鞠瑤瑤，葉天文，謝 飛，陳美珍（汕頭大學(xué)理學(xué)院，廣東 汕頭 515063）

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脆江蘺多糖體內(nèi)抗腫瘤活性及其作用機(jī)制

鞠瑤瑤，葉天文，謝 飛，陳美珍*
（汕頭大學(xué)理學(xué)院，廣東 汕頭 515063）

摘 要：目的：研究脆江蘺多糖（Gracilaria chouae polysaccharides，GLP）的體內(nèi)抗腫瘤活性。方法：以GLP為受試物，考察其對S180肉瘤荷瘤小鼠的抗腫瘤活性，同時(shí)通過測定小鼠機(jī)體免疫系統(tǒng)各項(xiàng)生化指標(biāo)，初步探討GLP的抗腫瘤作用機(jī)制。結(jié)果：GLP對S180荷瘤小鼠具有較強(qiáng)的抑瘤活性，當(dāng)小鼠的GLP腹腔注射劑量為100 mg/（kg?d）（以體質(zhì)量計(jì)）時(shí)，抑瘤率達(dá)到34.75%，高于中劑量灌胃組（200 mg/（kg?d））的抑瘤率（31.35%）。同時(shí)，S180荷瘤小鼠免疫器官指數(shù)極顯著增大（P＜0.01），GLP還激活了S180荷瘤小鼠淋巴細(xì)胞的增殖分化，S180荷瘤小鼠白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）水平極顯著上升（P＜0.01），IL-10水平極顯著下降（P＜0.01），GLP對免疫系統(tǒng)顯示出較好的保護(hù)作用。結(jié)論：GLP具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，且腹腔注射給藥效果優(yōu)于灌胃給藥。GLP對小鼠機(jī)體免疫調(diào)節(jié)作用可能是其抗腫瘤作用的主要機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞：脆江蘺多糖；抗腫瘤；免疫作用

引文格式：

鞠瑤瑤,葉天文,謝飛,等.脆江蘺多糖體內(nèi)抗腫瘤活性及其作用機(jī)制[J].食品科學(xué),2016,37(5):208-213.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201605037.http://www.spkx.net.cn

JU Yaoyao,YE Tianwen,XIE Fei,et al.Antitumor activity in vivo and mechanism of action of Gracilaria chouae polysaccharides[J].Food Science,2016,37(5):208-213.(in Chinese with English abstract)DOI:10.7506/spkx1002-6630-201605037.http://www.spkx.net.cn

江蘺是紅藻門（R h o d o p h y t a）、真紅藻綱（Florideae）、杉藻目（Gigartinales）、江蘺科（Gracilariaceae）、江蘺屬（Gracilaria）的統(tǒng)稱[1]，脆江蘺（Gracilaria chouae）為江蘺屬的一種大型經(jīng)濟(jì)類海藻。江蘺含有豐富的多糖、膳食纖維、維生素、礦物質(zhì)等，具有降血脂[2]、抗氧化[3]、抗輻射[4]等保健功效。國內(nèi)外研究表明，海藻多糖具有抗腫瘤、抗輻射、清除自由基、延緩衰老等作用[5-6]，陳美珍[7]、宮春宇[8]等的研究表明江蘺屬的龍須菜多糖可顯著增強(qiáng)機(jī)體免疫活性；Fan Yanli等[9]研究發(fā)現(xiàn)龍須菜酸性多糖可有效抑制H22肝癌細(xì)胞的生長；Sun Liqin等[10]亦報(bào)道了紅藻門的紫球藻多糖可有效抑制S180肉瘤的生長和增強(qiáng)機(jī)體免疫力。誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[11-12]是海藻多糖的抗腫瘤機(jī)制之一，Sarangi[13]、Lee[14]、Zhang Mei[15]等的研究均證明了多糖可將腫瘤細(xì)胞周期阻滯于不同時(shí)期，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；此外，海藻多糖還可通過激活淋巴細(xì)胞[16]、提高荷瘤小鼠免疫器官指數(shù)[17]、激活巨噬細(xì)胞并促進(jìn)相關(guān)細(xì)胞因子的分泌[18-21]等途徑間接發(fā)揮抗腫瘤活性。

脆江蘺是一種新型的養(yǎng)殖海藻，目前已在廣東省南澳沿海人工養(yǎng)殖成功并可大面積種植。作者前期研究發(fā)現(xiàn)脆江蘺含有占藻體干質(zhì)量29.47%的多糖，脆江蘺多糖（Gracilaria chouae polysaccharides，GLP）對體外培養(yǎng)的宮頸癌細(xì)胞HeLa、人肝癌細(xì)胞HepG2、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和人食管癌細(xì)胞EC-109的生長抑制率分別達(dá)到49.11%、41.18%、34.98%和31.33%，并均存在劑量依賴關(guān)系[22]。在此基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步探究GLP的體內(nèi)抗腫瘤活性及其作用機(jī)理，以期為GLP的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料、動(dòng)物與試劑

GLP按照實(shí)驗(yàn)室前期建立的優(yōu)化工藝制備：將原材料洗凈、烘干、粉碎得干粉。取干粉按一定料液比熱水浸提，經(jīng)離心、醇沉、三氯乙酸除蛋白質(zhì)、透析72 h后，冷凍干燥得多糖樣品。苯酚-硫酸法[23]測得GLP樣品中多糖含量為96.32%，考馬斯亮藍(lán)法[24]測得GLP蛋白質(zhì)含量為0.63%。使用時(shí)用雙蒸水將GLP配制成不同劑量，其中注射用樣品配制后需過濾除菌。人宮頸癌HeLa細(xì)胞株由汕頭大學(xué)多學(xué)科中心提供。

S P F級昆明種雄性小鼠7 0 只，體質(zhì)量（23.62±1.25）g；SPF級S180腹水瘤雌性小鼠（38.25 g）。以上兩種小鼠均購于廈門大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（閩）2004-0001。

DMEM高糖培養(yǎng)基 美國HyClone公司；胎牛血清 杭州四季青科技有限公司；胰酶細(xì)胞消化液、青霉素-鏈霉素溶液 碧云天生物技術(shù)研究所；四甲基偶氮唑藍(lán)（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO） 美國Amresco公司；陽性藥物5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU） 上海源葉生物科技有限公司；伴刀豆球蛋白（concanavalin A，ConA） 廣州市齊云生物技術(shù)有限公司；小鼠腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶聯(lián)免疫檢測（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒、小鼠白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2）ELISA試劑盒、小鼠白細(xì)胞介素-10（IL-10）ELISA試劑盒、小鼠干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）ELISA試劑盒 南京建成生物工程研究所。

1.2儀器與設(shè)備

BCM-13WA超凈工作臺(tái) 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；BT124S型電子分析天平 德國Sartorius公司；臺(tái)式高速離心機(jī) 德國Eppendorf公司；3111型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱 美國Thermo公司；CK30倒置顯微鏡、普通光學(xué)顯微鏡 日本Olympus公司；倒置熒光顯微鏡 日本Nikon公司；－65 ℃超低溫冰箱 中科美菱低溫科技有限責(zé)任公司；全波段掃描酶標(biāo)儀 瑞士Tecan公司；石蠟切片機(jī) 德國Leica公司。

1.3方法

1.3.1S180荷瘤小鼠移植瘤模型的建立

將取自S180腹水瘤小鼠的S180瘤株在昆明種小鼠體內(nèi)腹水傳代3 次，每次7 d。無菌條件抽取最后一次荷瘤小鼠腹水，用預(yù)冷的無菌生理鹽水調(diào)整細(xì)胞濃度至1.5×107個(gè)/mL，在昆明種小鼠左前肢腋窩皮下接種0.2 mL瘤細(xì)胞懸液。

1.3.2動(dòng)物分組與給藥

雄性昆明小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為7 組，各組體質(zhì)量無顯著差異，每組10 只，即正常對照組（NM組）、模型組（TM組）、陽性對照組（5-FU組）和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組又分為GLP灌胃給藥低劑量組（L-GLP組）、中劑量組（M-GLP組）、高劑量組（H-GLP組），以及注射給藥組（I-GLP組）。

實(shí)驗(yàn)第1天，除NM組外，各組小鼠于左前肢腋窩皮下接種0.2 mL細(xì)胞濃度為1.5×107個(gè)/mL的S180瘤細(xì)胞懸液。第2天開始按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)劑量給藥，實(shí)驗(yàn)組給予GLP溶液，其中L-GLP組、M-GLP組、H-GLP組分別灌胃給予150、200、250 mg/（kg?d）（以體質(zhì)量計(jì)，下同）的GLP；I-GLP組給予100 mg/（kg?d）的GLP；5-FU組腹腔注射20 mg/（kg?d）的5-FU；NM與TM組灌胃等量生理鹽水。連續(xù)給藥8 d，每天一次，飼養(yǎng)過程中，小鼠自由采食、飲水，隔日更換墊料。期間觀察小鼠的精神活動(dòng)、毛發(fā)改變狀況、體質(zhì)量變化等。

1.3.3樣本采集

實(shí)驗(yàn)第10天，稱量小鼠體質(zhì)量，眼眶取血，3 800 r/min離心8 min，分離血清，無菌條件下取瘤塊、肝臟、脾臟、胸腺等器官稱質(zhì)量，用預(yù)冷的無菌生理鹽水洗滌數(shù)次，血清保存于－20 ℃冰箱；腫瘤組織于4%甲醛固定，于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.4GLP對荷瘤小鼠免疫功能的影響

按1.3.3節(jié)方法在無菌條件下取得小鼠肝臟、脾臟、胸腺等器官稱質(zhì)量并進(jìn)行各項(xiàng)免疫指標(biāo)的測定。

1.3.4.1免疫器官指數(shù)的計(jì)算

按照公式（2）計(jì)算小鼠免疫器官指數(shù)。

1.3.4.2荷瘤小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖能力的測定

無菌條件下取小鼠脾臟制備單細(xì)胞懸液，用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基稀釋至2×106個(gè)/mL，得細(xì)胞懸液。細(xì)胞懸液加入到96 孔培養(yǎng)板，每孔200 μL，并做4 個(gè)復(fù)孔，其中3 孔加入5 μL 200 mg/L的ConA溶液（終質(zhì)量濃度為5 mg/L），剩余一孔為對照。置培養(yǎng)箱培養(yǎng)3 d，于培養(yǎng)結(jié)束前4 h取出，吸出100 μL上清液，加入20 μL 5 mg/mL的MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。培養(yǎng)結(jié)束并吸出液體，每孔加入150 μL在37 ℃條件下預(yù)溫的DMSO，充分振蕩，酶標(biāo)儀作雙波長檢測，檢測波長570 nm，參考波長630 nm，按照公式（3）計(jì)算脾臟淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化率[25]。

式中：A處理為ConA孔吸光度；A對照為對照孔吸光度。

1.3.4.3荷瘤小鼠自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞殺傷活性的檢測

采用MTT法檢測小鼠NK細(xì)胞殺傷活性[26]。無菌條件下取小鼠脾臟制備單細(xì)胞懸液作為效應(yīng)細(xì)胞（細(xì)胞濃度2×106個(gè)/mL），取傳代培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞作為靶細(xì)胞（細(xì)胞濃度2×105個(gè)/mL）。取靶細(xì)胞懸液100 μL加入96 孔板（每組4 個(gè)平行），提前培養(yǎng)8 h。向其中3 孔中加入等體積效應(yīng)細(xì)胞，剩余孔作為靶細(xì)胞對照，并設(shè)效應(yīng)細(xì)胞對照，加入等量效應(yīng)細(xì)胞。將細(xì)胞于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h，結(jié)束后吸出上清液100 μL，每孔加入20 μL 5 mg/mL的MTT溶液繼續(xù)孵育4 h；培養(yǎng)結(jié)束后吸去上清液，每孔加入150 μL DMSO溶液，充分振蕩，酶標(biāo)儀作雙波長檢測，檢測波長570 nm，參考波長630 nm。按照公式（4）計(jì)算NK細(xì)胞殺傷活性。

式中：A靶細(xì)胞為靶細(xì)胞孔吸光度；A實(shí)驗(yàn)為靶細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞共同作用孔吸光度；A效應(yīng)細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞孔吸光度。

1.3.4.4荷瘤小鼠血清中TNF-α水平的測定

取1.3.3節(jié)所收集的血清，采用生物素雙抗體夾心ELISA法測定小鼠血清中TNF-α的水平。具體操作按照TNF-α ELISA試劑盒說明書方法進(jìn)行。

1.3.4.5荷瘤小鼠血清中IL-2、IL-10、IFN-γ水平的測定

取1.3.3節(jié)所收集的血清，應(yīng)用雙抗體夾心法分別測定小鼠血清中IL-2、IL-10、IFN-γ的含量，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書方法操作。

1.3.5小鼠腫瘤組織病理學(xué)觀察

取4%甲醛固定的小鼠腫瘤組織樣本，按常規(guī)方法制作切片和蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，在光鏡下觀察腫瘤組織病理學(xué)變化，具體操作按文獻(xiàn)[27]的方法進(jìn)行。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用 SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，數(shù)據(jù)均以表示。兩組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05判斷為差異具有顯著性。

2　結(jié)果與分析

2.1GLP的抗腫瘤作用

表1　GLP對荷瘤小鼠S180腫瘤的抑制作用（x±s，n＝1100）Table 1 Antitumor activity of GLP on S180 tumor-bearing mice x ,= 10)

由表1可知，GLP對S180荷瘤小鼠有顯著的抑瘤作用。各實(shí)驗(yàn)組小鼠的瘤質(zhì)量與TM組相比均呈現(xiàn)顯著差異；其中，M-GLP組抗腫瘤效果較H-GLP組更好，說明GLP的抗腫瘤效應(yīng)存在最適劑量，并非劑量越高越好。而使用低劑量注射的I-GLP組抑瘤率達(dá)34.75%，高于M-GLP組抑瘤率（31.35%），且與模型組相比呈現(xiàn)出極顯著差異（P＜0.01），說明注射給藥方式更能發(fā)揮GLP的抗腫瘤作用。

2.2GLP對荷瘤小鼠免疫功能的影響

2.2.1GLP對荷瘤小鼠免疫器官指數(shù)的影響

胸腺和脾臟是機(jī)體重要的免疫器官，它們能在一定程度上反映機(jī)體免疫功能的狀況[28-29]，胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的大小直接反映機(jī)體免疫水平的高低[30]。GLP對荷瘤小鼠免疫器官的影響如表2所示。造模后TM組小鼠的肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均降低，表明移植瘤對小鼠機(jī)體免疫器官產(chǎn)生了較強(qiáng)的損傷。5-FU組荷瘤小鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)相對于TM組均降低，意味著荷瘤小鼠免疫器官受到嚴(yán)重?fù)p傷，說明5-FU存在較大的副作用；而各實(shí)驗(yàn)組小鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均有不同程度增加，表明GLP可拮抗腫瘤細(xì)胞對機(jī)體免疫器官的損傷，對免疫器官具有明顯的保護(hù)作用。

表2　脆江蘺多糖對S180荷瘤小鼠肝臟、脾臟和胸腺指數(shù)的影響（x±s，n＝1100）Table 2 Effect of GLP on liver index,spleen index and thymus index of S180 tumor-bearing mice(x ,= 10)mg/10 g

2.2.2GLP對荷瘤小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖能力的影響

圖1　脆江蘺多糖對S180荷瘤小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖能力的影響（x±s，n＝1100）Fig.1 Effect of GLP on proliferation of spleen cells in S180 tumor-bearing mice(x± s,,n　==　10)

由圖1可知，同NM組相比，TM組小鼠脾臟淋巴增殖轉(zhuǎn)化率極顯著降低（P＜0.01），說明移植瘤對小鼠免疫系統(tǒng)產(chǎn)生了極大的破壞作用；而各實(shí)驗(yàn)組均能極顯著改善這一作用，使小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖轉(zhuǎn)化能力增強(qiáng)，其中I-GLP組小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化率達(dá)到95.03%，與TM組相比，脾臟淋巴細(xì)胞增殖能力極顯著增強(qiáng)（P＜0.01）。

2.2.3GLP對荷瘤小鼠NK細(xì)胞殺傷活性的影響

NK細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，在機(jī)體早期免疫監(jiān)視中起重要作用[31]。如圖2所示，與NM組相比，TM組及5-FU組荷瘤小鼠NK細(xì)胞殺傷活力顯著或極顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），表明腫瘤移植后小鼠的免疫系統(tǒng)受到損傷，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞分化為NK細(xì)胞的能力減弱；與TM組相比，I-GLP組荷瘤小鼠NK細(xì)胞殺傷活性顯著提高（P＜0.05），達(dá)到43.62%。以上結(jié)果表明，GLP能夠促進(jìn)荷瘤小鼠淋巴細(xì)胞分化為NK細(xì)胞。

圖2　GLP對S180荷瘤小鼠NK細(xì)胞殺傷活性的影響（x±s，n＝1100）Fig.2 Effect of GLP on cytotoxic activity of NK cells in S180 tumor-bearing mice(x± s,,n　==　10)

2.2.4GLP對荷瘤小鼠血清中TNF-α水平的影響

TNF-α是一種由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的低分子蛋白質(zhì)，能夠直接殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞，也可通過對機(jī)體免疫功能的調(diào)節(jié)，促進(jìn)T細(xì)胞和其他殺傷細(xì)胞產(chǎn)生對腫瘤細(xì)胞的殺傷，在免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用[32]。由圖3可知，各實(shí)驗(yàn)組荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌TNF-α的水平較TM組均有所升高，其中I-GLP組TNF-α水平極顯著升高（P＜0.01），升至23.46 pg/mL；以上結(jié)果提示GLP能促進(jìn)或激活脾淋巴細(xì)胞分泌TNF-α，提高機(jī)體免疫系統(tǒng)對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。

圖3　GLP對S180荷瘤小鼠血清TNNFF--α水平的影響（x±s，n＝1100）Fig.3 Effect of GLP on serum TNF-α level in S180 tumor-bearing mice(x± s,,n　==　10)

2.2.5GLP對荷瘤小鼠血清中IL-2、IL-10、IFN-γ水平的影響

如表3所示，與TM組相比，各實(shí)驗(yàn)組（除L-GLP組外）荷瘤小鼠血清中IL-2水平均有不同程度升高，其中I-GLP組的IL-2水平極顯著高（P＜0.01）。這表明GLP可通過提高小鼠外周血IL-2水平增強(qiáng)小鼠的免疫功能。與TM組相比，M-GLP組、H-GLP組、I-GLP組荷瘤小鼠血清中的IFN-γ水平均呈現(xiàn)極顯著上升的趨勢（P＜0.01）。與TM組相比，M-GLP組、H-GLP組、I-GLP組IL-10水平均呈現(xiàn)極顯著下降的趨勢（P＜0.01）。

表3　GLP對S180小鼠血清中IL-2、IL-10、IFFNN--γ含量的影響（x±s，n＝1100）Table 3 Effect of GLP on IL-2,lL-10 and IFN-γ in serum of S180 tumor-bearing　miiccee(x ± s,,n　==　10)ng/L

2.3小鼠腫瘤組織病理學(xué)觀察

圖4　腫瘤組織病理學(xué)特征（HE，10×2200）Fig.4 Histopathological observations of tumor tissues(HE,10 × 20)

由圖4可知，TM組荷瘤小鼠的腫瘤組織細(xì)胞體積較大且排列緊密有規(guī)則、細(xì)胞核染色較深、胞漿和細(xì)胞間質(zhì)少、細(xì)胞質(zhì)部分染色不明顯，表明造模成功。5-FU組荷瘤小鼠的腫瘤組織出現(xiàn)較多病灶，纖維化壞死組織面積較大；各實(shí)驗(yàn)組荷瘤小鼠的腫瘤組織細(xì)胞變小、細(xì)胞數(shù)量減少、排列疏松、腫瘤細(xì)胞核溶解，并出現(xiàn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤現(xiàn)象。由于腫瘤組織細(xì)胞壞死增多，切片可觀察到大量纖維狀病灶，其中I-GLP組荷瘤小鼠的腫瘤出現(xiàn)大面積的纖維狀壞死組織。以上結(jié)果表明GLP可誘導(dǎo)小鼠腫瘤細(xì)胞壞死，促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤，呈現(xiàn)較強(qiáng)的抗腫瘤作用。

各實(shí)驗(yàn)組小鼠腫瘤組織病理學(xué)的變化結(jié)果，進(jìn)一步支持了上述GLP以注射給藥方式更能發(fā)揮其抗腫瘤作用的結(jié)論。

3　討 論

體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各劑量GLP灌胃組均能極顯著抑制荷瘤小鼠腫瘤的生長，其中M-GLP組抗腫瘤效果比H-GLP組更好；原因可能是H-GLP組多糖劑量過高、黏度過大，影響了機(jī)體對其吸收；這也說明了多糖抗腫瘤效應(yīng)存在最適劑量。I-GLP組抗腫瘤效果較灌胃給藥組效果更好，說明多糖抗腫瘤效應(yīng)存在最適給藥方式。可能原因?yàn)楦鼓っ懿佳芎土馨凸?，腹腔注射后藥物通過腹膜等生物膜直接吸收，且吸收相對完全；灌胃時(shí)影響藥物吸收的因素很多，如胃腸分泌的消化液、胃腸中的內(nèi)容物等都會(huì)影響藥物的吸收利用率。

經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床觀察表明，惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程伴隨機(jī)體免疫功能的降低[28]。本實(shí)驗(yàn)造模成功的S180荷瘤小鼠胸腺和脾臟均出現(xiàn)一定程度的萎縮，致使免疫器官指數(shù)下降，證實(shí)腫瘤的發(fā)生發(fā)展會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫功能的降低。

多糖抗腫瘤機(jī)制與其促進(jìn)機(jī)體免疫系統(tǒng)的活力有關(guān)[33]。給藥后，部分實(shí)驗(yàn)組小鼠的免疫器官指數(shù)、脾臟淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化率及分泌TNF-α的能力均明顯提高，說明GLP可通過促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖分化增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能。

IL-2，又名T細(xì)胞生長因子（T cell growth factor，TCGF），不僅能活化T細(xì)胞、促進(jìn)細(xì)胞因子產(chǎn)生，還可刺激NK細(xì)胞增殖、增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷活性，進(jìn)而促進(jìn)B細(xì)胞增殖及免疫應(yīng)答[34]。IFN-γ與IL-2同來源于活化的Thl細(xì)胞，IFN-γ不僅能活化NK細(xì)胞，還可抑制Th2細(xì)胞分化[35]。IL-10主要由Th2細(xì)胞分泌，抑制Thl型細(xì)胞合成分泌IL-2、IFN-γ等細(xì)胞因子。IL-10水平升高將使機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)，使病情加重。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各實(shí)驗(yàn)組小鼠血清中細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ水平升高，IL-10水平降低。這說明GLP可通過促進(jìn)Thl細(xì)胞因子分泌、抑制Th2細(xì)胞因子分泌、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，從而達(dá)到抗腫瘤的目的。

綜上所述，GLP具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，其抗腫瘤機(jī)制與提高機(jī)體免疫功能關(guān)系密切。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為進(jìn)一步研究GLP生理活性提供理論基礎(chǔ)。

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Antitumor Activity in Vivo and Mechanism of Action of Gracilaria chouae Polysaccharides

JU Yaoyao,YE Tianwen,XIE Fei,CHEN Meizhen*
(College of Science,Shantou University,Shantou 515063,China)

Abstract:Objective:To investigate the antitumor activity of polysaccharides from Gracilaria chouae(GLP)in vivo.Methods:S180 sarcoma mouse model was established and used for the determination of antitumor activity of GLP in vivo.In addition,the underlying mechanism was explored by measuring biochemical parameters of immune system in the mice.Results:GLP definitely had inhibitory effect on S180 sarcoma in vivo.An inhibition rate of 34.75% was obtained with intraperitoneal injection at a dose of 100 mg/(kg·d),higher than that(31.35%)of the medium-dose intragastric administration group(200 mg/(kg·d)).Immune organ indices of tumor-bearing mice significantly increased(P < 0.01).Additionally,the proliferation and the differentiation of lymphocytes was activated by GLP administration.The levels of IL-2 and IFN-γ significantly increase(P < 0.01),while the level of IL-10 significantly decreased(P < 0.01).GLP showed good protection on the immune system.Conclusion:GLP had strong anti-tumor activity and was more effective when given by intraperitoneal injection than by intragastric administration.The anti-tumor effect of GLP was mainly achieved by improving immune function in mice.

Key words:Gracilaria chouae polysaccharides(GLP); antitumor; immunological effect

中圖分類號(hào)：R931

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-6630（2016）05-0208-06

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201605037

*通信作者：陳美珍（1956—），女，教授，本科，主要從事活性物質(zhì)研究與開發(fā)。E-mail：chenmz@stu.edu.cn

作者簡介：鞠瑤瑤（1988—），女，碩士研究生，主要從事活性物質(zhì)研究與開發(fā)。E-mail：12yyju@stu.edu.cn

基金項(xiàng)目：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013B0203012005）；2013年汕頭大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心項(xiàng)目（生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心）；2013年廣東省高等學(xué)校教學(xué)質(zhì)量與教學(xué)改革工程本科類立項(xiàng)建設(shè)項(xiàng)目（汕頭大學(xué)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心）

收稿日期：2015-04-27