張婭+李艷萍+夏海梅

摘要：目的筆者對姜黃仿野生撫育后其姜黃素含量變化及其仿野生撫育后其藥材品質(zhì)進行了相關(guān)的追蹤研究，研究結(jié)果將為今后仿野生種植藥材的品質(zhì)評價和品質(zhì)保證提供依據(jù)。方法用HPLC，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：2%冰醋酸溶液（48：52）為流動相；檢測波長為430nm，分別測定姜黃種苗、仿野生撫育一年后子代、二年后子代中姜黃素的含量，并進行對比分析。且對含量較高的姜黃子代藥材進行了檢查、鑒別、浸出物等檢測。結(jié)果經(jīng)過含量測定及對比分析可知，姜黃素含量：兩年后子代>姜黃種苗>一年后子代。

關(guān)鍵詞：姜黃；姜黃素；仿野生撫育；含量變化

中圖分類號：R284文獻標志碼：B文章編號：1007-2349（2016）09-0081-03

姜黃有多種有效化學(xué)成分，在腫瘤、慢性肝病、糖尿病、腎病、皮膚病等疾病的治療上體現(xiàn)出了優(yōu)勢[1]。姜黃為姜科植物姜黃的干燥根莖，主要產(chǎn)于四川、福建等地，一般為野生，現(xiàn)多為栽培，生用[2]。其性味辛、苦、溫，歸脾、肝經(jīng)，有破血行氣、通經(jīng)止痛之功效，被廣泛應(yīng)用于胸脅刺痛、閉經(jīng)、風(fēng)濕肩臂疼痛、跌打腫痛等病癥[3]。姜黃的生物活性成分包括姜黃酮、姜烯、水芹烯、莪術(shù)酮、姜黃素、胭脂樹橙、微量元素等。其中姜黃素作為其所含的主要成分，有著多種藥理作用和重要的經(jīng)濟前景，近年來被廣泛關(guān)注[4]。近年來研究表明，姜黃素具有抗腫瘤、護肝、調(diào)節(jié)免疫功能、抗炎和降血脂等多重藥理作用[5]。

目前我國仍有80%左右的中藥材來自野生，保證野生中藥資源的可持續(xù)利用，保證野生藥材采集與生態(tài)環(huán)境保護的協(xié)調(diào)，實現(xiàn)人與自然的和諧共處，是中醫(yī)藥可持續(xù)發(fā)展必須解決的關(guān)鍵問題之一[6]。另一方面，如何提高栽培藥材質(zhì)量，使其與野生藥材相近，保證生產(chǎn)藥材的天然性，也倍受人們關(guān)注。藥用植物野生撫育具有重要的意義與優(yōu)勢，有效解決了如下矛盾：藥材采集與資源更新的矛盾；野生藥材供應(yīng)短缺與需求不斷增加的矛盾；藥材生產(chǎn)與生態(tài)環(huán)境保護的矛盾；當(dāng)前利益與長遠利益的矛盾。具有如下優(yōu)勢：①提供高品質(zhì)的野生藥材，野生撫育藥用植物在原生環(huán)境中生長，人為干預(yù)少，不易發(fā)生病蟲害，遠離污染源，產(chǎn)品為近乎天然的野生藥材[7]。②能較好保護珍稀瀕危藥用植物，促進中藥資源可持續(xù)利用。野生撫育是藥用植物資源遷地保護、就地保護及栽培三者的有機結(jié)合。通過合適的藥材采挖方法，種群自然繁殖或及時補種，實現(xiàn)了撫育藥用植物種群的可持續(xù)更新，較好地保護了珍稀瀕危藥用植物及其生物多樣性[8]。③有效保護中藥資源生長的生態(tài)環(huán)境，野生撫育模式下藥材采挖和生產(chǎn)是在生物群落動態(tài)平衡的基礎(chǔ)上進行，野生撫育基地藥用植物所有權(quán)專有化克服了野生藥材濫采濫挖對生態(tài)環(huán)境的嚴重破壞，實現(xiàn)了藥材生產(chǎn)與生態(tài)環(huán)境保護的協(xié)調(diào)發(fā)展。④有效節(jié)約耕地，以低投入獲高回報，野生撫育不占用耕地，只在補種和藥用植物生長過程中實施最低限度的人為干預(yù)，充分利用了藥用植物的自然生長特性，大幅降低了人工管理費用。

野生姜黃多分布在落葉混交林及常綠林內(nèi)。伴生植物有楓香、馬桑、山胡椒、石楠、薔薇和懸鉤子等，伴生植物也是姜黃生長發(fā)育過程中必不可缺的部分。土壤主要以山地棕壤紅黃壤為主，年平均溫度為16-18℃。姜黃從發(fā)芽到種子成熟一般一年即可完成。其分為：萌芽期、莖葉生長期、花果期以及根狀莖生長期等。姜黃被選定為云南省中醫(yī)藥治療艾滋病試點項目用藥復(fù)方制劑組成中一味重要的中藥材，為了保證中醫(yī)藥治療艾滋病用藥的有效性和安全性，也為了仿野生撫育技術(shù)今后能得到大力推廣，筆者對野生姜黃的種苗進行了云南山地引種后使其在自然環(huán)境下仿野生撫育，對其不同子代中其主要有效成分姜黃素含量變化進行相關(guān)研究，其研究結(jié)果將為今后仿野生種植藥材的品質(zhì)評價和品質(zhì)保證提供依據(jù)。

1實驗材料、儀器

11實驗材料姜黃種苗、姜黃一年后子代、姜黃兩年后子代：采自云南省西疇縣把獨村仿野生中藥材種植基地。

12實驗儀器戴安UltiMate3000高效液相色譜儀（美國戴安公司）；Gemini5uC1811oA46×250 mm色譜柱（美國phenomenex公司）；PhernomexC18保護柱（美國phenomenex公司）；BSA124S-CW電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）；ZF-I型三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；CQ250超聲清洗儀（上海超聲波儀器廠）電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；202-1A（PCD-3000serials）烘箱（上海喬躍電子有限公司）

2實驗方法

21水分檢查

211姜黃（種苗）水分測定取姜黃供試品26452 g，放入干燥至恒重的扁形稱瓶（286237 g），在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷卻30 min，精密稱定重量（309815 g），再在105℃下干燥1h，冷卻，稱重（309796 g），至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg為止。根據(jù)減失重量，計算供試品中含水量（%）。

212姜黃（一年后子代）水分測定取姜黃供試品26525 g，放入干燥至恒重的扁形稱瓶（283550 g），在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷卻30 min，精密稱定重量（307576 g），再在105℃下干燥1 h，冷卻，稱重（307541 g），至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失重量，計算供試品中含水量（%）。

213姜黃（兩年后子代）水分測定取姜黃供試品24456 g，放入干燥至恒重的扁形稱瓶（282587 g），在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷卻30 min，精密稱定重量（305190 g），再在105℃下干燥1 h，冷卻，稱重（305167 g），至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg為止。根據(jù)減失重量，計算供試品中含水量（%）。

22灰分檢查取干燥至恒重（629666 g）坩堝，稱取姜黃兩年生子代藥材40247 g，放到電爐上加熱至無煙，轉(zhuǎn)移至電爐500℃下加熱5 h，移至干燥器，干燥30 min，稱重。

23酸不溶性灰分的檢查向上述裝有灰分的坩堝中加入10 mL稀鹽酸（95%-105%），水浴加熱10 min，加熱期間用5mL熱水沖洗蓋子，洗液并入坩堝中，10 min后用無灰濾紙過濾，水洗濾紙上的殘渣至不顯氯化物反應(yīng)為止（用AgNO3試液測試不產(chǎn)生Agcl沉淀為止）。濾渣同濾紙移至坩堝，坩堝移至電爐干燥至恒重。

24浸出物檢查取干燥至恒重（839315 g）平底燒瓶，加20318 g姜黃兩年生子代藥材，加50%稀乙醇50 mL，塞緊稱重（1656 g），靜置1 h，加熱回流，微沸1h，放冷，取下燒瓶，稱重（減失量用50%稀乙醇補足），過濾，取濾液25 mL至干燥恒重的蒸發(fā)（757330 g），蒸干，放入干燥器30 min，稱重為759917 g。

25薄層鑒別取兩年生子代姜黃粉末（過一號篩）02 g，加無水乙醇20 mL振搖，放置30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取姜黃素對照品，同法配置，作為對照品溶液。點樣：吸取上述溶液各4 μL分別點于同一硅膠G薄層板上。展開劑：以三氯甲烷-甲醇-甲酸（96：4：07）為展開劑。檢視條件：分別置于日光下及紫外燈（365 nm）下檢視。

26含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：2%冰醋酸溶液（48：52）為流動相；檢測波長為430 mn。理論板數(shù)按姜黃素峰計算應(yīng)不低于4000。

對照品溶液的制備 取姜黃素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每l mL含10 μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取不同姜黃細粉約02 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10 mL，稱定重量，超聲處理20 min，搖勻，離心，精密量取上清液1 mL，置10 mL容量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度線，搖勻，即得。

測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注人液相色譜儀，測定，即得。

3實驗結(jié)果

34小結(jié)

本實驗通過對仿野生姜黃種苗、一年后子代、兩年后子代進行相關(guān)研究（主要包括水分、灰分、水溶性浸出物、薄層鑒別、含量測定）。并采用HPLC法對姜黃野生種苗及其仿野生種植后不同子代藥材中有效成分姜黃素進行含量比對分析。比對結(jié)果可見，姜黃素含量：兩年后子代>姜黃種苗>一年后子代。

研究目的在于通過對引種后仿野生種植的不同年限的子代藥材進行采挖，并對其進行有效成分的含量比對，以期得到含量最接近野生藥材的第二代藥材。該實驗數(shù)據(jù)從中藥資源學(xué)的角度考慮，為仿野生種植藥材的有效性及可推廣性提供實驗依據(jù)。

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