摘要：泌尿生殖道支原體培養(yǎng)液顯色培養(yǎng)方法具有簡便、迅速等優(yōu)點(diǎn)，因而得到了廣泛應(yīng)用。但是當(dāng)前使用的液體顯色培養(yǎng)方法依據(jù)的是支原體的生化反應(yīng)：在生長中會分解尿素或是精氨酸產(chǎn)生出NH3來，引起培養(yǎng)基pH的升高，顏色也從黃色變化為紅色[1，3]。對于泌尿生殖道的標(biāo)本使用該方式來培養(yǎng)，可以分解尿素或是精氨酸的微生物可能會對結(jié)果判斷造成干擾[4-6]。本文就對當(dāng)前泌尿生殖道支原體液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)的研究進(jìn)展實(shí)行綜述。

關(guān)鍵詞：泌尿生殖道；支原體；液體培養(yǎng)；固體培養(yǎng)

解脲脲原體（Uu）以及人型支原體（Mh）是人類泌尿生殖道中分離率和致病性比較強(qiáng)的支原體，會引發(fā)腎盂腎炎、陰道炎、盆腔炎以及宮頸炎等，因此對于泌尿生殖道支原體的準(zhǔn)確性檢測很重要。

1支原體培養(yǎng)研究意義

對人體的泌尿生殖道存在致病性的支原體為解脲脲原體、生殖支原體、人型支原體和發(fā)酵支原體。其中解脲脲原體和人型支原體的臨床感染最為常見[7-8]。這兩種致病支原體會分解出精氨酸進(jìn)而產(chǎn)生NH3，使得培養(yǎng)基變紅色并且十分清亮，這一現(xiàn)象可以提示存在支原體的生長。生殖支原體會分解出糖產(chǎn)酸使得培養(yǎng)基變成黃色。發(fā)酵支原體可以對精氨酸進(jìn)行分解產(chǎn)生NH3引起培養(yǎng)基pH的升高，并且會對葡萄糖產(chǎn)生分解作用，使得pH降低，達(dá)到酸堿中和，使得培養(yǎng)基的顏色保持不變。

2液體和固體培養(yǎng)研究

2.1液體顯色培養(yǎng)法 液體顯色培養(yǎng)法可以對尿素和精氨酸進(jìn)行分解的微生物如細(xì)菌和真菌數(shù)量達(dá)到一定的量或者是加入在培養(yǎng)基內(nèi)的抗生素出現(xiàn)了耐藥性，便可以實(shí)現(xiàn)大量的生產(chǎn)繁殖，使得培養(yǎng)基變?yōu)榧t色，對結(jié)果判斷產(chǎn)生干擾[9]。

2.2固體培養(yǎng)法具有的優(yōu)點(diǎn)有 支原體可以在一定時(shí)間內(nèi)生長出形態(tài)比較典型的菌落，進(jìn)而可以對菌種的純化做出進(jìn)一步的研究；造成的污染比較少，并且結(jié)果十分容易被判斷出來；同時(shí)還能對多種支原體實(shí)現(xiàn)鑒別[10]。Alison李松等人在分離女性生殖道的支原體中，將標(biāo)本接種至肉湯內(nèi)實(shí)行培養(yǎng)過夜之后，無論顏色是否出現(xiàn)了變化，都接種在固體的平板上，結(jié)果少數(shù)標(biāo)本出現(xiàn)了典型的支原體菌落，但是肉湯在 1w并沒有出現(xiàn)任何的顏色變化，在很多試驗(yàn)中也會出現(xiàn)這種情況，即使固體培養(yǎng)結(jié)果呈現(xiàn)陽性，但是液體培養(yǎng)結(jié)果呈現(xiàn)的是陰性。何潔鈿等對1150例宮頸分泌物樣本內(nèi)的Uu進(jìn)行檢測中，固體培養(yǎng)法呈現(xiàn)陽性但是液體培養(yǎng)法出現(xiàn)陰性的例數(shù)有34例。

3兩種培養(yǎng)方式的分析

在陳佑明、勞小斌和劉京平[11-12]等人使用了液體顯色培養(yǎng)法，其中導(dǎo)致假陽性細(xì)菌分別為是表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌以及變形桿菌，三種菌都可以分解出尿素，使得培養(yǎng)基變得混濁。此外，女性標(biāo)本的上皮細(xì)胞、白細(xì)胞以及雜菌比較多的情況下會引起培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，即使真的存在支原體生長，培養(yǎng)基變成紅色并出現(xiàn)渾濁，導(dǎo)致誤判為陰性而出現(xiàn)漏驗(yàn)的情況。對此，使用液體顯色培養(yǎng)法對支原體實(shí)行檢測的過程中，若是培養(yǎng)基變?yōu)榧t色，并且出現(xiàn)了渾濁，需要實(shí)行固體培養(yǎng)法來培養(yǎng)，排除由于細(xì)菌的產(chǎn)生出現(xiàn)的假陽性以及標(biāo)本原因誤判導(dǎo)致的假陰性。其中部分真菌脲酶為陽性，會對尿素實(shí)行分解，使得培養(yǎng)基變?yōu)榧t色[13]。

楊穎、羅永慧[14-15]等人對比了液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)方法在泌尿生殖道支原體檢測上的可靠性，使用液體培養(yǎng)基和固體A7瓊脂培養(yǎng)實(shí)施平行檢測106例宮頸分泌物樣本Uu和Mh。在監(jiān)測Uu中液體培養(yǎng)法出現(xiàn)陽性的人數(shù)是66例，固體培養(yǎng)法呈現(xiàn)出陽性的患者人數(shù)是49例；檢測Mh上時(shí)，液體培養(yǎng)法陽性24例，固體培養(yǎng)法17例，兩種培養(yǎng)法對培養(yǎng)Uu和Mh的陽性率不存在明顯的差異，其中液體培養(yǎng)法的靈敏度較高，特異性較低，而固體培養(yǎng)法恰好相反，特異性高但是靈敏度低。因此在監(jiān)測泌尿生殖道支原體中，盡量結(jié)合使用兩種方法，實(shí)現(xiàn)兩種方法的互補(bǔ)，進(jìn)一步提升檢測準(zhǔn)確度。此外，在唐之儉[16-17]等人的研究中得知，液體培養(yǎng)法檢測泌尿生殖道支原體感染出現(xiàn)假陽性概率比較高，需要進(jìn)一步結(jié)合固體培養(yǎng)檢測結(jié)果來判斷。

4泌尿生殖道支原體培養(yǎng)中的問題及對應(yīng)策略

在甘超和占滿桂[18]等人的研究中得知在泌尿生殖道支原體培養(yǎng)中存在的問題有：485例標(biāo)本內(nèi)出現(xiàn)了58例假陽性，假陽性率是12%，分析原因后得知是由于雜菌的污染造成。該實(shí)驗(yàn)的原理是在液體營養(yǎng)培養(yǎng)基內(nèi)加入尿素以及精氨酸當(dāng)做是底物，當(dāng)存在Uu和MH生長的情況下，對尿素和精氨酸產(chǎn)生了分解作用，導(dǎo)致pH值的升高，此時(shí)的培養(yǎng)基顏色從黃變?yōu)榧t，在培養(yǎng)基內(nèi)加入抑制細(xì)菌物質(zhì)或是殺菌劑等。該反應(yīng)沒有了特異性，這可能是因?yàn)槠渌退幮缘奈⑸镌谏L、代謝中使得培養(yǎng)基逐漸變紅，造成了假陽性的結(jié)果。

對應(yīng)的策略為判斷支原體陽性結(jié)論時(shí)要結(jié)合相應(yīng)的固體培養(yǎng)基典型支原體菌落，不但要依據(jù)液體顏色變化進(jìn)行判斷。在實(shí)際工作內(nèi)，若液體培養(yǎng)基變?yōu)榧t色后要繼續(xù)轉(zhuǎn)而實(shí)行固體培養(yǎng)基，觀察是否出現(xiàn)了典型菌落。

通過對268例陰性標(biāo)本延長固體培養(yǎng)時(shí)間后，出現(xiàn)了49例陽性，其假陰性率是10%。分析原因可以得知，主要是由于標(biāo)本的支原體含量比較少，在48 h內(nèi)，支原體的生長速度十分緩慢，且代謝產(chǎn)物NH3的濃度并不夠，酚紅指示劑沒有顯色或者是顯色不夠明顯。實(shí)行的對應(yīng)策略為，延長培養(yǎng)時(shí)間，有效提升陽性的檢出率。在48 h陰性結(jié)果下采取發(fā)初步報(bào)告，隨后繼續(xù)實(shí)行培養(yǎng)。利用該種方法可以顯著提升陽性率。

5結(jié)論

經(jīng)過對比和分析Uu和Mh兩種培養(yǎng)方法的靈敏度以及特異度，得知液體培養(yǎng)法的靈敏度高特異性低，而固體培養(yǎng)剛好相反。支原體的分離培養(yǎng)中包含了肉湯增菌以及轉(zhuǎn)種固體平板兩種方式。因此建議在實(shí)行泌尿生殖道支原體檢測過程中，結(jié)合兩種方法實(shí)行平行檢測，對兩種方法的不足實(shí)現(xiàn)彌補(bǔ)，進(jìn)而有效提升檢測的準(zhǔn)確度，為臨床提供更好的服務(wù)。

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編輯/孫杰