究發(fā)現(xiàn)超過40萬尾/m3凡納濱對蝦的養(yǎng)殖密度，對蝦體內(nèi)的ACP、ALP活性顯著降低；周素琴等[10]人發(fā)現(xiàn)環(huán)境脅迫會對鋸緣青蟹的ALP、ACP和LZM活性造成顯著性影響；該研究中發(fā)現(xiàn)隨著養(yǎng)殖密度的升高，ALP和ACP活性顯著低于低密度組，這些結(jié)果表明高養(yǎng)殖密度抑制了ALP、ACP的活性，造成鋸緣青蟹的免疫功能下降。LZM是吞噬細胞殺菌的物質(zhì)基礎(chǔ)，是衡量動物體非特異性免疫的一個重要指標[11-12]。該研究結(jié)果表明，低養(yǎng)殖密度下對LZM活性不會造成顯著影響，但是隨著養(yǎng)殖密度的升高抑制LZM活性越明顯。黃東科等[13]人在研究養(yǎng)殖密度對波紋龍蝦免疫力的影響過程中發(fā)現(xiàn)LZM的活性隨養(yǎng)殖密度的增大而下降，與該研究結(jié)果相符。

參考文獻：

[1]高天翔，王玉江，劉進賢，等.基于線粒體12S rRNA序列探討4種青蟹系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系及中國沿海青蟹的分類地位[J].中國海洋大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2007（1）：57-60+32.

[2]張文銳，劉洪霞，王尊，等.脫脂黑水虻蟲粉對青蟹營養(yǎng)品質(zhì)的影響[J].飼料研究，2023，46（5）：51-55.

[3]李久國，葉春宇，陳麗芝，等.4種不同青蟹養(yǎng)殖模式的生命周期評價[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023，64（6）：1375-1379.

[4]范文浩，方劉，周錦，等.養(yǎng)殖密度對克氏原螯蝦生長及消化酶、免疫酶活性的影響[J].水產(chǎn)科學(xué)，2021，40（2）： 261-266.

[5]張海恩，何玉英，李健，等.密度脅迫對中國對蝦幼蝦生長、抗氧化系統(tǒng)功能及水質(zhì)指標的影響[J].漁業(yè)科學(xué)進展，2020，41（2）：140-149.

[6]毛振方.池塘養(yǎng)殖密度對中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）生長性能和養(yǎng)殖水環(huán)境的影響[D]. 南昌：南昌大學(xué)，2019：23-25.

[7]陳勇.飼養(yǎng)密度對克氏原螯蝦成活率和肝胰腺三種免疫酶的影響[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，55（16）：4237-4240.

[8]王天神，周鑫，趙朝陽，等.不同溫度條件下克氏原螯蝦免疫酶活性變化[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)2012，40（12）：239-241.

[9]黃永春，鄭偉剛，黎中寶，等.凡納濱對蝦幼體不同培育密度對水質(zhì)、仔蝦生長、免疫和抗逆性能的影響[J].廈門大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2020，59（6）：947-953.

[10]周素琴.環(huán)境脅迫對養(yǎng)殖鋸緣青蟹主要免疫因子的影響[D].青島：中國海洋大學(xué)，2006： 35-40.

[11]劉樹青，江曉路，牟海津，等.免疫多糖對中國對蝦血清溶菌酶、磷酸酶和過氧化物酶的作用[J].海洋與湖沼，1999（3）：278-283.

[12]宋志飛，溫海深，趙艷飛，等.流水養(yǎng)殖條件下養(yǎng)殖密度對俄羅斯鱘幼魚非特異性免疫的影響[J].廣西科學(xué)，2017，24（4）：389-395.

[13]黃東科.溫度、鹽度、密度和餌料對波紋龍蝦存活、攝食和生長的影響[D].湛江：廣東海洋大學(xué)，2014： 48-49.

Effect of density on the nonspecific immunity of Scylla serrata

WANG Tianyi1， RUAN Liangpeng2， ZHONG Changyan2

（1.Agricultural and Rural Service Center， Nari Town， Qinnan District， Qinzhou 535013， Guangxi China; 2.Qinzhou City Qinnan District Aquatics Technology Promotion Station， Qinzhou 535000， Guangxi China）

Abstract：In order to investigate the effects of culture density on the non-specific immunity of Qinzhou blue crabs （Scylla serrata）， 1800 blue crabs with uniform size and body weight （47.28±3.03） g were selected and four culture density groups were set up， namely density group 1， density group 2， density group 3 and density group 4. The densities of blue crabs in each density group were 40， 80， 160 and 320， respectively. Each density group was divided into 3 repeat groups， and the green crabs in each repeat group were raised in 1.0m×0.8m×0.4m plastic buckets， respectively. The feeding time lasted for 14 days. The non-specific immune indexes of blue crab were measured after feeding. The results showed that ACP and LZM were the highest in density group 1， and with the increase of culture density， ACP and LZM showed a gradually decreasing trend， except that there was no significant difference in ACP between density group 2 and density group 3 （P>0.05）， and all other groups reached a significant difference level （P<0.05）. The ACP of density group 1 was significantly different from that of density group 4. There was no significant difference in LZM between density group 1， density group 2 and density group 3， but the difference in LZM between density group 1 and density group 3 was significant （P<0.05）， and the difference in LZM between density group 1 and density group 4 was extremely significant （P<0.01）. The ALP in density group 2 was higher than that in density group 1， but the difference was not significant （P>0.05）. The ALP in density group 1 and density group 2 was significantly higher than that in density group 3 （P<0.05）， and was extremely significantly higher than that in density group 4 （P<0.01）. The results showed that the high culture density inhibited the activity of ACP， ALP and LZM， which resulted in the decrease of immune function of blue crabs.

Keywords：breeding density; Scylla serrata; nonspecific immunity

作者簡介：王天藝（1977.10- ），男，漢族，廣西欽州人，水產(chǎn)工程師。研究方向：水產(chǎn)養(yǎng)殖。E-mail：qnnl3751522@126.com。