摘要：目的 探討食管鱗癌組織中干細胞標志Nanog表達及其與腫瘤病理特征和預后的關系。方法 采用免疫組化方法測定60例食管鱗癌組織和10例癌旁組織中干細胞標志Nanog的表達情況，比較它在組織中的表達差異，及其與食管癌相關臨床病理特征和預后的關系。結果 在60例患者中，26例出現復發(fā)轉移，Nanog在轉移組中表達率分別為61.5%（16/26），在非轉移組中分別為26.5%（9/34），差異有統(tǒng)計學意義，P值<0.05。食管鱗癌原發(fā)灶分化程度不同，Nanog表達存在差異，但是同T和N分期沒有明顯的相關性（P>0.05）。Nanog為陽性表達其轉移率顯著高于為陰性表達者。結論 食管鱗癌組織中Nanog 表達與患者術后復發(fā)轉移有一定關系，該檢測有助于預后的評價。

關鍵詞：食管鱗癌；Nanog

Expression and Clinical Significances of Nanog in Esophagea Squamous Carcinoma

MA Cheng-fang1， YU Zheng2， LI Shao-peng1， LI Zhi-hua1， WEI Chun-yong1， WANG Li-xu1， HONG Qiong-chuan1

（1.Department of Cardiothoracic Surgery， Longgang District Central Hospital of Shenzhen，Shenzhen 518116， Guangdong，China；

2. Department of Physical Examination， People Hospital of Shenzhen Longgang District，Shenzhen 518116， Guangdong，China）

Abstract：Objective To investigate the expression of Nanog in esophageal squamous carcinoma and their correlations with the pathologic parameter of cancer and prognosis.Methods The expression of Nanog in 60 surgical specimens of esophageal squamous carcinoma and 10 paracarcinoma tissues was detected by immunohistochemistry method. The correlations between the expression of Nanog and the clinical pathological characteristics were analyzed statistically.Results Relapse and metastasis of 26 cases was detected in all patients. In metastasis group， the positive expression rate of Nanog was 61.5 %（16/26））. And the positive expression rate of Nanog in non-metastasis group was 26.5%（9/34）.The difference was signigicant （ P < 0. 05）. Expression of Nanog signigicantly correlated with differentiation， but was not associated with T stage or N stage . Metastatic rate in positive expression was higher than in negative expression.Conclusion The expression of Nanog related with progression and prognosis of esophageal squamous carcinoma， they are both hopeful predictors for patients with esophageal squamous carcinoma.

Key words：Esophageal squamous carcinoma；Nanog

食管癌是我國高發(fā)腫瘤之一，食管鱗癌術后的復發(fā)轉移是目前臨床常見的現象，總體治療效果不佳，如何有效的評估預測是目前國內外研究的一個熱點。近年出現的干細胞理論證實與腫瘤的發(fā)生、侵潤和轉移密切相關，迄今已在多種惡性腫瘤中鑒定出具有干細胞性質的惡性腫瘤細胞。作為全能或多能性干細胞的標志，Nanog基因是維系干細胞自我更新的關鍵性基因。本研究采用免疫組化方法對食管鱗癌組織中干細胞標志Nanog表達情況進行分析，探討其與食管鱗癌臨床特征及預后的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2011年1月～2012年12月在我院胸外科住院治療并確診的食管鱗癌患者60例，其中男性32例，女性28例。年齡38～71歲，中位年齡為49歲。根據食管鱗癌TNM分期（AJCC2009）標準，ⅡA期28例，ⅡB期11例，ⅢA期21例。26（43.3%）例患者確診復發(fā)轉移，其中9例為吻合口復發(fā)，10例為單個臟器轉移，7例為多發(fā)臟器或淋巴結轉移。所有患者術前未行放化療，術前檢查及術中探查均未發(fā)現明確遠處轉移。術后行輔助PF或TP方案化療4～6個周期。隨訪時仍生存37例，已死亡23例。

1.2免疫組化

1.2.1 60例標本取自食管癌術后標本中的無壞死癌灶，并在其中隨機抽取10例癌旁組織（距癌灶4 cm以上）作為對照，經4%多聚甲醛溶液固定，常規(guī)脫水石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚度4～6 μm。均經HE染色并由組織學證實為鱗狀細胞癌。

1.2.2采用免疫組化方法檢測食管鱗癌組織、癌旁組織中干細胞標志Nanog的表達情況，操作步驟嚴格按照免疫組化單克隆抗體試劑盒（Santa Cruz公司）說明進行檢測，并由有經驗的病理科醫(yī)師單盲閱片。Nanog陽性表達為細胞核染色，陽性細胞數>10%為陽性表達。

1.3預后評價方法 患者每3～4個月復查血清CEA、X線（包括食管鋇餐和胸片），彩超（頸部和腹部），每6～12個月復查胸腹部CT和消化內鏡，如CT提示吻合口、肺、肝或局部淋巴結轉移時，盡可能行局部穿刺活檢證實，以CT提示時間為轉移發(fā)生時間。采用轉移發(fā)生時間進行預后評價。隨訪截止至2014 年12 月。

1.4統(tǒng)計學分析 應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數據分析，比較Nanog表達與臨床參數之間的關系時采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Nanog表達與臨床病理特征的關系 Nanog陽性表達主要表現為腫瘤細胞核染色，見圖1，在轉移組中陽性表達率為61.5 %（16/26），而非轉移組為26.5%（9/34），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。且在原發(fā)灶分化程度不同的組織中，Nanog的陽性率表達也不同，低/未分化組呈高表達率，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；在不同T和N分期中Nanog表達雖然存在差異，但是無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

圖1 Nanog在細胞核的陽性表達（光鏡40×）

2.2 Nanog表達與術后復發(fā)轉移關系 在60例食管鱗癌組織中，Nanog為陽性表達14例，其中發(fā)生復發(fā)轉移11例；Nanog為陰性表達21例，其中復發(fā)轉移5例。不同表達狀態(tài)與復發(fā)轉移的差異有統(tǒng)計學意義，P<0.05。Nanog陽性表達者轉移發(fā)生率為78.6%（11/14），顯著高于陰性表達者的23.8%（5/21）。

2.3 Nanog表達與食管鱗癌臨床病例特征的關系，見表1。

3 討論

食管癌是現階段全球最常見的惡性腫瘤之一，近年來我國食管癌的發(fā)病率及死亡率逐年增高。在我國食管癌占全部惡性腫瘤死因的第4位[1]。目前食管癌的主流治療措施是以手術為主聯合放化療的綜合治療，其治療后的5年生存率只有約14%[1]，造成這種困境的原因是大部分的患者術后出現了復發(fā)轉移，是臨床亟待解決的重點問題。

現階段腫瘤治療和評價預后的標準主要是TNM分期，但由于個體的差異和腫瘤的異質性，已無法準確反映腫瘤的術后復發(fā)和預后狀況。隨著現代分子生物技術的發(fā)展，如能找尋出食管癌中有預后價值的生物標志物，將其與臨床病理指標（組織學分級和腫瘤分期）結合，建立一種分子分期的新系統(tǒng)，將對指導個體化治療和評價預后很有幫助[2]。因此，尋找能評價其預后的腫瘤標志物已成為目前食管癌臨床和基礎研究的主要熱點。

近年來國內外提出的腫瘤干細胞理論為這個問題的解決提供了新途經。前期大量研究顯示腫瘤組織內一部分具有干細胞特征的癌細胞，又稱癌干細胞（cancer stem cells，CSCs），是誘發(fā)及維持腫瘤不斷生長、轉移、耐藥的源頭[3]。迄今為止已相繼在乳腺癌[4]、胰腺癌[5]、肝癌[6]和胃癌[7]等多種惡性腫瘤中鑒定出干細胞性質的惡性腫瘤細胞。2003年國外學者將在胚胎干細胞（embryonic stem cells，ESCs）內新發(fā)現的重要基因Ecat4（ES cell associated transcripts 4）命名為 Nanog[8]，近年研究發(fā)現，它與CSCs關系密切，是維持干細胞自我更新和亞全能性的關鍵性基因，同時也是全能或多能性的干細胞標志物[9]。Nanog 在某些生殖細胞腫瘤如睪丸原位癌、精原細胞瘤和胚胎性癌細胞株NCCIT等[10]，以及體細胞腫瘤如乳腺癌、胃癌和前列腺癌等[11]的表達已有相繼報道，它與這些腫瘤的生物學行為密切相關，高水平表達者進展快、易發(fā)生復發(fā)轉移及預后差。在本研究中，60例食管鱗癌組織中有25例出現Nanog蛋白的陽性表達，這些陽性表達細胞在腫瘤組織中的分布形態(tài)多為點狀聚集，罕有灶狀或巢形聚集，說明即使Nanog陽性表達，也只是少部分細胞表達，這和某些學者提出的腫瘤干細胞在腫瘤組織中只占很少一部分的理論是符合的[12]。同時，Nanog陽性表達率高的患者術后復發(fā)轉移發(fā)生率明顯高于陰性表達者，也說明Nanog蛋白高表達的腫瘤侵襲性要高于低表達的腫瘤患者。

本研究通過對Nanog的分析發(fā)現，表達為陽性表達的患者其轉移率明顯高于均為陰性患者。該項指標的高表達提示腫瘤復發(fā)轉移的風險較低表達者更高，屬于預后不良因素。綜上所述，檢測食管癌術后患者Nanog的表達，可作為預測術后早期復發(fā)轉移及預后判斷有臨床意義的指標，從而更好的指導個體化治療，提高患者的生存質量。

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