劉麗穎

哈藥集團(tuán)制藥六廠 150000

高效液相色譜法測(cè)定小兒氨酚黃那敏顆粒中馬來酸氯苯那敏含量

劉麗穎

哈藥集團(tuán)制藥六廠 150000

目的：通過高效液相色譜法對(duì)小兒氨酚黃那敏顆粒中馬來酸氯苯那敏的含量進(jìn)行精準(zhǔn)測(cè)定。方法：在（200mm×4.6nm，5μm）標(biāo)準(zhǔn)色譜柱條件下，以乙腈-0.5%十二烷基硫酸鈉溶液-磷酸作為流動(dòng)相，其比例為 60:40:1，流速為 1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)研究顯示，馬來酸氯苯那敏進(jìn)樣質(zhì)量濃度現(xiàn)行范圍在6.37-42.50μg/mL之間，其測(cè)定條件為r=0.9995，n=5。此種實(shí)驗(yàn)條件下的RSD值為1.19%（n=9)，測(cè)定可知平均回收率為100.18%。結(jié)論：在小兒氨酚黃那敏顆粒中，馬來酸氯苯那敏的含量測(cè)定過程中，以高效液相色譜法對(duì)其進(jìn)行精準(zhǔn)測(cè)定，測(cè)定方式簡(jiǎn)便、高效，且具有良好的重現(xiàn)性，值得加以推廣應(yīng)用。

小兒氨酚黃那敏；馬來酸氯苯那敏；含量測(cè)定；高效液相色譜法

小兒氨酚黃那敏顆粒是當(dāng)前醫(yī)藥領(lǐng)域內(nèi)比較常見的復(fù)方制劑，以對(duì)乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏以及人工牛黃等作為主要組分，在小兒感冒引起的頭痛及發(fā)熱等方面具有良好的應(yīng)用效果。就小兒氨酚黃那敏中馬來酸氯苯那敏含量測(cè)定情況來看，當(dāng)前國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中僅僅是對(duì)乙酰氨基酚進(jìn)行含量測(cè)定，而在馬來酸氯苯那敏含量測(cè)定上存在一定不足。為準(zhǔn)確把握馬來酸氯苯那敏在小兒氨酚黃那敏中的含量，保證臨床用藥安全性，本文以高效液相色譜法對(duì)馬來酸氯苯那敏進(jìn)行含量測(cè)定，并開展相關(guān)分析，從而對(duì)小兒氨酚黃那敏藥品質(zhì)量進(jìn)行科學(xué)化控制。

1 儀器與試藥

在本次含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)研究中，以德國(guó)生產(chǎn)的KNAUER型高效液相色譜儀作為主要測(cè)定儀器，并選用 LAC-214電子天平對(duì)藥品進(jìn)行稱量。就本次實(shí)驗(yàn)研究中的藥品情況來看，乙腈為色譜純，實(shí)驗(yàn)用水為注射用水，磷酸及十二烷基硫酸鈉為分析純。選取中國(guó)藥品生物制品檢定所的馬來酸氯苯那敏作為對(duì)照品，以促進(jìn)含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)操作的順利進(jìn)行。選用黃石飛云制藥有限公司生產(chǎn)的小兒氨酚黃那敏顆粒進(jìn)行試驗(yàn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

在本次實(shí)驗(yàn)研究中，在標(biāo)準(zhǔn)色譜柱條件下，其規(guī)格為（200mm ×4.6nm，5μm），以乙腈-0.5%十二烷基硫酸鈉溶液-磷酸作為流動(dòng)相，其比例為60:40:1，流速為1.0mL/min，實(shí)際進(jìn)樣量為20 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為 210nm。依照氯苯那敏峰對(duì)理論板數(shù)進(jìn)行計(jì)算后，其實(shí)際結(jié)果為3000或在3000以上。

2.2 溶液制備

在本次實(shí)驗(yàn)研究中，溶液制備質(zhì)量在一定程度上影響著含量測(cè)定的精準(zhǔn)性和有效性。實(shí)驗(yàn)研究人員稱取適量馬來酸氯苯那敏對(duì)照品，待精密稱定后，在其中加入適量流動(dòng)相進(jìn)行稀釋處理，得到對(duì)照品溶液，其質(zhì)量濃度為10μg/mL。在此基礎(chǔ)上，取出小兒氨酚黃那敏可力量10袋，以電子天平對(duì)藥品進(jìn)行質(zhì)量稱定后，將其混合均勻并研磨成細(xì)粉末，在精密稱取適量后，將其置于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的容量瓶?jī)?nèi)，加入 40mL流動(dòng)相，并在 250W 功率以及33kHz頻率下對(duì)其進(jìn)行規(guī)范的超聲處理，待處理半小時(shí)后，以流動(dòng)相對(duì)處理后的藥品進(jìn)行稀釋，并緩慢搖勻，待濾過后，去除續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

在本次實(shí)驗(yàn)研究中，分別以專屬性試驗(yàn)、線性關(guān)系考察、精密度試驗(yàn)以及穩(wěn)定性試驗(yàn)等方式對(duì)供試品溶液進(jìn)行考察，以下進(jìn)行具體分析：

一是專屬性試驗(yàn)。在這一環(huán)節(jié)，取適量馬來酸氯苯那敏的陰性對(duì)照品，基于供試品溶液制備方式制備出相關(guān)的陰性對(duì)照品溶液，并依照色譜條件對(duì)馬來酸氯苯那敏進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陰性對(duì)照品溶液在馬來酸氯苯那敏峰位置處無明顯的吸收峰，該色譜條件下馬來酸氯苯那敏吸收情況色譜圖如圖1所示。

圖1 高效液相色譜圖

二是線性關(guān)系考察。在這一過程中，精密稱取馬來酸氯苯那敏對(duì)照品適量，并置于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的容量瓶?jī)?nèi)，加入流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻后分五次精密吸取不同量，進(jìn)而分別加入流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻后，在進(jìn)樣量為20μL的條件下，對(duì)其峰面積進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定，并以峰面積和質(zhì)量濃度作為基本要素建立線性回歸，得出標(biāo)準(zhǔn)的回歸方程。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)質(zhì)量濃度在6.37-42.50 μg/mL之間時(shí)，馬來酸氯苯那敏與峰面積之間呈現(xiàn)良好的線性相關(guān)關(guān)系。

三是精密度試驗(yàn)。取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定氯苯那敏峰面積。結(jié)果的RSD為0.32%(n =6)，表明儀器精密度良好。

四是穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一供試品溶液，在室溫下放置0，2，4，8，12，24 h后分別進(jìn)樣，測(cè)定氯苯那敏的峰面積。結(jié)果的RSD為0.31%(n=6)，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

五是重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批(批號(hào)為20120801)樣品，依法測(cè)定6次。結(jié)果馬來酸氯苯那敏含量為標(biāo)示量的98.01%，RSD為0.33%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

六是加樣回收試驗(yàn)。精密稱取已測(cè)定含量的樣品 9份(批號(hào)為20120801，含量161.2μg/g)，精密加入對(duì)照品溶液2，3，4mL(質(zhì)量濃度為152.92μg/mL)，按供試品溶液制備方法進(jìn)行處理，測(cè)定含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 馬來酸氯苯那敏加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

取樣品3批，按擬訂方法測(cè)定樣品含量。結(jié)果批號(hào) 20120801，20120802，20120803的3批樣品中，馬來酸氯苯那敏的含量(標(biāo)示量)分別為97.99%，97.82%，97.48%，RSd分別為0.68%，0.75%，0.72%。

3 討論

采用乙腈-0．5%十二烷基硫酸鈉溶液-磷酸(60∶40∶0.1)流動(dòng)相體系所得色譜圖，馬來酸氯苯那敏的峰形優(yōu)，分離效果好，保留時(shí)間適中。供試品溶液和對(duì)照品溶液中，馬來酸氯苯那敏呈解離狀態(tài)存在，故在色譜圖中出現(xiàn)有馬來酸峰。因此，在馬來酸氯苯那敏含量測(cè)定時(shí)以氯苯那敏峰面積來計(jì)算。在預(yù)試驗(yàn)中，分別采用了加熱回流和超聲波提取的方法，以正交試驗(yàn)的方法對(duì)小兒氨酚黃那敏顆粒中馬來酸氯苯那敏含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果加熱回流和超聲波提取在含量上基本一致，為簡(jiǎn)化操作，選擇超聲波提取，根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果確定了小兒氨酚黃那敏顆粒供試品溶液的制備方法。

馬來酸氯苯那敏制劑有片劑、注射劑，又名撲爾敏，抗組胺類藥，本品通過對(duì)H1受體的拮抗起到抗過敏作用。主要用于鼻炎、皮膚黏膜過敏及緩解流淚、打噴嚏、流涕等感冒癥狀。在含量測(cè)定方面，取本品約0.15g，精密稱定，加冰醋酸10ml溶解后，加結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液顯藍(lán)綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于 19.54mg的 C16H19ClN2.C4H4O4。本品除有較強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)性阻斷變態(tài)反應(yīng)靶細(xì)胞上組胺H1受體的作用，通過對(duì)H1受體的拮抗起到抗過敏作用外，還具有抗M膽堿受體作用，故服藥后可出現(xiàn)口干、便秘、痰液變稠、鼻黏膜干燥等癥狀。另外該藥還具有一定的抑制中樞的作用，因此可出現(xiàn)服藥后的困倦不良反應(yīng)。

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1672-5018（2016）09-005-02