消毒和滅菌是保護(hù)人員和環(huán)境不被病原微生物感染和污染的重要環(huán)節(jié)。含有病原微生物的廢物必須經(jīng)過(guò)滅菌才能作為普通廢物處理；對(duì)操作中可能產(chǎn)生的迸濺或泄漏，必須通過(guò)消毒達(dá)到對(duì)病原微生物的殺滅，對(duì)操作人員進(jìn)行保護(hù)，對(duì)環(huán)境保護(hù)。消毒和滅菌的基本常識(shí)對(duì)于實(shí)驗(yàn)室生物安全是至關(guān)重要的。

消毒是通過(guò)物理或化學(xué)手段殺滅或清除病原微生物，但不一定能殺死所有細(xì)菌芽孢的方法。滅菌是殺滅物體上的所有微生物，包括病原性和非病原性微生物、細(xì)菌繁殖體和芽孢的一切方法[1]。消毒與滅菌的方法可分為物理方法和化學(xué)方法兩大類(lèi)：①物理消毒滅菌法：包括熱力法、射線法和過(guò)濾法三種。超聲波、干燥、冷凍也能殺菌抑菌。熱力滅菌法是利用熱能去變性蛋白質(zhì)或核酸、破壞細(xì)胞膜或胞膜來(lái)實(shí)現(xiàn)殺死微生物。分干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類(lèi)。②化學(xué)消毒滅菌法：消毒劑在常用的濃度下，只對(duì)細(xì)胞的繁殖體有效，對(duì)其芽孢則需要提高消毒劑的濃度和延長(zhǎng)作用時(shí)間[2]。

1 物理消毒滅菌法

1.1熱力滅菌法

1.1.1干熱滅菌法 常用的干熱滅菌法有：干烤、燒灼、焚燒。焚燒常用于可廢棄的污染物及人或動(dòng)物的尸體的滅菌；燒灼用于微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)接種微生物所用器材的滅菌，也可用于外科手術(shù)器材的應(yīng)急處理。干烤滅菌可用于耐高溫的玻璃制品、金屬制品、糖瓷制品、油劑等的滅菌。干烤滅菌是在干烤箱內(nèi)進(jìn)行的。使用烤箱滅菌時(shí)，要求器械和用品應(yīng)洗凈、涼干或擦干，物品包裝不易過(guò)大，粉劑和油劑厚度不宜超過(guò)1.3cm，箱內(nèi)裝載物品不宜超過(guò)烤箱高度的2/3，物品間應(yīng)留有空隙。滅菌時(shí)間應(yīng)從溫度升高到要求時(shí)算起，一般170℃時(shí)需60 min，160℃時(shí)需120 min。

1.1.2常用的濕熱滅菌方法 煮沸、流通蒸汽、低熱消毒（巴氏消毒）、間歇滅菌（廷德氏滅菌）、高壓蒸汽滅菌等方法。高壓蒸汽滅菌法可殺滅包括芽孢在內(nèi)的所有微生物，是滅菌效果最好、應(yīng)用最廣的滅菌方法。本實(shí)驗(yàn)室使用的是全自動(dòng)立式高壓滅菌器，在103.4KPa蒸汽壓下，溫度達(dá)到121.3℃，維持15～20 min。適用于普通培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)器戒、玻璃容器及注射器、敷料等物品的滅菌。

1.2射線滅菌法 實(shí)驗(yàn)室常用的射線是紫外線，殺菌作用最強(qiáng)的波段是250～260 nm。當(dāng)微生物被紫外線照射可引起細(xì)胞內(nèi)成分，特別是核酸、原漿蛋白與酶的化學(xué)變化，從而使之死亡。紫外線可以殺滅各種微生物。紫外線燈的實(shí)際應(yīng)用是對(duì)空氣的消毒，用紫外線消毒空氣是一種簡(jiǎn)單、方便、廉價(jià)、效果可靠的方法，可用于病房、手術(shù)室、微生物實(shí)驗(yàn)室、無(wú)菌車(chē)間等場(chǎng)所的空氣消毒。本實(shí)驗(yàn)室每次微生物實(shí)驗(yàn)課后都要用紫外線燈照射30 min，殺菌效果非常好。紫外線可損傷皮膚和角膜，應(yīng)注意防護(hù)。

2 化學(xué)消毒滅菌法

正確使用化學(xué)消毒劑可以確保實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所的安全，減少來(lái)自感染性物質(zhì)的危險(xiǎn)?；瘜W(xué)消毒劑的作用時(shí)間因品種和廠商而異，應(yīng)按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)配制和使用。

2.1醛類(lèi)消毒劑 常用有甲醛和戊二醛兩種。這兩種消毒劑對(duì)微生物的作用主要依靠醛基使菌體蛋白質(zhì)及核酸烷基化，引起蛋白質(zhì)變性、凝固，造成微生物死亡。

甲醛、戊二醛的水溶液與氣體都有廣譜殺菌作用，對(duì)細(xì)菌繁殖體、芽胞、分枝桿菌、真菌、病毒都有較強(qiáng)的殺滅作用。2%戊二醛堿性水溶液，作用2 min可殺滅細(xì)菌繁殖體，但對(duì)細(xì)菌芽胞，則需作用3 h才能殺滅。甲醛氣體濃度15 mg/L，作用2 h可殺滅細(xì)菌繁殖體，作用12 h才能殺滅細(xì)菌芽胞。甲醛可用于大多數(shù)物品的消毒或滅菌，特別適于忌濕物品如毛、皮制品的熏蒸消毒，生物制品的防腐，醫(yī)療用品的滅菌，但不適于食品的消毒。戊二醛常用于滅菌或消毒醫(yī)療器械，特別適用于金屬器械和忌熱的精密儀器，如內(nèi)窺鏡、麻醉裝置、人工呼吸器等。也可用于衛(wèi)生防疫消毒。戊二醛多用于液體浸泡和擦拭消毒。用2%戊二醛溶液（堿性、酸性強(qiáng)化或中性均可），浸泡醫(yī)療器械，一般細(xì)菌繁殖體消毒浸泡10 min，肝炎病毒消毒浸泡30 min，要完全滅芽胞應(yīng)浸泡4～10 h。用2%戊二醛溶液拭門(mén)、窗、桌、椅、床、墻或地面等，戊二醛一般腐蝕性弱，戊二醛對(duì)人和動(dòng)物的皮膚粘膜有刺激性，特別接觸濃溶液時(shí)應(yīng)戴橡皮手套，防止濺入眼內(nèi)或吸入，萬(wàn)一接觸眼睛或皮膚立即用大量水沖洗。戊二醛可引起皮膚過(guò)敏反應(yīng)，但對(duì)人的全身性毒性反應(yīng)輕微。甲醛和戊二醛必須在通風(fēng)櫥或通風(fēng)良好的地方使用。

2.2含氯消毒劑 殺菌譜廣，高效、低毒，對(duì)細(xì)菌繁殖體、病毒、真菌孢子及細(xì)菌芽胞都有殺滅作用，廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)廢棄物、試驗(yàn)器械、環(huán)境、地面、空氣等。①浸泡法：將待消毒的物品放入裝有含氯消毒劑的容器內(nèi)，加蓋。對(duì)細(xì)菌繁殖體污染的物品的消毒，用含有效氯200 mg/L的消毒劑浸泡10 min，對(duì)結(jié)核桿菌、肝炎病毒和細(xì)菌芽胞污染物品的消毒，用含有效氯2000 mg/L消毒液浸泡30 min。②擦拭法：對(duì)不能用浸泡消毒的物品可用擦拭法。消毒所用藥物濃度和作用時(shí)間參見(jiàn)浸泡法。③噴灑法：對(duì)一般污染的物品表面，用1000 mg/L的消毒液均勻噴灑（墻面：200 ml/m2；水泥地面，350 ml/m2，土質(zhì)地面，1000 ml/m2），作用30 min以上；對(duì)肝炎病毒和結(jié)核桿菌污染的表面的消毒，用含有效氯2000 mg/L 的消毒液均勻噴灑（噴灑量同前），作用60 min以上。本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常用1000 mg/L的含氯消毒液對(duì)實(shí)驗(yàn)室的地面、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和空氣進(jìn)行噴灑消毒。

2.3碘伏及其他含碘消毒劑 含碘消毒劑是一類(lèi)用途廣泛的廣譜消毒劑，目前，醫(yī)學(xué)上常用的碘消毒劑有碘酊和碘伏，碘酊及碘伏是中效消毒劑，可以殺滅細(xì)菌芽胞以外的各種致病性微生物，常用于手及皮膚表面的消毒。皮膚、傷口消毒時(shí)，用2%碘酊涂搽，作用1 min，需要時(shí)可用70%乙醇將殘余碘擦凈。碘伏一般稀釋成一定濃度的水溶液使用，衛(wèi)生洗手消毒用500 mg/L有效碘溶液浸泡2 min；對(duì)外科洗手用含有效碘3000～5000 mg/L擦拭3 min。

2.4季銨鹽類(lèi)消毒劑 季銨鹽類(lèi)消毒劑是一種陽(yáng)離子表面活性劑。此類(lèi)消毒劑是低效消毒劑，其殺菌機(jī)制主要是損傷細(xì)胞膜，滅活氧化酶，同時(shí)可使蛋白質(zhì)變性凝固而使細(xì)菌死亡。這類(lèi)消毒劑中最常用的是新潔爾滅（十二烷基二甲基苯甲基溴化銨）。新潔爾滅耐光、耐熱，性質(zhì)較穩(wěn)定，可長(zhǎng)期貯存。新潔爾滅對(duì)化膿性病原菌、腸道菌與部分病毒有一定的殺滅能力；對(duì)結(jié)核桿菌與真菌的殺滅效果不好；對(duì)細(xì)菌芽胞僅有抑菌作用。對(duì)污染物品表面消毒，可用0.1～0.5%濃度溶液噴灑、浸泡或擦抹，作用10～60 min，水質(zhì)過(guò)硬，濃度應(yīng)提高1～2倍。消毒皮膚可用0.1%～0.5%濃度溶液涂抹、浸泡。消毒粘膜可用0.02%。本實(shí)驗(yàn)室常用0.1%～0.5%的新潔爾滅浸泡污染的玻片、吸管、移液管及手術(shù)器戒。用0.5%的新潔爾滅對(duì)污染的地面、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面進(jìn)行擦抹。

3 討論

消毒、滅菌效果往往會(huì)受到各種因素和條件的影響與限制，所以在消毒之前，要根據(jù)消毒的目的、條件和環(huán)境情況等因素綜合考慮，選擇一種或幾種切實(shí)可行的消毒方法。

參考文獻(xiàn)：

[1]陸德源，任中原，等.醫(yī)學(xué)微生物學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：5.

[2]谷鴻喜，陳錦英，等.醫(yī)學(xué)微生物學(xué)[M].北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2010：1-12.

編輯/金昊天