連永權(quán)，張　穎，曾　艷

（1.黑龍江職業(yè)學(xué)院，哈爾濱　150111；2.中國科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所，天津　300308）

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茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞生長性能和免疫功能的影響

連永權(quán)1，張穎2，曾艷2

（1.黑龍江職業(yè)學(xué)院，哈爾濱150111；2.中國科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所，天津300308）

摘要：在基礎(chǔ)飼糧中添加不同水平茶樹菇菌糠多糖提取物研究其對(duì)愛拔益加肉雞生長性能與免疫功能的影響。選擇健康1日齡愛拔益加肉雞99只，隨機(jī)分成3組。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加茶樹菇菌糠多糖提取物5和10 g·kg-1，飼喂28 d。結(jié)果表明，各組日增重與飼料增重比差異不顯著（P>0.05）；與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組肉雞在21～28日齡間的平均增重提高了4.14%，差異顯著（P<0.05）；與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組溶菌酶C濃度和總抗氧化能力分別提高22.4%與49.2%，差異顯著（P<0.05）；試驗(yàn)Ⅱ組總抗氧化能力與對(duì)照組無顯著差異（P>0.05）；試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組的法氏囊指數(shù)與對(duì)照組相比顯著增加（P<0.05）。因此，飼糧中添加一定水平的茶樹菇菌糠多糖提取物可提高肉雞免疫功能，改善生長性能，其中5 g·kg-1的添加水平效果最好。

關(guān)鍵詞：茶樹菇菌糠提取物；肉雞；生長性能；免疫性能

茶樹菇是一種極具開發(fā)潛力的珍稀食藥用菌，其目前栽培數(shù)量和產(chǎn)品市場(chǎng)占有率已超過香菇[ 1 ]。茶樹菇不但口味鮮美、清脆可口、營養(yǎng)豐富，而且具有眾多藥用活性，如抗癌、抗菌等，可作為神經(jīng)強(qiáng)壯劑還可降低高膽固醇和高血脂等[ 2-4 ]。研究表明，茶樹菇的生理功能與茶樹菇多糖密切相關(guān)[ 5-7 ]。

食用菌采收后產(chǎn)生的菌糠營養(yǎng)豐富，其在飼料中的應(yīng)用開發(fā)有利于食用菌和養(yǎng)殖業(yè)的共同發(fā)展，形成農(nóng)業(yè)生態(tài)良性循環(huán)。然而在飼料中如果直接使用或添加菌糠，易造成大量原料霉變、運(yùn)輸成本過高、營養(yǎng)功效機(jī)理不明等問題[8-17]。因此，菌糠的處理加工、成分分析以及動(dòng)物飼養(yǎng)效果評(píng)價(jià)研究對(duì)解決上述問題具有重大意義，能為菌糠飼料資源的推廣應(yīng)用提供科學(xué)方法和試驗(yàn)依據(jù)。

許多研究表明，多糖作為一種生物活性飼料添加劑，具有促進(jìn)動(dòng)物生長、提高采食量、降低料肉比、降低疾病死亡率等作用[18-21]。而食用菌菌糠多糖由于與子實(shí)體多糖具有相似的生物活性和功能也頗受關(guān)注[22-23]。試驗(yàn)前期對(duì)不同食用菌菌糠多糖組分與體外抗氧化性進(jìn)行分析測(cè)試，發(fā)現(xiàn)茶樹菇菌糠多糖具有優(yōu)良的自由基清除與還原能力[24]。在此基礎(chǔ)上，本研究提取制備了茶樹菇菌糠多糖提取物，將其添加到肉雞日糧中進(jìn)行肉雞飼養(yǎng)試驗(yàn)，研究茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞生長和免疫性能的影響，以期為食用菌菌糠多糖提取物在飼料中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

茶樹菇菌糠（含棉籽殼75%、鋸木屑15%），由天津凱潤食用菌基地提供；試驗(yàn)動(dòng)物為1日齡的同批次健康愛拔益加肉雞，由大成食品（天津）有限公司提供；總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒與雞溶菌酶C（Lysozyme C）酶聯(lián)免疫試劑盒分別購于南京建成科技有限公司和武漢伊艾博科技有限公司。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1茶樹菇菌糠多糖提取物制備

茶樹菇菌糠干燥至恒重，粉碎過篩。按料液比（m·V-1）1?20加入2次水，調(diào)節(jié)pH為4.0，加入纖維素酶1%，在45℃酶解2 h，95℃滅酶15 min，冷卻離心，上清液經(jīng)濃縮噴霧干燥得到桔紅色固體粉末，為茶樹菇菌糠多糖提取物。

1.2.2茶樹菇菌糠多糖提取物成分分析

采用苯酚-硫酸法測(cè)試茶樹菇菌糠多糖提取物中的多糖含量；采用張麗英的方法測(cè)試菌糠多糖提取物中的蛋白質(zhì)與脂肪含量[25]。

1.2.3試驗(yàn)動(dòng)物分組與飼養(yǎng)管理

將1日齡肉雞99只隨機(jī)分為3組，即對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)11只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組分別在基礎(chǔ)日糧中添加茶樹菇菌糠提取物5和10 g·kg-1，試驗(yàn)期共28 d，期間肉雞自由采食和飲水，飼養(yǎng)管理按常規(guī)程序進(jìn)行免疫?；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1　基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平　DM

1.2.4生產(chǎn)性能測(cè)試

利用稱重法、飼料結(jié)算法和死、弱、病雞淘汰法，分別在7、14、21、28日齡進(jìn)行平均日增重、料重比和死淘率的計(jì)算。

1.2.5血清生化指標(biāo)測(cè)試

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每重復(fù)隨機(jī)選取試驗(yàn)雞4只，空腹翅靜脈采血5 mL，收集于促凝管中，3 500 r·min-1離心10 min制備血清。采用試劑盒測(cè)定血清的TAOC和Lysozyme C含量。

1.2.6免疫器官指數(shù)測(cè)試

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2只試驗(yàn)雞宰殺后，摘取脾臟、胸腺和法氏囊，稱鮮重，免疫器官指數(shù)計(jì)算公式見式1。

免疫器官指數(shù)=免疫器官重（g）/雞活重（kg）（1）

1.2.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)結(jié)果用SPSS 13.0軟件，采用One Way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并進(jìn)行Duncan's多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2　結(jié)果與分析

2.1茶樹菇菌糠多糖提取物成分分析

茶樹菇菌糠多糖提取物單糖組成見表2。

表2　茶樹菇菌糠多糖提取物單糖組成mol%

茶樹菇菌糠經(jīng)纖維素酶酶解提取、干燥獲得茶樹菇菌糠多糖提取物，經(jīng)分析其多糖含量為32.64±1.57（w/w），蛋白質(zhì)含量為11.3±0.69（w/w），脂肪含量為0.14±0.02（w/w）。為深入了解菌糠多糖構(gòu)效作用，對(duì)茶樹菇菌糠多糖提取物中的多糖成分進(jìn)行分析，進(jìn)一步通過乙醇沉淀和Sevag脫蛋白方法獲得精制茶樹菇菌糠多糖。通過三氟乙酸水解，結(jié)合高效液相色譜（HPLC）方法，對(duì)水解產(chǎn)物進(jìn)行單糖組成分析，發(fā)現(xiàn)其由葡萄糖、半乳糖、巖藻糖和阿拉伯糖等單糖構(gòu)成，其中葡萄糖與半乳糖含量較高，其摩爾比例分別是56.9%和38.5%。

利用OPA柱前衍生法結(jié)合HPLC對(duì)精制菌糠多糖中蛋白成分進(jìn)行氨基酸組成分析，結(jié)果見附圖。

附圖　茶樹菇菌糠多糖結(jié)合蛋白的氨基酸分析結(jié)果

由圖1可知，主要必需氨基酸及比例為：賴氨酸2.9%、蘇氨酸7.6%、亮氨酸4.6%、纈氨酸5.9%等；風(fēng)味氨基酸甘氨酸11.9%、谷氨酸20.7%、天冬氨酸11.3%和丙氨酸10.4%，均具有較高含量。以上分析結(jié)果表明，茶樹菇菌糠多糖提取物是以結(jié)合蛋白形式存在，其比例占6.8%。蛋白多糖具有抗氧化、抗疲勞等功能，可作為非特異性免疫刺激的生物應(yīng)答調(diào)節(jié)物質(zhì)，能對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生免疫調(diào)節(jié)作用[26]。

2.2精制茶樹菇菌糠多糖抗氧化性評(píng)價(jià)

精制茶樹菇菌糠多糖抗氧化活性評(píng)價(jià)結(jié)果見表3。

表3　精制茶樹菇菌糠多糖抗氧化活性評(píng)價(jià)結(jié)果

為評(píng)價(jià)茶樹菇菌糠多糖的抗氧化性，選用氫轉(zhuǎn)移反應(yīng)機(jī)制（ORAC）和基于單電子轉(zhuǎn)移機(jī)制（ABTS+和·DPPH）的清除實(shí)驗(yàn)以及參與氧化還原反應(yīng)的FRAP實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。以水溶性維生素E（Trolox）為標(biāo)準(zhǔn)品，計(jì)算每克菌糠多糖樣品相當(dāng)于Trolox物質(zhì)的量，即ORACFL和TEAC值，表示為μmol Trolox·g-1；以Fe2+為標(biāo)準(zhǔn)品，計(jì)算每克菌糠多糖樣品相當(dāng)于Fe2+物質(zhì)的量，即FRAP值，表示為μmol Fe2+·g-1；以半抑制率IC50值（mg·mL-1）表示菌糠多糖清除DPPH自由基的能力。

結(jié)果表明，茶樹菇菌糠多糖的ORACFL為1 215 μmol Trolox·g-1，高于You等報(bào)道的松口蘑多糖TM-P2（ORAC值894.23 μmol Trolox·g-1），與Ma等報(bào)道的靈芝多糖GLP的ORACFL值1 200 μmol Trolox·g-1相當(dāng)[27-28]，這說明茶樹菇菌糠多糖具有較好的抗氧自由基活性，與一些食用菌子實(shí)體多糖相當(dāng)。FRAP值為281 μmol Trolox·g- 1，也高于Cheung等研究的超聲波提取云芝多糖的FRAP值160 μmol Fe2+·g-1，說明茶樹菇菌糠多糖有較好的鐵離子還原能力[29]。Dong等研究表明，來源于人工培養(yǎng)冬蟲夏草菌絲體多糖和野生冬蟲夏草多糖兩者對(duì)DPPH的IC50值分別為0.93和1.23 mg·mL-1，茶樹菇菌糠多糖對(duì)DPPH的IC50介于二者之間，為1.13 mg·mL-1；對(duì)ABTS自由基清除率實(shí)驗(yàn)的TEAC值為63.4 μmol Trolox·g-1，也接近于相關(guān)研究報(bào)道的子實(shí)體多糖的TEAC值（68 μmol Trolox·g-1）[30-31]。綜合評(píng)價(jià)，茶樹菇菌糠多糖具有較高的抗氧化能力，因此進(jìn)一步對(duì)其在肉雞生長和免疫性能方面的影響進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2.3茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響

茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響見表4。

表4　茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響

試驗(yàn)組與對(duì)照組比較，全期增重與飼料增重比均無顯著差異（P>0.05），說明茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞的生長性能的影響不明顯，這與聶新志等報(bào)道的殼聚糖對(duì)肉雞生長性能影響結(jié)果一致[32]。然而，整個(gè)試驗(yàn)期間，試驗(yàn)組的肉雞死淘率為0，低于對(duì)照組（死淘率3%）。試驗(yàn)組的肉雞在21～28日齡的生長后期平均增重高于對(duì)照組。說明日糧中添加茶樹菇菌糠多糖提取物可以減少肉雞死淘率，在肉雞生長后期對(duì)肉雞有較好的增重效果，且茶樹菇菌糠多糖提取物的添加量以5 g·kg-1為宜。羅長財(cái)?shù)妊芯勘砻?，真菌多糖通過調(diào)節(jié)動(dòng)物胃腸道中的pH，可以抑制病原菌的生長，建立腸道最佳微生態(tài)平衡，減少糞便及氨氣的排放量，可選擇性地促進(jìn)動(dòng)物腸道有益菌如雙歧桿菌、乳酸桿菌等的大量增殖而使其在胃腸道中形成微生態(tài)競(jìng)爭優(yōu)勢(shì)，直接抑制了外源菌和腸內(nèi)固有腐敗菌的生長繁殖，有效地防治多種細(xì)菌性、病毒性疾病，從而降低了死亡率、提高了動(dòng)物的生產(chǎn)性能[18]。

2.4茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響

茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響見表5。

表5　茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響

由表5可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組的溶菌酶C濃度和T-AOC顯著提高（P<0.05），分別提高22.4%與49.2%。而試驗(yàn)Ⅱ組的T-AOC提升不顯著（P>0.05），說明不同劑量的茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞的血清生化指標(biāo)影響不同。張敦林等在復(fù)方中草藥對(duì)愛拔益加肉雞非特異性免疫影響的研究中也發(fā)現(xiàn)類似情況，添加復(fù)方中草藥2%的作用效果優(yōu)于添加4%[33]。肉雞血清中溶菌酶具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤等多種藥理作用。而肉雞抗氧化能力的提高，能提高肌肉的持水性，提高肌肉的不飽和脂肪酸和脂溶性維生素的含量，是改善肉品質(zhì)的重要手段[34]。由此推測(cè)，在日糧中的添加茶樹菇菌糠多糖提取物5 g·kg-1，有利于肉雞的健康生長與品質(zhì)改善。前期比較了茶樹菇菌糠多糖與白玉菇菌糠、香菇菌糠、平菇菌糠和蛹蟲草菌糠多糖的體外抗氧化性，發(fā)現(xiàn)茶樹菇菌糠多糖效果較好[24]。通過本試驗(yàn)進(jìn)一步說明在一定劑量范圍內(nèi)茶樹菇菌糠多糖也具有提高肉雞血清總抗氧化的能力。

2.5茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響

茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響見表6。

表6　茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響g·kg-1

動(dòng)物免疫功能的高低取決于免疫器官的發(fā)育狀態(tài)及機(jī)能的強(qiáng)弱。一般用法氏囊、胸腺和脾臟的相對(duì)重量來評(píng)價(jià)雛雞的免疫狀態(tài)，并認(rèn)為免疫器官重量降低為免疫抑制所致，反之則為免疫增強(qiáng)、生長發(fā)育快[35]。

由表6可知，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組的法氏囊指數(shù)顯著增加（P<0.05），脾臟指數(shù)變化不大，而試驗(yàn)Ⅱ組的胸腺指數(shù)與對(duì)照組相比顯著下降（P<0.05）。這說明茶樹菇菌糠多糖提取物能促進(jìn)禽類特有的體液免疫器官法氏囊的發(fā)育,對(duì)肉雞B細(xì)胞、漿細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞和少量T細(xì)胞等的生成有利。但考慮到茶樹菇菌糠多糖提取物對(duì)肉雞胸腺發(fā)育有所抑制，其適宜添加劑量為5 g·kg-1。由于由鋸木屑和棉籽殼等木質(zhì)纖維素組成，茶樹菇菌糠多糖提取物中含有一些酚類物質(zhì)，有研究表明，酚類物質(zhì)會(huì)影響動(dòng)物的消化吸收能力，進(jìn)而影響機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)能力，因此需要在一定劑量范圍內(nèi)應(yīng)用[36]。

3　結(jié)　論

茶樹菇菌糠多糖提取物含有豐富的多糖和蛋白質(zhì)成分，能影響肉雞的免疫系統(tǒng)，顯著促進(jìn)禽類特有免疫器官法氏囊的發(fā)育，提高肉雞血清中的溶菌酶含量與抗氧化能力，并對(duì)肉雞的后期生長有一定的增重作用。推薦茶樹菇菌糠多糖提取物在肉雞日糧中的最佳添加量為5 g·kg-1。

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Effect of Polysaccharide Extract from AgrocybeCylindracea Spent Mushroom Substrate on the Growth Performance and Immune Functions of Broilers

LIAN Yongquan1, ZHANG Ying2, ZENG Yan2

（1. College of Heilongjiang Polytechnic, Harbin 150111, China; 2. Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China）

Abstract:To study the effects of polysaccharide extract from Agrocybe cylindracea spent mushroom substrate on the growth performance and immune functions of broilers, ninety-nine Arbor Acres broilers at the age of one day were divided into three treatment groups radomly, including the control treatment, groupⅠ(addition of 5 g·kg-1polysaccharide extract in basal diet) and groupⅡ(addition of 10 g·kg-1polysaccharide extract in basal diet). The feeding experiment was conducted for 28 days. The results showed that, the average daily gain and feed gain ratio of three treatment groups had no obvious difference (P>0.05). The average daily gain of groupⅠduring 21～28 days was improved 4.14% than the control treatment (P<0.05); The serum parameters of lysozyme C concentration and the total antioxidant capacity (T-AOC) in groupⅠwere 22.4% and 49.2% higher than those of the control treat?ment (P<0.05), while no obvious change of T-AOC was detected in groupⅡ(P>0.05). Compared to the control treat?ment, the cloacal bursa index of groupⅠandⅡwere both significantly improved (P<0.05). These findings proved that the polysaccharide extract from Agrocybe cylindracea spent mushroom substrate could improve the immunebook=16,ebook=21functions and growth performance of broilers. The optimum additive amount of the polysaccharide extract was 5 g· kg-1in basal diet.

Key words:polysaccharide extract from Agrocybe cylindracea spent mushroom substrate; broiler; growth per?formance; immune function

作者簡介：連永權(quán)（1964-），男，遼寧丹東人，碩士，主要從事動(dòng)物營養(yǎng)的研究。

收稿日期：2015-12-17

中圖分類號(hào)：S567.3；S831

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-0084（2016）02-0015-06