荀文娟　周漢林　侯冠彧?　曹　婷　施力光　趙春萍，2（.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所，儋州57737；2.海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院，?？?70228）

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姜黃素對早期斷奶仔豬回腸黏膜形態(tài)、緊密連接蛋白和炎性因子基因表達(dá)以及血清免疫球蛋白水平的影響

荀文娟1周漢林1侯冠彧1?曹婷1施力光1趙春萍1，2
（1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所，儋州571737；2.海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院，?？?70228）

摘要:本試驗旨在研究姜黃素對早期斷奶仔豬回腸黏膜形態(tài)、緊密連接蛋白和炎性因子基因表達(dá)以及血清免疫球蛋白水平的影響。選取50頭胎次、體重相近的21日齡“杜×長×大”健康斷奶仔豬，公母各占1/2，隨機(jī)分為5組，每組10個重復(fù)，每個重復(fù)1頭豬。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加50 mg/ kg喹烯酮及200、300和400 mg/ kg姜黃素的飼糧。預(yù)試期7 d，于第4天接種大腸桿菌；正試期21 d。結(jié)果表明：1）與對照組相比，300和400 mg/ kg姜黃素組回腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度顯著提高（P＜0.05），絨毛寬度和隱窩深度顯著降低（P＜0.05），回腸黏膜緊密連接閉鎖蛋白（occludin）、閉鎖小帶蛋白（ZO-1）mRNA相對表達(dá)量顯著提高（P＜0.05），白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）和Toll樣受體4（TLR4）mRNA相對表達(dá)量顯著降低（P＜0.05），白細(xì)胞介素-10 （IL-10）mRNA相對表達(dá)量、血清免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）水平顯著提高（P＜0.05）；2）喹烯酮組回腸絨毛寬度和TLR4 mRNA相對表達(dá)量顯著低于對照組（P＜0.05），其余各項指標(biāo)與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果顯示：添加300或400 mg/ kg姜黃素可改善回腸黏膜上皮形態(tài)，增加腸黏膜屏障完整性，提高仔豬免疫力，其作用效果優(yōu)于喹烯酮。

關(guān)鍵詞:姜黃素；斷奶仔豬；回腸黏膜形態(tài)；緊密連接蛋白；炎性因子；免疫球蛋白

在現(xiàn)代養(yǎng)豬生產(chǎn)中，仔豬早期斷奶是普遍采用的先進(jìn)技術(shù)之一。然而，在斷奶期，生理、營養(yǎng)和環(huán)境的突然改變、斷奶應(yīng)激及病原微生物侵襲，均會引起斷奶仔豬采食量下降、生長阻滯和腹瀉、腸道絨毛萎縮和隱窩增生、免疫功能降低等，即“早期斷奶綜合征”［1］。產(chǎn)生這一后果的主要原因是斷奶應(yīng)激使腸道屏障受到損傷，進(jìn)而導(dǎo)致腹瀉，這不僅顯著降低了仔豬的生產(chǎn)性能，而且嚴(yán)重威脅著仔豬的生命健康，成為制約養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的一個重要因素。因此，如何有效地降低仔豬早期斷奶后腹瀉的發(fā)生，使仔豬順利渡過斷奶關(guān)，一直是國內(nèi)外研究的熱點。

飼用抗生素如喹烯酮、金霉素等在預(yù)防病菌感染和促進(jìn)動物生長方面的作用效果已被人們所認(rèn)可，但飼用抗生素也為畜牧生產(chǎn)帶來了如細(xì)菌耐藥性、抗生素藥物殘留等一系列危害。因此，研制和開發(fā)安全、無污染、無殘留的綠色飼料添加劑來替代抗生素成為目前動物營養(yǎng)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點和焦點。近年來，國內(nèi)外研究在揭示早期斷奶仔豬腸黏膜屏障損傷機(jī)制方面取得了很大進(jìn)展，為開發(fā)新的飼料添加劑預(yù)防腸道相關(guān)疾病奠定了基礎(chǔ)。姜黃素是一種天然植物提取物，在我國資源豐富，具有良好的抗炎、抗氧化、抗感染、抗腫瘤和降脂等廣泛的藥理作用，且毒副作用很低［2-3］，這為其在飼料中的應(yīng)用創(chuàng)造了良好的條件。宋衛(wèi)兵［4］報道姜黃素對甲氨蝶呤（MTX）誘導(dǎo)的小腸炎大鼠腸黏膜的通透性有保護(hù)作用，且具有抗氧化作用。王改［5］研究發(fā)現(xiàn)姜黃素可改善過氧化氫（H2O2）介導(dǎo)的緊密連接和腸黏膜屏障功能受損，降低閉鎖蛋白（occludin）和閉鎖小帶蛋白（ZO-1）表達(dá)。另外，研究還發(fā)現(xiàn)，姜黃素通過抑制促炎因子——腫瘤壞死因子-α（TNF-α）及炎性介質(zhì)環(huán)氧酶2（COX-2）的表達(dá)，增加白細(xì)胞介素-10（IL-10）的表達(dá)，對新生大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎起到保護(hù)作用［6-7］。侯洪濤［8］報道姜黃素通過抑制核轉(zhuǎn)錄因子（NF-κB）及TNF-α的表達(dá)，減少梗阻性黃疸時炎癥因子TNF-α、白細(xì)胞介素-6（IL-6）的表達(dá)，對大鼠小腸黏膜屏障起到保護(hù)作用。

目前，關(guān)于姜黃素對腸黏膜屏障保護(hù)作用的研究，大多集中在對大鼠和小鼠抗炎的藥理基礎(chǔ)方面，尚未發(fā)現(xiàn)姜黃素對畜禽腸道黏膜屏障保護(hù)作用及其分子機(jī)制的相關(guān)報道。本研究通過大腸桿菌（Escherichia coli）攻毒斷奶仔豬，使受試仔豬處于腹瀉狀態(tài)，建立應(yīng)激模型，研究姜黃素對斷奶仔豬回腸黏膜形態(tài)、緊密連接蛋白和炎性因子基因表達(dá)以及血清免疫球蛋白水平的影響，探討姜黃素作為抗生素替代品應(yīng)用于飼料添加劑的可行性，并摸索適合的添加量，為豬綠色飼料添加劑的研制和開發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗設(shè)計

選取50頭胎次、體重相近的21日齡“杜×長×大”健康斷奶仔豬，公母各占1/2，隨機(jī)分為5組，每組10個重復(fù)，每個重復(fù)1頭豬。試驗分對照組（A組）、喹烯酮組（B組）和3個姜黃素組（C組、D組和E組），分別飼喂基礎(chǔ)飼糧、在基礎(chǔ)飼糧中添加50 mg/ kg喹烯酮及200、300和400 mg/ kg姜黃素的飼糧。基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。預(yù)試期7 d，于第4天接種大腸桿菌（菌種在LB液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)12 h后，測定其濃度，按每頭豬總大腸桿菌1×109CFU分早晚2次給服）；正試期21 d。

表1　基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet（DM basis）　%

1.2試驗材料

姜黃素選購于美國Sigma公司，喹烯酮購于大連容海生物科技有限公司，試驗攻毒用大腸桿菌選購于國家獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心。伊紅染色液購自碧云天生物有限公司，RNAiso Plus試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、實時熒光定量PCR試劑盒購自TaKaRa公司，血清免疫球蛋白檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3樣品采集

飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，所有受試仔豬空腹從前腔靜脈采血10 mL于真空采血管中，冰浴靜置30 min，3 000 r/ min離心10 min，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?，用于測定血清生化指標(biāo)。

飼養(yǎng)試驗結(jié)束前12 h停止飼喂仔豬，試驗結(jié)束后每組隨機(jī)取6頭仔豬頸靜脈放血處死，打開腹腔，取出回腸，取中間5～10 cm，用冰浴的生理鹽水洗凈外壁及內(nèi)容物，濾紙吸干，剪開腸管，用經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）處理過的載玻片輕輕刮取腸黏膜，取約0.5 g腸黏膜放入2 mL離心管中，保存于-80℃，用于檢測跨膜蛋白-1（claudin-1）、occludin、ZO-1、白細(xì)胞介素- 1β（IL-1β）、IL-6、IL-10、TNF-α、Toll樣受體4（TLR4）mRNA相對表達(dá)量。另取回腸中段約5 cm的腸段，用生理鹽水洗去內(nèi)容物后放入4%多聚甲醛固定液固定腸管。

1.4腸黏膜形態(tài)測定

經(jīng)多聚甲醛固定腸管，再經(jīng)修塊、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片等處理后，切片進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，每張切片選取5個視野拍照，每張照片中選取2根最長、絨毛完整且走向平整的腸絨毛，分析絨毛高度、絨毛寬度及隱窩深度，并計算絨毛高度/隱窩深度（V/ C）值。

1.5緊密連接蛋白和炎性因子基因相對表達(dá)量的檢測

1.5.1引物設(shè)計

從NCBI下載已登錄的豬持家基因甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）、豬claudin-1、occludin、ZO-1、IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、TLR4 mRNA的基因序列，用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計引物。引物序列見表2。

表2　實時熒光定量PCR引物序列Table 2 Primer sequences for fluorescence-based quantitative real-time PCR

1.5.2RNA提取及cDNA合成

采用RNAiso Plus試劑盒提取腸黏膜組織總RNA，用變性瓊脂糖凝膠電泳鑒定RNA品質(zhì)，并用核酸蛋白測定儀測定其濃度。cDNA合成按反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作，反轉(zhuǎn)錄后的cDNA于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.3實時熒光定量PCR

1.6血清免疫球蛋白指標(biāo)

采用免疫比濁法檢測血清免疫球蛋白G （IgG）和免疫球蛋白M（IgM）水平。

1.7數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），并用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

目的基因的相對表達(dá)量采用-ΔΔCT法獲得，ΔΔCT為每個試驗組的ΔCT與對照組的相對數(shù)值，目的基因的相對表達(dá)量用2-ΔΔCT表示。

2　結(jié)果與分析

2.1姜黃素對斷奶仔豬回腸黏膜形態(tài)的影響

通過對回腸腸道組織切片光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，A組仔豬回腸絨毛萎縮、脫落、排列紊亂，且有折斷、扭曲與變形現(xiàn)象，而D組、E組與A組、B組和C組相比，腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，層次分明，腸絨毛排列較整齊、密集，形狀規(guī)則（圖1）。由表3可知，D組、E組回腸絨毛高度和V/ C值顯著高于A組、B組和C組（P＜0.05），E組顯著高于D組（P＜0.05）；B組、D組、E組回腸絨毛寬度均顯著降低（P＜0.05）；D組、E組回腸隱窩深度顯著低于A組、B組和C組（P＜0.05）；A組、B組、C組之間絨毛高度、隱窩深度和V/ C值無顯著差異（P＞0.05）。

圖1　不同組間回腸黏膜形態(tài)Fig.1 Ileal mucosal morphology in different groups（200×）

表3　斷奶仔豬回腸黏膜上皮形態(tài)分析Table 3 Morphological analysis of ileum mucosa epithelium of weaning piglets

2.2姜黃素對斷奶仔豬回腸黏膜claudin-1、occludin和ZO-1 mRNA表達(dá)的影響

由表4可知，各組間claudin-1 mRNA表達(dá)差異不顯著（P＞0. 05）；D組、E組occludin、ZO-1 mRNA相對表達(dá)量顯著高于A組、B組（P＜0.05），A組、B組和C組間差異不顯著（P＞0.05）。

表4　姜黃素對斷奶仔豬回腸黏膜claudin-1、occludin和ZO-1 mRNA相對表達(dá)量的影響Table 4 Effects of curcumin on the relative expression levels of claudin-1，occludin and ZO-1 mRNA in the ileum mucosa of weanling piglets

2.3姜黃素對斷奶仔豬回腸黏膜炎性因子和TLR4 mRNA表達(dá)的影響

由表5可知，與A組相比，D組、E組回腸黏膜IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA相對表達(dá)量顯著降低（P＜0.05），IL-10 mRNA相對表達(dá)量顯著提高（P＜ 0.05），A組、B組和C組間差異不顯著（P＞0.05）；B組、D組、E組TLR4 mRNA相對表達(dá)量顯著低于A組（P＜0.05），C組與A組差異不顯著（P＞0.05）。

表5　姜黃素對斷奶仔豬回腸黏膜炎性因子和TLR4 mRNA相對表達(dá)量的影響Table 5 Effects of curcumin on the relative expression levels of inflammatory cytokines and TLR4 mRNA in the ileum mucosa of weanling piglets

2.4姜黃素對斷奶仔豬血清免疫球蛋白水平的影響

由表6可知，D組、E組血清IgG和IgM水平顯著高于A組、B組和C組（P＜0.05），C組血清IgG水平顯著高于A組（P＜0.05）、IgM水平與A組差異不顯著（P＞0.05），B組血清IgG和IgM水平與A組相比均有不同程度提高，但差異不顯著（P＞0.05）。

表6　姜黃素對斷奶仔豬血清免疫球蛋白水平的影響Table 6 Effects of curcumin on serum immunoglobulin levels of weanling piglets　mg/ mL

3　討　論

3.1姜黃素對斷奶仔豬回腸黏膜形態(tài)的影響

小腸是營養(yǎng)物質(zhì)吸收和轉(zhuǎn)運的主要部位，其功能單位是小腸絨毛，而小腸絨毛高度、絨毛寬度、隱窩深度及V/ C是直接反映小腸黏膜結(jié)構(gòu)與功能完整性的重要指標(biāo)［9］。絨毛高度反映小腸對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力；隱窩深度反映小腸黏膜上皮細(xì)胞的成熟率；V/ C則體現(xiàn)了小腸的吸收能力，比值越大吸收能力越強(qiáng)［10］。早期斷奶可使絨毛高度大幅度降低、隱窩加深，從而引起消化吸收能力下降、腹瀉和生長阻滯［11］。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加姜黃素顯著提高回腸絨毛高度和V/ C值，降低回腸絨毛寬度和隱窩深度，其中以添加300 或400 mg/ kg姜黃素較為顯著，其作用效果優(yōu)于喹烯酮。這與姜黃素促進(jìn)仔豬生長性能的結(jié)果相一致［12］，說明姜黃素可改善回腸黏膜上皮形態(tài)，從而提高對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力，達(dá)到對機(jī)體的促生長作用。

3.2姜黃素對斷奶仔豬回腸黏膜緊密連接蛋白和炎性因子基因表達(dá)的影響

緊密連接是腸黏膜機(jī)械屏障的重要組成部分，主要包括occludin、claudin、ZO-1和連接黏附分子等多種蛋白［13］。ZO-1在維持和調(diào)節(jié)緊密連接復(fù)合體的完整性方面發(fā)揮重要作用。Occludin作為緊密連接中最重要的結(jié)構(gòu)蛋白之一，可與ZO-1等蛋白結(jié)合，共同構(gòu)成緊密連接的骨架部分。Occludin一旦進(jìn)入緊密連接，將使與其連接的膜通透性降低，進(jìn)而達(dá)到保護(hù)腸黏膜屏障的作用。Claudin也在調(diào)節(jié)細(xì)胞連接和黏附中發(fā)揮著重要作用。緊密連接的破壞常常伴隨著緊密連接蛋白表達(dá)和分布的改變［14］。王改［5］研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素可改善H2O2介導(dǎo)的緊密連接和腸黏膜屏障功能受損，上調(diào)occludin和ZO-1表達(dá)。本試驗結(jié)果顯示，飼糧中添加300或400 mg/ kg姜黃素可顯著提高回腸黏膜occludin和ZO-1 mRNA相對表達(dá)量，表明姜黃素可以調(diào)節(jié)腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白o(hù)ccludin 和ZO-1的表達(dá)。這與姜黃素可顯著降低大腸桿菌攻毒仔豬血漿二胺氧化酶（DAO）活性和D-乳酸含量的結(jié)果相一致［12］，進(jìn)一步表明姜黃素可減輕大腸桿菌對腸黏膜屏障的損傷，有效促進(jìn)細(xì)胞間緊密連接結(jié)構(gòu)的形成，進(jìn)而降低早期斷奶仔豬腸黏膜通透性，增強(qiáng)腸黏膜機(jī)械屏障功能。這與汪潞等［15］認(rèn)為姜黃素可明顯改善大鼠小腸組織結(jié)構(gòu)及病理損傷程度，降低腸黏膜通透性，維持腸黏膜機(jī)械屏障功能的完整性的研究結(jié)果相似。

3.3姜黃素對斷奶仔豬血清免疫球蛋白水平的影響

血清免疫球蛋白濃度或效價高低是反映機(jī)體體液免疫水平的重要指標(biāo)。IgM是初次免疫應(yīng)答的主要抗體；IgG是介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答的主要抗體，在抗細(xì)菌、抗病毒等防御機(jī)制中起著重要作用［16］。本研究表明，隨著姜黃素添加濃度增大，血清IgG和IgM水平有上升趨勢，并且300或400 mg/ kg姜黃素組顯著高于對照組和喹烯酮組，這說明姜黃素可以增強(qiáng)斷奶仔豬免疫功能。

消化道黏膜免疫系統(tǒng)在抵御病原菌的入侵、維護(hù)機(jī)體健康方面發(fā)揮重要作用。Toll樣受體（TLRs）是近年來發(fā)現(xiàn)的與免疫相關(guān)的模式識別受體家族，TLR4作為家族主要成員之一，可以識別特定微生物的保守成分，激活NF-κB和絲裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而誘導(dǎo)各種細(xì)胞炎性因子表達(dá)［17-18］。細(xì)胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α作為炎性因子，主要通過促進(jìn)炎癥應(yīng)答反應(yīng)而提高機(jī)體抗感染作用［19］。IL-10是一種由淋巴T細(xì)胞、B細(xì)胞等分泌抑制炎癥應(yīng)答的免疫抑制細(xì)胞因子，其主要作用是抗感染和維持腸道免疫穩(wěn)態(tài)［20］。目前，姜黃素對腸黏膜的抗炎作用已在許多研究中得到證實。姜黃素能抑制NF-κB和p38的活性，進(jìn)而降低MTX誘導(dǎo)的小腸炎大鼠腸上皮細(xì)胞炎性因子TNF-α和IL-1β表達(dá)，增加抗炎因子IL-10表達(dá)［21］。侯洪濤［8］研究發(fā)現(xiàn)姜黃素通過抑制NF-κB及TNF-α的表達(dá)，減少梗阻性黃疸時炎性因子TNF-α、IL-6表達(dá)，對大鼠小腸黏膜屏障起到保護(hù)作用。此外，Zeng等［22］報道姜黃素是通過抑制TLR4/ NF-κB信號通路和腸上皮細(xì)胞白細(xì)胞介素-27（IL-27）表達(dá)來發(fā)揮對結(jié)腸炎大鼠的抗炎作用。本試驗結(jié)果顯示，添加300 或400 mg/ kg姜黃素可顯著下調(diào)斷奶仔豬回腸黏膜IL-1β、IL-6、TNF-α和TLR4 mRNA表達(dá)，上調(diào)IL-10 mRNA表達(dá)，說明姜黃素可提高腸黏膜的免疫屏障功能，緩解大腸桿菌對腸黏膜造成的損傷。由此推測，姜黃素對大腸桿菌攻毒仔豬回腸上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用可能通過抑制NF-κB和MAPKs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，降低炎性因子表達(dá)和增強(qiáng)抗炎因子表達(dá)來發(fā)揮作用的，其作用機(jī)理將進(jìn)一步研究證實。

4　結(jié)　論

①添加300或400 mg/ kg姜黃素可顯著提高斷奶仔豬回腸絨毛高度和V/ C值，降低回腸絨毛寬度和隱窩深度，增強(qiáng)回腸黏膜occludin、ZO-1 mRNA表達(dá)，說明姜黃素可改善回腸黏膜上皮形態(tài)，促進(jìn)細(xì)胞間緊密連接結(jié)構(gòu)的形成，維持腸黏膜機(jī)械屏障功能的完整性，

②添加300或400 mg/ kg姜黃素可顯著提高斷奶仔豬血清IgG和IgM水平，下調(diào)炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α和TLR4 mRNA表達(dá)，上調(diào)抗炎因子IL-10 mRNA表達(dá)，有效刺激仔豬非特異性免疫，從而增強(qiáng)機(jī)體免疫力，其作用效果優(yōu)于喹烯酮。

參考文獻(xiàn):

［1］ BAGCHI M，MILNES M，WILLIAMS C，et al.Acute and chronic stress-induced oxidative gastrointestinal injury in rats，and the protective ability of a novel grape seed proanthocyanidin extract［J］.Nutrition Research，2000，19（8）：1189-1199.

［2］ BOWER M R，AIYER H S，LI Y，et al.Chemoprotective effects of curcumin in esophageal epithelial cells exposed to bile acids［J］.World Journal of Gastroenterology，2010，16（33）：4152-4158.

［3］ GLAUERT H P，CALFEE-MASON K，STEMM D N，et al.Dietary antioxidants in the prevention of hepatocarcinogenesis：a review［J］. Molecular Nutrition＆Food Research，2010，54（7）：875-896.

［4］ 宋衛(wèi)兵.姜黃素對腸黏膜屏障保護(hù)作用的實驗研究［D］.博士學(xué)位論文.廣州：南方醫(yī)科大學(xué)，2008：35-42.

［5］ 王改.姜黃素對腸單層上皮氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用［D］.碩士學(xué)位論文.石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2010：23-35.

［6］ ZHANG M，DENG C S，ZHENG J J，et al.Curcumin regulated shift from Th1 to Th2 in trinitrobenzene sulphonic acid-induced chronic colitis［J］.Acta Pharmacologica Sinica，2006，27（8）：1071-1077.

［7］ 賈盛華.新生大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎模型建立及姜黃素對其防治機(jī)制的研究［D］.碩士學(xué)位論文.重慶：重慶醫(yī)科大學(xué)，2010：22-33.

［8］ 侯洪濤.姜黃素對梗阻性黃疸大鼠腸黏膜屏障保護(hù)作用的實驗研究［D］.碩士學(xué)位論文.石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2009：11-32.

［9］ 楊鳳娟，曾祥芳，譙仕彥.羅伊氏乳桿菌I5007對新生仔豬腸道形態(tài)、二糖酶活性和緊密連接蛋白表達(dá)的影響［J］.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，47（22）：4506 -4515.

［10］ 楊海英，楊在賓，楊維仁，等.益生素和低聚木糖對斷奶仔豬生產(chǎn)性能和腸道形態(tài)學(xué)影響研究［J］.中國糧油學(xué)報，2008，23（1）：116-120.

［11］ CERA K R，MAHAN D C，CROSS R F，et al.Effect of age，weaning and postweaning diet on small intestinal growth and jejunal morphology in young swine ［J］.Journal of Animal Science，1988，66（2）：574-584.

［12］ XUN W J，SHI L G，ZHOU H L，et al.Effects of curcumin on growth performance，jejunal mucosal membrane integrity，morphology and immune status in weaned piglets challenged with enterotoxigenic Escherichia coli［J］. International Immunopharmacology，2015，27（1）：46-52.

［13］ FURUSE M，SASAKI H，F(xiàn)UJIMOTO K，et al.A single gene product，claudin-1 or -2，reconstitutes tight junction strands and recruits occludin in fibroblasts ［J］.The Journal of Cell Biology，1998，143（2）：391-401.

［14］ BERKES J，VISWANATHAN V K，SAVKOVIC S D，et al.Intestinal epithelial responses to enteric pathogens：effects on the tight junction barrier，ion transport，and inflammation［J］.Gut，2003，52（3）：439-451.

［15］ 汪潞，傅婷，來岳標(biāo)，等.姜黃素對5-Fu化療大鼠腸黏膜屏障保護(hù)作用的實驗研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2014，32（10）：2478-2480.

［16］ 崔治中，崔保安.獸醫(yī)免疫學(xué)［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004：42-44.

［17］ YAN Z Q.Regulation of TLR4 expression is a tale about tail［J］.Arteriosclerosis，Thrombosis，and Vascular Biology，2006，26（12）：2582-2584.

［18］ TRINCHIERI G，SHER A.Cooperation of toll-like receptor signals in innate immune defence［J］. Nature Reviews Immunology，2007，7（3）：179-190.

［19］ STEPTOE A，HAMER M，CHIDA Y.The effects of acute psychological stress on circulating inflammatory factors in humans：a review and meta-analysis［J］. Brain，Behavior，and Immunity，2007，21（7）：901 -912.

［20］ SARAIVA M，O’GARRA A.The regulation of IL-10 production by immune cells［J］.Nature Reviews Im-munology，2010，10（3）：170-181.

（責(zé)任編輯田艷明）

［21］ SONG W B，WANG Y Y，MENG F S，et al.Curcumin protects intestinal mucosal barrier function of rat enteritis via activation of MKP-1 and attenuation of p38 and NF-κB activation［J］. PLoS One，2010，5（9）：e12969.

［22］ ZENG Z，ZHAN L，LIAO H，et al.Curcumin improves TNBS-induced colitis in rats by inhibiting IL-27 expression via the TLR4/ NF-κB signaling pathway［J］. Planta Medica，2013，79（2）：102-109.

Effects of Curcumin on Ileum Mucosal Morphology，Gene Expression of Tight Junction Proteins and Inflammatory Cytokines，and Serum Immunoglobulin Levels of Early Weaning Piglets

XUN Wenjuan1ZHOU Hanlin1HOU Guanyu1?CAO Ting1SHI Liguang1ZHAO Chunping1，2

（1. Tropical Crops Genetic Resources Institute，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Danzhou 571737，China；2. College of Agriculture，Hainan University，Haikou 570228，China）

Abstract：This experiment was conducted to study the effects of curcumin on ileum mucosal morphology，gene expression of tight junction proteins and inflammatory cytokines，and serum immunoglobulin levels of early weaning piglets. Fifty Duroc×Landrace×Large White healthy piglets（male to female ratio was 1∶1）with similar parity and body weight，weaned at 21 days of age，were randomly allocated into 5 groups with 10 replicates in each group and 1 pig in each replicate. The dietary treatments were the basal diet（control group），and the basal diet supplemented with 50 mg/ kg quinocetone，or 200，300 or 400 mg/ kg curcumin（experimental groups）. The preliminary trial lasted for 7 days and piglets were orally challenged with enterotoxigenic Escherichia coli on the fourth day. The experiment lasted for 21 days. The results showed as follows：1）compared with the control group，supplementation with 300 or 400 mg/ kg curcumin significantly improved villus height and villus height/ crypt depth ratio（V/ C）（P＜0.05），significantly reduced crypt depth and villus width（P＜0.05），significantly increased the relative expression levels of occludin and zonula occluden-1（ZO-1）mRNA （P＜0.05），significantly decreased the relative expression levels of interleukin-1β（IL-1β），tumor necrosis factor-α（TNF-α），interleukin-6（IL-6），and toll-like receptor 4（TLR4）mRNA（P＜0.05），and significantly increased interleukin-10（IL-10）mRNA relative expression level，serum immunoglobulin G（IgG）and immunoglobulin M（IgM）levels（P＜0.05）. 2）The villus width and TLR4 mRNA relative expression level were significantly decreased by quinocetone supplementation（P＜0.05），but the other indicators were not significantly affected compared with the control group（P＞0.05）. It is suggested that 300 or 400 mg/ kg curcumin supplementation was more effective than quinocetone in improving ileum mucosal barrier integrity，morphology，and immune status of weaning piglets.［Chinese Journal of Animal Nutrition，2016，28（3）：826-833］

Key words：curcumin；weaning piglets；ileal mucosal morphology；tight junction protein；inflammatory cytokine；immunoglobulin

Corresponding author?，associate professor，E-mail：guanyuhou@126.com

通信作者:?侯冠彧，副研究員，碩士生導(dǎo)師，E-mail：guanyuhou@126.com

作者簡介:荀文娟（1985—），女，山西交城人，副研究員，博士，研究方向為動物繁殖營養(yǎng)調(diào)控。E-mail：xunwenjuan991@163.com

基金項目:國家自然科學(xué)基金（31301990）；海南省自然科學(xué)基金項目（20153079）；中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項（1630032013001，1630032013020）

收稿日期:2015-09-25

doi：10.3969/ j.issn.1006-267x.2016.03.023

中圖分類號:S816.7;S828

文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

文章編號:1006-267X（2016）03-0826-08