摘要：目的 建立復(fù)方丹參丸中丹酚酸B含量測(cè)定方法。方法 采用高效液相色譜法，Kromasil C18色譜柱（（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸（22：78），檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm；柱溫30℃；流速1.0ml·min-1。結(jié)果 丹酚酸B在0.1034～1.034μg 范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系（r=1.000），回收率為98.2%，RSD為1.2%（n=9）。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確。方法的穩(wěn)定性、重復(fù)性良好，可作為復(fù)方丹參丸的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞：復(fù)方丹參丸；丹酚酸B；高效液相色譜

Determination of Salvianolic acid B in Fufang Danshen Pill by HPLC

ZHANG Qian，SUN Yan-lii ，GAO Xiao-yan，CHEN Mei-ling，LING Ya

（Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co.， Ltd.， Lianyungang 222047，Jiangsu，China）

Abstract：Objective To establish a HPLC method for Salvianolic acid B in Fufang Danshen Pill. Methods A Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）column was used with the mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid（22：78）， at the detection wavelength was 286nm. The column temperature was 30℃.The flow rate was 1.0ml·min-1 . Results Salvianolic acid B was linear at the range of 0.1034μg～1.034μg（r = 1.000）. The recovery was 98.2% ，and RSD was1.2% （n = 9） . Conclusion The method is specific and accurate. The method are stable with good reproducibility， and can be used for the quality control of Fufang Danshen Pill.

Key words：Fufang Danshen Pil； Salvianolic acid B； HPLC

復(fù)方丹參丸由丹參、三七、冰片三味中藥經(jīng)提取精制而成，為黑色的濃縮丸，除去包衣后丸芯顯棕黃色至棕褐色；氣芳香，味微苦。復(fù)方丹參丸系國(guó)家藥典收載的經(jīng)典中成藥方，具有活血化瘀、通絡(luò)止痛、理氣開(kāi)竅的功效，用于心脈瘀阻、氣血凝滯所致的冠心病、心絞痛之胸悶、心悸、心痛、氣短、面色蒼白、四肢厥冷、唇舌青紫黯紅等癥。

丹參的主要化學(xué)成分包括丹參酚酸B為代表的水溶性酚酸類化合物和以丹參酮ⅡA為代表的醇溶性菲醌類化合物，丹酚酸B是丹參水溶性成分中最主要的活性成分[1]，在總酚酸類成分中含量最高，且活性最強(qiáng)?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有丹參酮ⅡA的含量測(cè)定方法，為加強(qiáng)本品內(nèi)在質(zhì)量控制，我們參考復(fù)方丹參片的藥典標(biāo)準(zhǔn)[2]，增加了用高效液相色譜法測(cè)定丹酚酸B的含量，同時(shí)對(duì)方法中供試品制備的提取溶劑、提取方法、提取時(shí)間、提取溶劑用量均進(jìn)行了考察，制定了本品中的丹酚酸B含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀，VWD紫外檢測(cè)器，所用軟件為ChemStation色譜工作站。Milli-Q Advantage A10 超純水機(jī)，Satorius ME5電子分析天平，KQ-250DV超聲波清洗儀，電熱恒溫水浴鍋。

1.2試藥 復(fù)方丹參丸（江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，規(guī)格：每袋裝1g，批號(hào)120601、120602、130801、131001）；丹酚酸B對(duì)照品，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院（批號(hào)為111562-201212）；乙腈（色譜純，美國(guó)天地公司）；水為超純水；其他試劑均為分析純。

1.3色譜條件 色譜柱：Kromasil色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（22：78），流速：1.0ml·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：286nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μl。見(jiàn)圖1。

圖1 丹酚酸B對(duì)照品（A）、復(fù)方丹參丸樣品（B）及復(fù)方丹參丸陰性對(duì)照品（C）HPLC色譜圖

1.4溶液的制備

1.4.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱取置五氧化二磷減壓干燥器干燥14h的丹酚酸B對(duì)照品適量，加稀乙醇制成每1ml含丹酚酸B為50μg的溶液，即得。

1.4.2供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)（通過(guò)四號(hào)篩），取約0.1g，精密稱定，置50ml 容量瓶中，加稀乙醇適量，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）30min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，即得。

1.4.3陰性對(duì)照品溶液的制備 取缺丹參的其他各味中藥按處方及制備工藝制成陰性供試樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

1.5線性關(guān)系考察 精密稱取置五氧化二磷減壓干燥器干燥14h的丹酚酸B對(duì)照品適量，制得一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液（濃度為103.4μg/ml），將儲(chǔ)備液分別稀釋成濃度為10.34μg/ml、20.68μg/ml、41.36μg/ml、62.04μg/ml、82.72μg/ml、103.4μg/ml的溶液。分別進(jìn)樣10μl，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得丹酚酸B回歸方程為Y=11.962X-2.5682，r=1.0000。結(jié)果表明丹酚酸B在0.1034μg～1.034μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

1.6精密度 精密吸取10μl的丹酚酸B為對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算RSD值為0.2%，結(jié)果表明該方法精密度良好。

1.7重復(fù)性 取同一供試品（批號(hào)為130801），按1.4.2制備供試品溶液，平行制備6份，測(cè)定，結(jié)果顯示，丹酚酸B的含量為25.33mg/g，RSD=0.6%；結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

1.8中間精密度、穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品（批號(hào)為130801），按1.4.2制備供試品溶液，計(jì)算RSD值丹酚酸B為0.8%，結(jié)果表明該方法中間精密度良好。分別在第0、1、2、4、8、12、24h進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算峰面積RSD值丹酚酸B為0.9%，結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定良好。

1.9回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品九份，按1.4.2制備供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，見(jiàn)表1。

試驗(yàn)結(jié)果表明，丹酚酸B平均回收率為98.2%，RSD為1.2%。

1.10樣品測(cè)定 取4批樣品，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。

2 討論

丹酚酸B為水溶性的酚性酸化合物，是丹參水溶性成分中最主要的活性成分[1]，其含量能在一定程度上反應(yīng)復(fù)方丹參丸的質(zhì)量。根據(jù)丹酚酸B的全波長(zhǎng)紫外吸收光譜及文獻(xiàn)[2-6]，選擇286nm做為測(cè)定波長(zhǎng)，經(jīng)試驗(yàn)在此波長(zhǎng)下，供試品色譜中丹酚酸B峰與其它雜質(zhì)峰達(dá)到很好的分離，陰性樣品無(wú)干擾。通過(guò)本文研究可得出，丹酚酸B紫外吸收光譜相似度達(dá)到97%。最終確定提取方案為：50ml的稀乙醇，超聲（250W，40Hz）提取30min。

復(fù)方丹參丸現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有丹參酮ⅡA的含量測(cè)定方法，為加強(qiáng)本品內(nèi)在質(zhì)量控制，增加了用高效液相色譜法測(cè)定丹酚酸B的含量。本實(shí)驗(yàn)建立的方法操作簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可作為復(fù)方丹參丸質(zhì)量控制的依據(jù)。

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編輯/金昊天