摘要：目的 建立參烏益腎片中芍藥苷的含量測(cè)定方法。方法 采用水浴回流提取，HPLC測(cè)定法，用C18柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液（15：85）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm。結(jié)果 用甲醇水浴回流30 min的方法提取參烏益腎片中芍藥苷，HPLC法測(cè)定芍藥苷含量，精密度的RSD%為0.2%，重復(fù)性RSD%為0.3%，加樣回收率為98.6%。結(jié)論 采用回流提取HPLC法測(cè)定參烏益腎片中芍藥苷方法可行。

關(guān)鍵詞：參烏益腎片；芍藥苷；高效液相色譜法

Method for Determination of the Content of Peony in ShenWuYiShen Tablet

LIU Qin，CHEN Mei-li，ZHANG Juan，HUO Yan-ping，GAO Xiao-yan

（Jiangsu Kanion Pharmaceutical Limited by Share Ltd，Lianyungang 222047，Jiangsu，China）

Abstract：Objective To establish and kidney in wu yi paeoniflorin content determination method. Methods The water bath reflux extraction， HPLC assay， using C18 column， acetonitrile - 0.1% acetonitrile （15：85） as mobile phase， the detection wavelength：230nm. Results 30 minutes with methanol water bath reflux method to extract and kidney in wu yi paeoniflorin， the HPLC method for the determination of the content of Rutin the precision of the RSD%0.2%，repetitive RSD%0.3%，the rate of recovery was 98.6%.Conclusion Using the method of reflux extraction and HPLC determination and kidney

Key words：Shenwuyishen tablet；Paeoniflorin；HPLC

參烏益腎片處方由制何首烏、菟絲子、太子參、麩炒蒼術(shù)、枸杞子、懷牛膝、澤蘭、赤芍、茯苓、澤瀉、車前子、熟大黃十二味藥材組成，具有補(bǔ)腎健脾，活血利濕的功效。用于改善慢性腎小球腎炎所致的慢性腎衰竭（代償期、失代償期和衰竭期）非透析患者氣陰兩虛兼濕濁證患者出現(xiàn)的惡心、嘔吐、食少納呆、口干咽燥、大便干結(jié)等?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBZ00872010。為更好控制產(chǎn)品質(zhì)量，對(duì)本品中赤芍進(jìn)行含量測(cè)定方法的研究。參考目前同類制劑測(cè)定赤芍含量的方法[1-3]，本文采用高效液相法對(duì)參烏益腎片中芍藥苷含量進(jìn)行研究。

1 資料與方法

1.1儀器與試藥

1.1.1儀器 高效液相色譜儀（Agilent 1100），水浴鍋，PerkinElmer Lambda 25型紫外可見分光光度計(jì)，C18色譜柱（250×4.6mm，Agilent），超聲波清洗器。

1.1.2試藥 參烏益腎片由江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司制得，芍藥苷對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所（批號(hào)：110736-201539）；乙腈為色譜純，水為自制超純水，磷酸、95%乙醇、甲醇、無(wú)水乙醇為分析純。

1.2 方法學(xué)考察[3]與結(jié)果

1.2.1色譜條件 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（250×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15：85）[4]；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min。

1.2.2對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品4 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得，濃度為40 μg/ml。

1.2.3供試品溶液的制備[4] 取本品20片，稱定重量，研細(xì)，精密稱取0.5 g，置250 ml平底燒瓶中，精密加入甲醇50 ml，水浴回流30 min提取，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.1準(zhǔn)確度驗(yàn)證 取已知含量的樣品（芍藥苷含量：3.44 mg/g）九份，每份0.5 g，精密稱定，置燒瓶中，第1～3份分別加入對(duì)照品1.38 mg，第4～6份分別加入同一對(duì)照品1.72 mg，第7～9份分別加入同一對(duì)照品2.06 mg，制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算芍藥苷的平均回收率為98.6%，RSD%為1.5%，該方法準(zhǔn)確度良好。

2.2重復(fù)性驗(yàn)證 取樣品，按供試品溶液制備方法制備，平行制備6份，測(cè)定其含量結(jié)果分別為3.441 mg/g、3.449 mg/g、3.442 mg/g、3.426 mg/g、3.440 mg/g、3.444 mg/g，計(jì)算6個(gè)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%為0.3%，試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.3精密度實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算其峰面積RSD%為0.2%，結(jié)果表明精密度良好。

2.4專屬性驗(yàn)證 陰性對(duì)照品溶液的制備：取按處方及制備工藝制備不含赤芍的陰性對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。取對(duì)照品溶液，陰性對(duì)照品溶液與供試品溶液共同進(jìn)高效液相進(jìn)行測(cè)定。見圖1～圖3。

結(jié)果：陰性對(duì)照品溶液色譜圖中，在與對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處，未顯示色譜峰；而供試品溶液色譜圖中，在與對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處，顯示色譜峰。

2.5線性關(guān)系考察 精密稱取芍藥苷對(duì)照品10.20 mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取上述溶液1、2、5、6、10、15 ml，分別置20 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。在已確定的色譜條件下，分別吸取上述7份對(duì)照品溶液進(jìn)樣10 ul，測(cè)定峰面積。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，芍藥苷濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程：y=9.861x-0.089，r=1。表明芍藥苷在5.1～102 ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6穩(wěn)定性考察 取供試品溶液，室溫放置，依上述方法分別在0、2、4、8、12、24 h測(cè)定6次。結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD%為0.4%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

3 討論

3.1檢測(cè)過(guò)程中通過(guò)參考文獻(xiàn)及對(duì)照品溶液的全波長(zhǎng)掃描，對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行了選擇，以溶劑為空白在200～400 nm范圍內(nèi)繪制吸收光譜圖。實(shí)驗(yàn)表明，芍藥苷在230 nm具最大吸收，當(dāng)采用230 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，芍藥苷檢測(cè)靈敏度高，雜質(zhì)峰較少，基線較平穩(wěn)，且雜質(zhì)均不干擾測(cè)定，故選擇230 nm為其檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2色譜條件耐用性考察 本文對(duì)不同品牌色譜柱、不同柱溫和不同流動(dòng)相比例進(jìn)行了考察，結(jié)果表明本文采用的色譜條件耐用性良好。

3.3提取方法的考察 采用正交試驗(yàn)法優(yōu)化提取方法，考察提取溶劑、提取時(shí)間、提取方法及溶劑用量，4個(gè)因素對(duì)提取結(jié)果的影響。最終確定提取方案為：50 ml的甲醇，回流提取30min。

參考文獻(xiàn)：

[1]朱冠華，李曉宇.HPLC法同時(shí)測(cè)定參芍胃安顆粒中芍藥苷和黃芩苷的含量[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，31（3）.

[2]凌明，馬安宇.HPLC測(cè)定胃腸合劑中芍藥苷和黃芩苷的含量[J].中成藥，2008，9（34）.

[3]蔡芳，董珉翔. HPLC測(cè)定慈蓮?fù)柚猩炙庈蘸縖J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2013 （31）.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：158.

編輯/金昊天