徐治群　李秀梅

1)湖北省榮軍醫(yī)院　武漢　430079　2)湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬襄陽醫(yī)院　襄陽　441000

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神經(jīng)末梢受體在胃食管反流病中的作用

徐治群1)李秀梅2)

1)湖北省榮軍醫(yī)院武漢4300792)湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬襄陽醫(yī)院襄陽441000

【摘要】目的探討辣椒素受體(TRPV1，也稱瞬時(shí)感受器電位香草酸受體1)在胃食管反流疾病(GERD)患者組織中的表達(dá)及其與患者癥狀的關(guān)系。方法利用電子胃鏡采集58例GERD患者[反流性食管炎(RE)患者26例，非糜爛性反流病(NRED)患者32例]及胃鏡檢查正常對(duì)象(對(duì)照組)的食管黏膜組織(胃食管連接處上方3 cm)，采用HE染色評(píng)估組織炎癥反應(yīng)程度、免疫組化染色S-P法判定組織TRPV1表達(dá)情況、反流性疾病診斷問卷(RDQ)對(duì)患者的癥狀評(píng)分并進(jìn)行組間比較和相關(guān)性分析。結(jié)果GERD患者的RDQ癥狀積分、GS炎癥積分與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；RE患者、NRED患者的RDQ癥狀積分分別為16.77±5.39、17.52±5.03，均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，RE患者>NRED患者>對(duì)照組的GS炎癥積分(P<0.05)。GERD患者的TRPV1表達(dá)OD值顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，RE組OD值(0.023 1±0.002 6)顯著高于NRED組和對(duì)照組(P<0.05)，NRED組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。GERD患者與RDQ癥狀積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.517)，與GS炎癥積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.554)；RE患者與RDQ癥狀積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.632)，與GS炎癥積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.532)；NRED患者與RDQ癥狀積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.671)，與GS炎癥積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.512)。結(jié)論GERD患者的TRPV1表達(dá)顯著高于正常人群，且與患者的臨床癥狀、炎癥反應(yīng)的嚴(yán)重程度有一定的相關(guān)關(guān)系。

【關(guān)鍵詞】辣椒素受體；胃食管反流疾?。环戳餍允彻苎?；非糜爛性反流病

胃食管反流指胃食管因過多接觸或暴露于胃液而出現(xiàn)的一種的食管黏膜損傷及食管反流癥狀。胃食管反流發(fā)病誘因多元包括患者自身食管抗反流機(jī)制損傷(如食管下括約肌功能障礙、食管體運(yùn)動(dòng)能力異常等)、食管外機(jī)械因素等[1]。辣椒素受體(vanill oid receptor subtype 1，TRPV1)是鎮(zhèn)痛及疼痛的研究熱點(diǎn)之一，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，TRPV1是疼痛及組織損傷后痛覺敏感化的重要參與物質(zhì)[2]。TRPV1與反流食管炎、功能性消化不良、腸胃道腫瘤等多種消化道疾病存在一定聯(lián)系。為分析TRPV1在胃食管反流疾病(GERD)患者組織中的表達(dá)及其與患者癥狀的關(guān)系，筆者選取本院消化內(nèi)科收治的58例GERD患者進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料以本院消化內(nèi)科2012-09—2014-09收治的58例GERD患者[反流性食管炎(RE)患者26例，非糜爛性反流病(NRED)患者32例]及胃鏡檢查正常對(duì)象30例(對(duì)照組)為研究對(duì)象。RE組26例，男15例，女11例；年齡24～75歲，平均(46.62±12.59)歲。NRED組32例，男18例，女14例；年齡26～77歲，平均(48.17±13.04)歲。對(duì)照組30例，男17例，女13例；年齡28～73歲，平均(45.92±11.08)歲。3組年齡、性別構(gòu)成差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)(1)GERD患者均來自于本院消化內(nèi)科，具有典型的燒心、反流癥狀，胃鏡檢查食管遠(yuǎn)端黏膜未見糜爛等表現(xiàn)，PPI試驗(yàn)陽性；(2)對(duì)照組研究對(duì)象：無燒心、反流等臨床癥狀，在本院接受電子胃鏡檢查但結(jié)果為正常的患者。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn)(1)食管狹窄、消化性潰瘍、食管及胃腫瘤患者、Barrett食管、近2周服用PPI或近1周服用H2受體拮抗劑的患者；(2)合并嚴(yán)重的肝腎功能疾病患者；(3)合并糖尿病、近期服用抗癲癇藥物、口服抗凝血?jiǎng)┗虺鲅约膊』颊撸?4)孕婦及哺乳期婦女。

1.4標(biāo)本采集及處理所有患者均行常規(guī)鏡檢，并取食管下段、胃竇部以及十二指腸球部黏膜組織2 mm×2 mm，選用生理鹽水沖洗，石蠟包埋，切片，烤片，二甲苯脫蠟，修復(fù)抗原，H2O2消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，滴入兔抗人TRPV1多克隆抗體一抗，孵化30 min，PBS洗滌，二抗，洗滌，BAD顯色，蘇木素復(fù)染，鏡檢。

1.5研究方法

1.5.1癥狀積分評(píng)估：本研究采用反流性疾病診斷問卷(RDQ)進(jìn)行癥狀積分評(píng)估，主要包括4各癥狀：燒心、胸痛后疼痛、反酸、反食為主要癥狀，根據(jù)近4周的發(fā)作時(shí)間及頻率進(jìn)行評(píng)分，發(fā)作頻率：從未有過為0分，<1 d/周為1分，1 d/周為2分，2～3 d/周為3分，4～5 d/周為4分，5～6 d/周為5分；癥狀積分：癥狀不明顯，醫(yī)師提醒下發(fā)現(xiàn)為1分；癥狀明顯，影響生活，偶爾需要服藥為3分；癥狀非常明顯，需要長(zhǎng)期服藥5分；癥狀頻率積分及嚴(yán)重程度積分總分為RDQ總積分。

1.5.2HE染色炎癥反應(yīng)程度積分標(biāo)準(zhǔn)：采用GS炎癥評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)組織基底細(xì)胞增生、乳突的延長(zhǎng)、細(xì)胞間隙增大進(jìn)行評(píng)分，分別對(duì)應(yīng)0、1、2分；同時(shí)根據(jù)上皮內(nèi)部嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行評(píng)分：0分為無嗜酸性粒細(xì)胞，1分為1個(gè)嗜酸性粒細(xì)胞，2分為>1個(gè)嗜酸性粒細(xì)胞；兩類評(píng)分相加即為GS評(píng)分總分。

2結(jié)果

2.14組癥狀積分及GS炎癥積分比較GERD患者的RDQ癥狀積分、GS炎癥積分與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；RE、NRED患者的RDQ癥狀積分均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，RE患者>NRED患者>對(duì)照組的GS炎癥積分(P<0.05)。見表1。

表1　4組癥狀積分及GS炎癥積分比較　±s，分)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05，與NRED患者比較，#P<0.05

2.24組食管組織中TRPV1表達(dá)情況比較GERD患者的TRPV1表達(dá)OD值顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，RE組OD值(0.023 1±0.002 6)顯著高于NRED組和對(duì)照組(P<0.05)，NRED組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。見表2、圖1。免疫組化S-P組化染色結(jié)果見圖2。

表2　4組食管組織中TRPV1表達(dá)情況比較　

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與NRED患者比較，#P<0.05

圖1　4組食管組織中TRPV1表達(dá)

ABC

圖2免疫組化S-P組化染色結(jié)果

A：RE患者TRPV1表達(dá)圖，可見棕褐色細(xì)胞

B：NRED患者TRPV1表達(dá)圖，可見棕褐色細(xì)胞

C：對(duì)照組TRPV1表達(dá)圖

2.3相關(guān)性分析 GERD患者與RDQ癥狀積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.517)，與GS炎癥積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.554)；RE患者與RDQ癥狀積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.632)，與GS炎癥積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.532)；NRED患者與RDQ癥狀積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.671)，與GS炎癥積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.512)；對(duì)照組與RDQ癥狀積分、GS炎癥積分均無相關(guān)性。見表3。

表3　GERD患者與RDQ癥狀積分、GS炎癥積分的

3討論

胃食管反流疾病患者臨床癥狀與內(nèi)鏡下黏膜損傷程度不成正比，部分黏膜無異?；颊咭廊淮嬖诜此?、燒心等癥狀，而部分伴胃食黏膜損傷的患者則可能沒有任何臨床癥狀。這種異常情況給胃食管反流疾病病理分析帶來的極大挑戰(zhàn)，為此有學(xué)者給予志愿者注入辣椒素以激活其受體(TRPV1)后發(fā)現(xiàn)，患者胸痛、燒心癥狀顯著增強(qiáng)[3]。國外研究證實(shí)，非糜爛性反流、反流性食管炎患者食管黏膜鱗狀上皮細(xì)胞及固有神經(jīng)纖維內(nèi)均存在TRPV1高表達(dá)情況[4]，這表明TRPV1可能是胃食管反流疾病發(fā)生、發(fā)展的重要影響因子。

TRPV1是-6次螺旋跨膜蛋白質(zhì)的一種，主要分布于背根神經(jīng)節(jié)、結(jié)狀神經(jīng)節(jié)及三叉神經(jīng)節(jié)的小型或中型細(xì)胞內(nèi)容。TRPV1是傷害性刺激整合器的一種，歸屬于感受器電位通道家族，可探測(cè)、整合熱及化學(xué)刺激信號(hào)，在接受刺激后可起到Ca2+內(nèi)流，誘使細(xì)胞內(nèi)Ca2+高表達(dá)，進(jìn)而激活一系列信號(hào)的傳導(dǎo)，形成動(dòng)作電位，最終將信號(hào)反應(yīng)至中樞神經(jīng)系統(tǒng)，使機(jī)體生成灼傷樣疼痛[5]。以往研究顯示，食管TRPV1多集中于神經(jīng)細(xì)胞及神經(jīng)纖維上，但近些年的研究發(fā)現(xiàn)，TRPV1還表達(dá)于食管鱗狀上皮細(xì)胞上，為TRPV1參與食管相關(guān)病理改變提供了更多證據(jù)[6]。食管黏膜層并不存在神經(jīng)細(xì)胞，最多分布少量神經(jīng)纖維末梢，提示胃食管反流疾病可能只與食管鱗狀上皮細(xì)胞內(nèi)的TRPV1有關(guān)[7]。本次研究發(fā)現(xiàn)，GERD患者的TRPV1表達(dá)OD值顯著高于對(duì)照組，RE組OD值顯著高于NRED組和對(duì)照組，NRED組顯著高于對(duì)照組，提示TRPV1高表達(dá)是胃食管反流疾病的重要影響因素。我們的研究中還發(fā)現(xiàn)GERD患者的RDQ癥狀積分、GS炎癥積分與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；RE患者、NRED患者的RDQ癥狀積分均顯著高于對(duì)照組，RE患者>NRED患者>對(duì)照組的GS炎癥積分。此外，GERD患者與RDQ癥狀積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.517)，與GS炎癥積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.554)；RE患者與RDQ癥狀積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.632)，與GS炎癥積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.532)；NRED患者與RDQ癥狀積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.671)，與GS炎癥積分呈顯著的正相關(guān)(r=0.512)，這表明TRPV1高表達(dá)與組織炎癥密切相關(guān)。食管炎癥時(shí)，局部神經(jīng)生長(zhǎng)因子及膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子將高表達(dá)，進(jìn)而誘使細(xì)胞膜去極化，并影響膜電位水平，最終影響TRPV1表達(dá)[8]。此外，局部神經(jīng)生長(zhǎng)因子還可通過調(diào)節(jié)TRPV1的轉(zhuǎn)錄和翻譯來促進(jìn)TRPV1蛋白的高表達(dá)[9]。對(duì)于內(nèi)鏡檢測(cè)無食管黏膜損傷而存在胃食管反流癥狀的患者，分析其發(fā)病機(jī)制可能為：(1)患者內(nèi)鏡下雖無黏膜損傷，但依然存在微管炎癥，如基底細(xì)胞增殖、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤、乳突延長(zhǎng)等，這些可能誘發(fā)胃食管反流；(2)患者除胃食管反流誘因外，還可能存在情志相關(guān)誘因，后者也可能導(dǎo)致局部神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其他神經(jīng)營養(yǎng)因子異常表達(dá)，并誘發(fā)本病[10]。

綜上所述， TRPV1高表達(dá)是GERD發(fā)生、發(fā)展的重要影響因素，且TRPV1表達(dá)水平還與患者的臨床癥狀、炎癥反應(yīng)的嚴(yán)重程度有一定的相關(guān)關(guān)系。提示TRPV1可作為GERD診斷的新指標(biāo)，或可為GERD防治工作提供新靶點(diǎn)。

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(收稿2014-12-15)

Effect of nerve ending receptors in gastroesophageal reflux disease

XuZhiqun﹡,LiXiumei

﹡RongjunHospitalofHubeiProvince,Wuhan430079,China

【Abstract】Objective To discuss the expression of capsaicin receptor (TRPV1,also known as transient receptor potential vanilloid 1) in gastroesophageal reflux disease (GERD) in patients and their relationship. Methods Electronic gastroscope was used for the esophageal mucosa (3 cm above the gastroesophageal junction) in 58 GERD patients (reflux esophagitis: 26 cases; RE in patients with non erosive reflux disease: 32 cases of NRED) and normal subjects (control group). HE staining was used to evaluate the tissue inflammatory reaction degree,immunohistochemical staining SP method was used to determine tissue TRPV1 expression,reflux disease questionnaire (RDQ) was used on the patients with the symptom score,these were compared and were correlatively analyzed. Results The differences between GERD patients with RDQ symptom score and GS inflammation score and control group were statistically significant (P<0.05); RDQ symptom score in RE patients and NRED patients were 16.77±5.39,17.52±5.03,which were significantly higher than those in the control group (P<0.05),GS inflammation score in RE patients>NRED patients>control group (P<0.05). The OD value of the expression of TRPV1 in GERD patients was significantly higher than that of the control group (P<0.05),the OD value in RE group was 0.0231±0.0026,which was significantly higher than that of NRED group and control group (P<0.05),the NRED group was significantly higher than that of the control group (P<0.05). There were significant positive correlations between GERD patients and RDQ symptom score (r=0.517),and GS inflammation score (r=0.554); there were significant positive correlations between RE patients and RDQ symptoms score (r=0.632),and GS inflammation score(r=0.532); there were significant positive correlations between NRED patients and RDQ symptoms score (r=0.671),and GS inflammation score(r=0.512). Conclusion The expression of TRPV1 in GERD patients is significantly higher than that of normal people,and there is a certain correlation between the severity of clinical symptoms and inflammatory response in patients.

【Key words】Capsaicin receptor; Gastroesophageal reflux disease; Reflux esophagitis; Non erosive reflux disease

【中圖分類號(hào)】R743.3

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1673-5110(2016)04-0005-04