韓　冰　孟　曉　卜培莉

(濟(jì)南市第六人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，濟(jì)南250200)

?

N-乙酰半胱氨酸對(duì)野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺動(dòng)脈高壓作用機(jī)制的基礎(chǔ)研究

韓冰孟曉①卜培莉①

(濟(jì)南市第六人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，濟(jì)南250200)

[摘要]目的：觀察N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)對(duì)野百合堿(Monocrotaline,MCT)誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓(Pulmonary arterial hypertension,PAH)大鼠右心室重構(gòu)的影響及其機(jī)制。方法： Wistar雄性大鼠適應(yīng)性喂1周，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、MCT 組、MCT+NAC組。MCT(60 mg/kg)皮下注射誘導(dǎo)PAH大鼠模型，實(shí)驗(yàn)組給予NAC[500 mg/(kg·d)]，連續(xù)6周，第4周末測(cè)定大鼠平均肺動(dòng)脈壓(mPAP)、右心室收縮壓(RVSP)；分離大鼠左心室+室間隔(LV+S)、右心室(RV)并稱重，計(jì)算RV/(LV+S)的比值。HE染色觀察右心室病理學(xué)變化，天狼星紅染色觀察右心室膠原沉積的變化。RT-PCR和Western blot檢測(cè)右心室collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)、核轉(zhuǎn)錄因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)mRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果：NAC連續(xù)給藥4周后能明顯降低MCT誘導(dǎo)的PAH大鼠RVSP及mPAP，減輕RV/(LV+S)的比值，改善右心室心肌細(xì)胞的病理變化，降低右心室膠原的沉積，抑制NOX4的表達(dá)和NF-κB的活化。結(jié)論：NAC能緩解野百合堿(MCT)誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓大鼠右心室重建，其機(jī)制可能是通過抑制NOX4介導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷，和NF-κB 所介導(dǎo)的膠原沉積有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]N-乙酰半胱氨酸；野百合堿；肺動(dòng)脈高壓

肺動(dòng)脈高壓(Pulmonary arterial hypertension，PAH)是一種危害人類健康的非常嚴(yán)重的疾病，其形態(tài)學(xué)特征是肺小動(dòng)脈血管結(jié)構(gòu)重建，主要引起肺動(dòng)脈壓力升高、肺血管阻力增加、右心衰竭[1]。其主要病理機(jī)制是炎癥和氧化應(yīng)激的損傷相互促進(jìn)的惡性循環(huán)過程[2]。大量研究表明氧化應(yīng)激是引起 PAH 右心重構(gòu)的重要原因，其中 NADPH 氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷參與了PAH 右心室重構(gòu)[3,4]。另外有研究發(fā)現(xiàn)核轉(zhuǎn)錄因子κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)的活化參與PAH 心血管重構(gòu)[5]，而NOX4介導(dǎo)的氧化應(yīng)激可能通過增強(qiáng)對(duì)NF-κB的抑制蛋白IκB(Inhibitorka-ppa B)的解離，激活NF-κB與DNA的結(jié)合活性,進(jìn)一步激活NF-κB轉(zhuǎn)錄因子[6]，促進(jìn)生長(zhǎng)因子、趨化因子、細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)和黏附分子等相關(guān)基因表達(dá)，參與了PAH心血管重構(gòu)[7]。

N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine，NAC)是從半胱氨酸衍生而來的一種氨基酸，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝活性、清除氧自由基；調(diào)整基因的表達(dá)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)、抑制惡性腫瘤發(fā)展、預(yù)防DNA損傷等作用[8]。目前其抗炎和抗氧化應(yīng)激作用已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床各種疾病，例如對(duì)乙酰氨基酚中毒、特發(fā)性肺纖維化、支氣管炎、缺血再灌注損傷、心肌損傷等[9]。最近研究報(bào)道，N-乙酰半胱氨酸通過抑制肺損傷模型大鼠中促炎因子TNF-α和IL-1β的釋放以及NF-κB的激活，進(jìn)而減少炎性細(xì)胞的釋放并且改善白細(xì)胞和單核細(xì)胞的化學(xué)驅(qū)藥性[10,11]。這些研究表明NAC具有保護(hù)機(jī)體免于氧化應(yīng)激的損傷和右心室重構(gòu)。

基于NAC的生物學(xué)功能，本實(shí)驗(yàn)提出這樣的假設(shè)：NAC可能可以有效改善肺動(dòng)脈高壓患者的肺血管的重建。本實(shí)驗(yàn)通過體外注射MCT誘導(dǎo)并構(gòu)建肺動(dòng)脈高壓大鼠模型，同時(shí)給予肺動(dòng)脈高壓大鼠NAC治療，研究NAC對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠的影響。

1材料與方法

1.1材料Wistar雄性大鼠，體重200～220 g，由華中科技大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)所用動(dòng)物均符合國(guó)家醫(yī)用動(dòng)物使用標(biāo)準(zhǔn)(許可證號(hào)：SCXK[鄂]2012-2014，級(jí)別：SPF)，野百合堿(MCT)(Sigma，美國(guó))，N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine，NAC)(Sigma，美國(guó))，TRIzol RNA 提取試劑盒(美國(guó) Invitrogen 公司)，PrimeScriptTMRT reagent Kit、Power SYBR Green PCR Master Mix(大連寶生物工程有限公司)；collagenⅠ及 collagenⅢ單克隆抗體(美國(guó) Abcam 公司)，β-actin、NOX4 及 NF-κB 單克隆抗體(美國(guó) SantaCruz 公司)。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)分組60只雄性大鼠隨機(jī)分為3組：①野百合堿誘導(dǎo)和N-乙酰半胱氨酸處理組(MCT+NAC，n=20)：本組大鼠首先給予MCT(60 mg/kg)皮下注射，每日一次，連續(xù)2周，同時(shí)給予NAC500 mg(kg·d)皮下注射，連續(xù)6周；②野百合堿誘導(dǎo)組(MCT，n=20)：本組大鼠實(shí)驗(yàn)前2周給予MCT(60 mg/kg)皮下注射，每日一次，同時(shí)自實(shí)驗(yàn)開始給予同NAC等體積的0.9%生理鹽水皮下注射，每天一次，持續(xù)6周；③生理鹽水對(duì)照組(n=20)：自實(shí)驗(yàn)開始至實(shí)驗(yàn)第6周給予同NAC等體積的0.9%生理鹽水皮下注射，每天一次，另外實(shí)驗(yàn)開始前2周給予同MCT等體積的0.9%生理鹽水皮下注射，每天一次。

1.2.2血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的測(cè)定自實(shí)驗(yàn)開始，4周末對(duì)各組大鼠進(jìn)行右心室收縮壓(RVSP)、平均肺動(dòng)脈壓(mPAP)、右心室肥厚指數(shù)(RVHI)檢測(cè)。分別于第2、4、6周用戊巴比妥鈉(60 mg/kg)腹腔注射麻醉。分離右頸外靜脈，采用肝素鈉導(dǎo)管經(jīng)右頸外靜脈行右心插管，調(diào)整并妥善固定導(dǎo)管位置后，用MedLab多導(dǎo)生理記錄儀分別記錄。

1.2.3組織標(biāo)本收集與處理上述動(dòng)力學(xué)指標(biāo)檢測(cè)完畢后，處死大鼠后迅速開胸分離心臟，預(yù)冷的PBS沖洗干凈，隨后準(zhǔn)確分離右心室(RV)、左心室加室間隔(LV+S)，稱重，計(jì)算RVHI=RV/(LV+S)。取右心室心尖部固定于4%多聚甲醛以備石蠟切片；剩余的右心室組織，-80 ℃冰箱保存，以備于相關(guān)指標(biāo)的mRNA、蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)。

1.2.4右心室組織病理學(xué)及膠原沉積的觀察取大鼠右心室心尖部4% 多聚甲醛固定48 h，石蠟包埋切片，進(jìn)行HE染色和天狼星紅染色，分別觀察右心室心肌細(xì)胞的病理變化及膠原沉積情況。

1.2.5RT-PCR檢測(cè)右心室collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、NOX4、NF-κB mRNA的表達(dá)稱重100g右心室組織，用1 ml Trizol 充分裂解組織后，氯仿抽提，異丙醇沉淀回收總RNA，測(cè)RNA濃度、逆轉(zhuǎn)錄后，所得cDNA以β-actin為內(nèi)參照，在ABI-7300實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測(cè)。重復(fù)3次。數(shù)據(jù)分析用 7300 System SDS Software 軟件，統(tǒng)計(jì)ΔΔCt值。引物購(gòu)買于美國(guó)origene公司，序列見表1。

表1引物序列

Tab.1Primer sequences

GenePrimersequenceCollagenⅠForwardsequence:CCTCAGGGTATTGCTGGACAACReversesequence:CAGAAGGACCTTGTTTGCCAGGCollagenⅢForwardsequence:GACCAAAAGGTGATGCTGGACAGReversesequence:CAAGACCTCGTGCTCCAGTTAGNOX4Forwardsequence:CGGGATTTGCTACTGCCTCCATReversesequence:GTGACTCCTCAAATGGGCTTCCNF-κBForwardsequence:CCAGGAGAAAGTCAGCCTCCTReversesequence:TCATACCAGGGCTTGAGCTCAβ-actinForwardsequence:CATTGCTGACAGGATGCAGAAGGReversesequence:TGCTGGAAGGTGGACAGTGAGG

1.2.6Western blot 檢測(cè)右心室 NOX4 和 NF-κB 蛋白表達(dá)低溫提取右心室蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度。取30 μg總蛋白與上樣緩沖液充分混合后，95℃加熱5 min，SDS-PAGE膠上電泳，轉(zhuǎn)膜，5%BSA封閉1 h，分別加入1∶500～1∶2 000稀釋后的相應(yīng)的一抗，4℃孵育過夜。次日，充分洗滌后，分別加入相應(yīng)HRP標(biāo)記的二抗(稀釋比例為1∶5 000)室溫孵育1 h。ECL凝膠成像系統(tǒng)(ECL,USA)采集圖像。實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次。

2結(jié)果

2.1NAC對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠血流動(dòng)力學(xué)和右心室肥厚的影響與對(duì)照組比較，MCT誘導(dǎo)組大鼠在MCT皮下注射第4周末RVSP、mPAP明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因 RV/LV+S即(RVHI)是評(píng)價(jià)右心室肥厚程度的主要指標(biāo)。與對(duì)照組相比，在MCT處理第4周末，MCT處理組RVHI明顯增高(P<0.01)。而給予NAC治療組，于治療的第4周末，可以觀察到RVSP、mPAP、RV/LV+S的明顯改善，較MCT處理組均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表2。

2.2NAC對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠右心室心肌細(xì)胞的病理變化和右心室膠原表達(dá)的影響右心室心肌細(xì)胞HE染色后400倍鏡下觀察，與對(duì)照組相比，野百合堿(MCT)處理組右心室心肌細(xì)胞增生肥大且排列紊亂、稀疏和胞漿腫脹，心肌細(xì)胞間隙增寬，而給予NAC治療后于第4周末，可觀察到上述病理變化有明顯的改善，結(jié)果見圖1A。同時(shí)天狼星紅染色觀察右心室膠原的表達(dá)，天狼星紅染色顯示膠原纖維為紅色，可以觀察到對(duì)照組右心室著色較淡，心肌細(xì)胞的間隙清晰可見，血管旁膠原分布稀疏。與對(duì)照組相比，MCT處理組大鼠右心室心肌細(xì)胞間質(zhì)有較多明顯紅色膠原沉積；而NAC治療組右心室心肌細(xì)胞間質(zhì)和血管旁的紅色深染較MCT組逐漸減少，膠原沉積現(xiàn)象也明顯減輕。結(jié)果見圖1B。

表2血流動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)

Tab.2Hemodynamic data

ControlMCTPNACp1RVSP(mmHg)40.52±5.24112.63±16.450.00170.23±12.340.03mPAP(mmHg)10.23±1.0240.78±4.760.0128.33±5.210.04RVHI0.28±0.030.72±0.070.010.41±0.090.02

圖1　NAC對(duì)MCT誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓大鼠右心室病理變化以及膠原沉積的影響Fig.1　NAC decreases cardiomyocytes hypertrophy and fibrosis in RV rats with PAHNote: In the first part(A),representative image of cardiomyocytes in RV of control rat(1)，MCT rats(2) and MCT rats treated with NAC after MCT exposure(3);in the second part(B),representative image of collagen(red stained)content in RV of control rat(1) MCT rats(2)and MCT rats treated with NAC after MCT exposure(3).

圖2　NAC對(duì)右心室collagenⅠ、 collagen Ⅲ mRNA表達(dá)的影響Fig.2　Expression of collagen Ⅰ and collagen Ⅲ mRNA was determined by RT-PCR in right ventricle of monocrotaline-induced pulmonary arterial hypert-ension of ratsNote: Comparison between two groups，*.P<0.01.

圖3　NAC對(duì)右心室NOX4、NF-κB表達(dá)的影響Fig.3　Expression of NOX4 and NF-κB was deter-mined by RT-PCR and Western blot in right ventricle of monocrotaline-induced pulmonary arterial hypertension of rats after NAC treatmentNote: Comparison between two groups，*.P<0.01.

2.3NAC對(duì)右心室collagen Ⅰ、collagen Ⅲ mRNA表達(dá)的影響經(jīng)RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，MCT處理組右心室collagen Ⅰ、collagen Ⅲ mRNA的表達(dá)較對(duì)照組明顯增高。而與MCT組對(duì)比，NAC治療組治療第4周末collagen Ⅰ、collagen Ⅲ的表達(dá)均有不同程度的下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見圖2。

2.4NAC對(duì)右心室NOX4、NF-κB表達(dá)的影響經(jīng)RT-PCR、Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，MCT處理組右心室NOX4、NF-κB mRMA、蛋白水平的表達(dá)均較對(duì)照組明顯增高。而與MCT組對(duì)比，NAC治療組治療第4周末NOX4、NF-κB mRNA、蛋白的表達(dá)均有不同程度的下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見圖3、4。

3討論

隨著學(xué)者們對(duì)PAH病理生理學(xué)機(jī)制和發(fā)病機(jī)制的深入研究，臨床上對(duì)PAH的治療也在不斷改進(jìn)。以前臨床上主要是使用磷酸二酯酶-5抑制劑和內(nèi)皮素受體拮抗劑等藥物的治療來改善患者的預(yù)后。目前更多新的治療藥物隨著對(duì)PAH研究的深入不斷被學(xué)者們提出并應(yīng)用。

N-乙酰半胱氨酸最早在臨床上用于治療急性咳嗽，使痰中的黏蛋白裂解，降低分泌液的黏性而利于排出。隨著近年來對(duì)N-乙酰半胱氨酸的深入研究，發(fā)現(xiàn)NAC還具有多種其他功能，如較強(qiáng)的抗炎、抗氧化、擴(kuò)血管等多種生物活性，對(duì)呼吸系統(tǒng)疾病、肝炎、心血管疾病、腫瘤等有潛在的治療作用。Gerrits等[12]收集1 219例慢性阻塞性肺疾病的患者資料進(jìn)行臨床研究，發(fā)現(xiàn)NAC可減少大約30%的COPD患者再住院風(fēng)險(xiǎn)，且這種療效呈劑量依賴性。另外有研究顯示NCA通過補(bǔ)充孤立心肌細(xì)胞內(nèi)容谷胱甘肽，從而消除TNF-α對(duì)心臟的有害作用。NAC還可以改善肝功能衰竭患者的生存率主要機(jī)制如下：(1)增加NO的產(chǎn)量；(2)提高GSH的生物利用度；(3)調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞活性，抑制T細(xì)胞凋亡，使肝細(xì)胞的功能增強(qiáng)；(4)抑制重型肝炎患者炎癥因子IL-8、NO和sicAM-1等的分泌，減少肝臟損傷[13]。

本研究通過野百合誘導(dǎo)，構(gòu)建PAH大鼠模型，并給予NAC處理，結(jié)果顯示NAC連續(xù)給藥4周末，PAH大鼠的RVSP、mPAP、RV/LV+S顯著降低；右心室心肌細(xì)胞的病理?yè)p傷明顯減輕,膠原沉積明顯并且膠原蛋白的表達(dá)顯著下調(diào)，這些均提示NAC對(duì)PAH 大鼠具有降低肺動(dòng)脈壓力、減輕右心室重構(gòu)和膠原沉積的作用。

肺動(dòng)脈高壓主要形態(tài)學(xué)改變是肺血管和右心室重構(gòu)，目前其機(jī)制不是很明確。有研究發(fā)現(xiàn)NOX可以通過誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)影響肺動(dòng)脈高壓患者肺血管重構(gòu)及右心重構(gòu)[14,15]。最近有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)在野百合堿誘導(dǎo)的PAH大鼠右心室NOX4表達(dá)明顯增高，并且給予白楊素治療后能夠抑制NOX4的表達(dá)，從而減輕MCT誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓大鼠右心室病理變化和膠原沉積[16]。我們實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明野百合誘導(dǎo)的PAH大鼠右心室NOX4的mRNA和蛋白水平均明顯增高，同時(shí)給予N-乙酰半胱氨酸皮下注射治療，4周后，PAH大鼠右心室NOX表達(dá)顯著降低。這些結(jié)果與之前學(xué)者們的研究是一致的，表明NAC通過下調(diào)NOX4的表達(dá)而抑制PAH大鼠右心室重構(gòu)。

NF-κB 是一種核轉(zhuǎn)錄因子，參與生物體內(nèi)很多重要的生理反應(yīng)過程。其中NF-κB 的活化在氧化應(yīng)激損傷誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓的形成進(jìn)程中發(fā)揮重要作用[17,18]。而大量的研究表明NAC可以通過抑制NF-κB活化而實(shí)現(xiàn)抗炎、抗氧化等作用[19-21]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),野百合堿誘導(dǎo)的 PAH 大鼠右心室 NF-κB的表達(dá)顯著增高,而給予NAC皮下注射4周后能下調(diào)大鼠右心室 NF-κB mRNA 及蛋白的表達(dá),表明NAC通過抑制NF-κB 活化從而保護(hù)PAH大鼠肺血管和右心室重構(gòu)。

綜上所述，NAC能夠緩解MCT誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓大鼠肺血管和右心室的重構(gòu)，其機(jī)制可能與抑制NOX4的表達(dá)和降低氧化應(yīng)激損傷誘導(dǎo)的NF-κB活化有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Montani D,Günther S,Dorfmüller P,etal.Pulmonary arterial hypertension[J].Orphanet J Rare Dis,2013,8(1):97.

[2]Rabinovitch M.Molecular pathogenesis of pulmonary arterial hypertension[J].J Clin Invest,2012,122(12):4306.

[3]Liu B,Luo XJ,Yang ZB,etal.Inhibition of NOX/VPO1 pathway and inflammatory reaction by trimethoxystilbene in prevention of cardiovascular remodeling in hypoxia-induced pulmonary hyperten-sive rats[J].J Cardiovasc Pharmacol,2014,63(6):567-576.

[4]Li XW,Wang XM,Li S,etal.Effects of rutaecarpine on right ventriclar remodeling in rats with monocrotaline-induced pulmonary hypertension [J].Chin J Appl Physiol,2014,30(5):405-410.

[5]Farkas D,Alhussaini AA,Kraskauskas D,etal.Nuclear factor κB inhibition reduces lung vascular lumen obliteration in severe pulmonary hypertension in rats[J].Am J Respir Cell Mol Biol,2014,51(3):413-425.

[6]Yavuz T,Uzun O,Macit A,etal.Pyrrolidine dithiocarbamate attenuates the development of monocrotaline-induced pulmonary arterial hypertension[J].Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol,2013,209(5):302-308.

[7]Price LC,Caramori G,Perros F,etal.Nuclear factor kappa-B is activated in the pulmonary vessels of patients with end-stage idiopathic pulmonary arterial hypertension[J].PloS One,2013,8(10):e75415.

[8]Chen W,Ercal N,Huynh T,etal.Characterizing N-acetylcysteine(NAC)and N-acetylcysteine amide(NACA)binding for lead poisoning treatment[J].J Colloid Interface Sci,2012,371(1):144-149.

[9]Samuni Y,Goldstein S,Dean OM,etal.The chemistry and biological activities of N-acetylcysteine[J].Biochim Biophys Acta,2013,1830(8):4117-4129.

[10]Cortijo J,Cerda-Nicolas M,Serrano A,etal.Attenuation by oral N-acetylcysteine of bleomycin-induced lung injury in rats[J].Eur Respir J,2012,17(6):1228-1235.

[11]Kharazmi A,Nielsen H,Schitz PO.N-acetylcysteine inhibits human neutrophil and monocyte chemotaxis and oxidative metabolism[J].Int J Immunopharmacol,2011,10(1):39-46.

[12]Gerrits C,Herings RMC,Leufkens HGM,etal.N-acetylcysteine reduces the risk of re-hospitalisation among patients with chronic obstructive pulmonary disease[J].Eur Respir J,2003,21(5):795-798.

[13]潘紅英,婁國(guó)強(qiáng),趙年豐,等.慢性重型肝炎患者早期血清 IL-18 和 NO 水平變化及 N-乙酰半胱氨酸對(duì)其的影響[J].中華傳染病雜志,2012,22(3):177-179.

[14]Jankov RP,Kantores C,Pan J,etal.Contribution of xanthine oxidase-derived superoxide to chronic hypoxic pulmonary hypertension in neonatal rats[J].Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol,2013,294(2):L233-L245.

[15]Liu B,Luo XJ,Yang ZB,etal.Inhibition of NOX/VPO1 pathway and inflammatory reaction by trimethoxystilbene in prevention of cardiovascular remodeling in hypoxia-induced pulmonary hypertensive rats[J].J Cardiovasc Pharmacol,2014,63(6):567-576.

[16]李先偉,過波,沈媛媛,等.白楊素對(duì)野百合堿誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓大鼠右心室 NOX4 及 NF-κB 表達(dá)的影響[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2015,50(9):1128-1134.

[17]Zhang Y,Dai L,Wu S,etal.Atorvastatin attenuates involvement of RhoA/Rho-kinase pathway and NF-κB activation in hypoxic pulmonary hypertensive rats[J].Chin Med J(Engl),2014,127(5):869-872.

[18]Wynants M,Vengethasamy L,Ronisz A,etal.NF-κB pathway is involved in CRP-induced effects on pulmonary arterial endothelial cells in chronic thromboembolic pulmonary hypertension[J].Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol,2013,305(12):L934-L942.

[19]Perez M,Wedgwood S,Lakshminrusimha S,etal.Hydrocortisone normalizes phosphodiesterase-5 activity in pulmonary artery smooth muscle cells from lambs with persistent pulmonary hypertension of the newborn[J].Pulm Circ,2014,4(1):71.

[20]Chang EY,Zhang J,Sullivan S,etal.N-acetylcysteine prevents preterm birth by attenuating the LPS-induced expression of contractile associated proteins in an animal model[J].J Matern Fetal Neonatal Med,2012,25(11):2395-2400.

[21]Chaumais MC,Ranchoux B,Montani D,etal.N-acetylcysteine improves established monocrotaline-induced pulmonary hyperten-sion in rats[J].Respir Res,2014,15(1):1-9.

[收稿2015-11-06修回2016-01-29]

(編輯許四平)

·啟事·

本刊誠(chéng)聘特約審稿人

《中國(guó)免疫學(xué)雜志》是中國(guó)免疫學(xué)會(huì)會(huì)刊,主要報(bào)道我國(guó)免疫學(xué)研究的各項(xiàng)國(guó)家科研課題,是全面反映中國(guó)免疫學(xué)整體水平的主流媒體。為了進(jìn)一步加快審稿速度,縮短稿件刊用周期,特誠(chéng)聘特約審稿人數(shù)名,組建審稿專家隊(duì)伍,詳情請(qǐng)登錄本刊網(wǎng)站,Web site:www.immune99.com;www.中國(guó)免疫學(xué).中國(guó)。

《中國(guó)免疫學(xué)雜志》編輯部

Effect of N-acetylcysteine in right ventricle of monocrotaline-induced pulmonary arterial hypertension of rats

HANBing,MENGXiao,BUPei-Li.

DepartmentofICU,Ji′nanSixthPeople′sHospital,Ji′nan250200,China

[Abstract]Objective:To investigate the protective effect of N-acetylcysteine(NAC)on right ventricular remodeling in a rat model of monocrotaline-induced pulmonary arterial hypertension(PAH).Methods: PAH rats were induced by a single injection of monocrotaline(60 mg/kg,sc)and were ad ministered with NAC[500 mg/(kg·d)]for 6 weeks.At the end of 4 weeks,the right ventricular systolic pressure(RVSP)and mean pulmonary artery pressure(mPAP)were monitored via the right jugular vein catheterization into the right ventricle.Right ventricle(RV)to left ventricle(LV)+septum(S)were calculated.Right ventricular morphological change was observed by HE staining.Sirius red was used to demonstrate collagen deposition.The expressions of collagen Ⅰ,collagen Ⅲ,NADPH oxidase 4(NOX4)and nuclear factor-kappa B(NF-κB)were analyzed by RT-PCR and(or) Western blot.Results: NAC attenuated RVSP,mPAP and right ventricular remodeling index(RV/LV+S) of PAH rats induced by monocrotaline after treatment for 4 weeks.Furthermore,monocrotaline-induced right ventricular collagen accumulation and collagen Ⅰ and collagen Ⅲ expression were both significantly suppressed by NAC.The expressions of NOX4 and NF-κB were obviously decreased in right ventricule from PAH rats with NAC treatment.Conclusion: NAC ameliorates right ventricular remodeling of PAH induced by monocrotaline in rats through down regulating the expression of NOX4 and antioxidant activity,and inhibiting activation of NF-κB and collagen accumulation.

[Key words]N-acetylcysteine;Monocrotaline;Pulmonary arterial hypertension

中圖分類號(hào)R332

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1000-484X(2016)03-0345-05

作者簡(jiǎn)介：韓冰(1979年-)，女，在讀碩士，主治醫(yī)師，主要從事肺動(dòng)脈高壓、冠心病、心律失常等相關(guān)疾病的診治工作，E-mail：hanbing368@163.com。

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2016.03.011

①山東大學(xué)齊魯醫(yī)院心內(nèi)科，濟(jì)南250012。