黃麗貞　鄧家剛　謝　滟　黃慧學　廣西中醫(yī)藥大學　530001　南寧市明秀東路179號楊玲玲　廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院仁愛分院　530001

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正交試驗優(yōu)選復方威茯方提取工藝及其顆粒劑制備工藝研究

黃麗貞鄧家剛謝滟*黃慧學廣西中醫(yī)藥大學530001南寧市明秀東路179號
楊玲玲廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院仁愛分院530001

摘要目的：優(yōu)選復方威茯顆粒的最佳制備工藝，為該復方的開發(fā)利用提供試驗依據(jù)。方法：采用分光光度法測定總黃酮含量，以總黃酮和干膏率為綜合考核指標，通過L9（34）正交試驗設計對水的用量、提取的時間和提取的次數(shù)進行考察，優(yōu)選復方威茯方水提工藝，再以浸膏為原料，單因素考察稀釋劑（可溶性淀粉與糊精）的比例及粘合劑（乙醇）的用量，制備復方威茯顆粒。結果：最佳水提工藝為A1B2C2，即處方藥材加9倍量水，提取1.5 h，提取3次；將提取液濃縮至相對密度為1 g/ml，以50%乙醇醇沉，靜置12 h后濾過，濾液濃縮至相對密度為1.30～1.35（60℃）的稠膏，加入可溶性淀粉與糊精（4∶3），混勻，烘干，打粉，加入適量85%乙醇制軟材，過16目篩制粒，于60℃烘干，整粒，即制得復方威茯顆粒。結論：該制備工藝合理、可行，為該復方的開發(fā)利用提供了實驗依據(jù)。

關鍵詞復方威茯方；正交設計；提取工藝；制備工藝

Study on Extraction Procedure with Orthogonal Test for Optimization of Compound Wei Fu and Granule Preparation Process

Huang Lizhen,Deng Jiagang,Xie Yan*,Huang Huixue Guangxi University of Chinese Medicine,NO.179,Mingxiu Dong Rd,Nanning,530001
Yang Lingling Charity Branch of the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning,530001

Abstract Objective:To optimize the best preparation process for compound Wei Fu granule so as to provide experimental basis for the development and utilization of the compound.Methods:The content of total flavonoids was determined by spectrophotometry.With the content of total flavonoids and yield of soft extract as comprehensive indexes，L9（34）orthogonal test was used to investigate the amount of water，extraction time，and extraction frequency for optimizing the water extracting technology of the compound Wei Fu granule.Then the extract was used as raw materials with single factors investigation for the ratio of diluter（soluble starch and dextrin）and the amount of binder（ethanol）to make the compound Wei Fu granule.Results:The optimum water extraction process was A1B2C2，which meant that the prescribed medicinal materials with 9 times water were extracted 1.5 h for 3 times.The extracted liquid was concentrated to the relative density of 1 g/ml with 50%ethanol alcohol precipitation，standing for 12 hours，filtered，and the filtrate was concentrated to condensed paste with relative density of 1.30～1.35（60℃），adding soluble starch and dextrin（4∶3），mixing，drying，powdering，then adding an appropriate amount of 85% ethanol made soft material，over 16 mesh sieve granulation，drying at 60℃for granulation，so as to make compound Wei Fu granule.Conclusion:The preparation procedure is reasonable and feasible，which provides experimental basis for development and utilization of the compound Wei Fu granules.

Keywords Compound Wei Fu granules;orthogonal test;extraction process;preparation process

復方威茯方是廣西中醫(yī)藥大學鄧家剛教授根據(jù)痛風的病因病機，以土茯苓、腫節(jié)風等十多味中藥組成的經(jīng)驗方，在臨床上應用近8年，治療急性痛風性關節(jié)炎效果良好。長期以來臨床以湯劑給藥，但由于湯劑攜帶、服用不方便，久置易霉敗變質(zhì)，故本課題組擬將其研制成顆粒劑，這樣既可保持湯劑的綜合療效，又可克服湯劑的缺點［1-2］。黃酮類化合物是植物長期自然生長過程中產(chǎn)生的一些次級代謝產(chǎn)物，目前發(fā)現(xiàn)的黃酮種類近萬種［3-4］。藥理研究表明，黃酮類化合物具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化等多種活性，是多種中藥的主要活性成分［5-6］。本實驗根據(jù)處方藥材中含有大量的黃酮類化合物，以總黃酮含量和干膏率為綜合考核指標，通過正交試驗優(yōu)選復方威茯方的提取工藝，并以得到的干膏為原料進行顆粒劑制備工藝研究，為其開發(fā)利用提供參考?，F(xiàn)報道如下。

1　實驗材料

1.1材料土茯苓、威靈仙等飲片均購自南寧市生源中藥飲片有限責任公司，并經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學蔡毅教授鑒定為正品；蘆丁對照品（批號為130507，供含量測定用，北京世紀奧科生物技術有限公司）；尿酸（Kayon Consulting Canada，批號：Q1736）；秋水仙堿（西雙版納藥業(yè)有限責任公司，批號：130123）。

1.2儀器B3200S-T超聲機（必能信超聲有限公司）；L-204電子天平（梅特勒-托利多中國分公司）；UV-1800紫外可見分光光度計（日本島津）。

2　實驗方法與結果

2.1總黃酮的含量測定

2.1.1提取方法按處方比例稱取1/4處方量的各藥材，浸泡30 min，加水提取，過濾，合并濾液，濃縮并定容至100 ml，備用。

2.1.2干膏率測定精密量取“2.1.1”制得的濃縮液5 ml，置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，于105℃烘箱干燥3 h，移至干燥器中，冷卻30 min，迅速精密稱定重量，按公式計算干膏率。

2.1.3對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品適量，用甲醇溶解并定容于25 ml棕色容量瓶中，搖勻，即配成含0.3280 mg/ml蘆丁的對照品貯備溶液。

2.1.4供試品溶液的制備精密量取按“2.1.1”項下方法所提取的溶液10 ml，移至蒸發(fā)皿中水浴揮干，加甲醇超聲溶解，濾過，轉(zhuǎn)至10 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，備用。

2.1.5檢測波長的確定精密量取上述蘆丁對照品溶液3.5 ml與供試品溶液0.5 ml，分別置25 ml棕色容量瓶中，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉法顯色［7-8］，以相應試劑做空白，于300～700 nm掃描，根據(jù)結果選取兩者均有最大吸收的波長500 nm為檢測波長。

2.1.6線性關系的考察精密吸取已配置的蘆丁對照品溶液1.5 ml，2.0 ml，2.5 ml，3.0 ml，3.5 ml，4.0 ml，4.5 ml，用甲醇定容于25 ml棕色容量瓶中，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉法顯色，以蘆丁對照品濃度為橫坐標，吸收峰為縱坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程Y= 11.726X-0.0088，r=0.9983（n=7），結果表明蘆丁在0.0197～0.0590 mg/ml范圍內(nèi)線性關系良好。

2.1.7精密度試驗取蘆丁對照品溶液3.0 ml，用甲醇定容于25 ml棕色容量瓶中，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉法顯色，重復測定6次，結果蘆丁吸光度RSD值為0.07%（n=6）。

2.1.8穩(wěn)定性試驗精密量取供試品溶液0.5 ml，置25 ml棕色容量瓶中，加甲醇定容至刻度，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉法顯色，每隔5 min測定1次，供試品溶液顯色后在30 min內(nèi)測定，結果RSD值為3.03%（n=6），結果表明供試品溶液30 min內(nèi)顯色穩(wěn)定。

2.1.9重復性試驗稱取同一批樣品6份，照“2.1.4”項下方法制備供試品溶液，測定含量，結果RSD值為1.27%（n=6），說明試驗方法重復性較好。

2.1.10加樣回收試驗精密量取9份供試品溶液，每份0.25 ml（濃度為1.6533 mg/ml），置25 ml棕色容量瓶中，分別加入蘆丁對照品溶液適量（加入量為供試品溶液中蘆丁含量的80%、100%和120%），各3份，用甲醇定容至刻度。采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉法顯色，以相應試劑做空白，在500 nm處測定吸光度，測定含量，計算各自回收率，結果低、中、高濃度平均回收率分別為102.07%、101.68%、102.80%，RSD值分別為2.93%（n= 3）、2.78%（n=3）、3.01%（n=3），表明測定方法準確可靠。

2.2正交試驗優(yōu)化復方威茯方提取工藝根據(jù)前期試驗結果，按處方比例稱取1/4處方量的各藥材，選擇對提取工藝影響較大的加水量（A）、提取時間（B）、提取次數(shù)（C）作為考察因素，以總黃酮含量和干膏率為考察指標，并以干膏率為0.7、總黃酮含量為0.3的權重系數(shù)對這兩個指標進行綜合加權評分［9-10］（最大總黃酮含量與最大干膏率均為100分），通過L9（34）表正交試驗法進行試驗。試驗因素水平設計見表1，正交試驗結果見表2，方差分析表3。

直觀分析和方差分析結果表明：以綜合指標考慮，各因素對水提取工藝的影響程度依次為C>B>A，即煎煮次數(shù)>煎煮時間>加水量，其中因素C對提取工藝有顯著性影響，因素A、B沒有顯著性影響，確定各因素的最佳水平為A1B2C3，即處方藥材加9倍量水，提取1.5 h，共提取4次。但從表2結果來看，提取3次或4次對干膏率及總黃酮含量影響不大，從節(jié)約實際生產(chǎn)成本的角度考慮，可適當減少提取次數(shù)，因此確定提取條件為A1B2C2，即處方藥材加9倍量水，提取1.5 h，提取3次。

為了進一步驗證所篩選出的提取工藝條件，稱取復方威茯方處方量藥物3份，分別按2.1.1項下方法制備，稱定干膏率并測定總黃酮的含量。結果顯示，干膏率為28.87%，RSD=1.47%（n=3）；總黃酮含量為5.9139 mg/g，RSD=1.95%（n=3）；均高于表2中的平均值（28.27%和5.0643 mg/g）。表明工藝可行。

表1　試驗因素水平設計

表2　正交試驗方案與結果

表3　方差分析結果

2.3復方威茯顆粒劑制備工藝研究

2.3.1浸膏提取稱取臨床處方湯劑一次服用生藥量172 g，按優(yōu)選工藝條件進行提取，可提取出約50 g干浸膏，其提取率約為28.87%。由于得膏率較大，為了使顆粒既易于制粒又盡量減少服用量，考慮用50%醇沉以降低雜質(zhì)含量，故選用水提醇沉工藝，并進行水提醇沉的干膏率測定。按上述最佳提取工藝進行操作，將提取液濃縮至相對密度為1 g/ml，再以50%乙醇醇沉，靜置12 h，濾過，濃縮并定容至100 ml，精密量取5 ml，置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，于105℃烘箱干燥3 h，移至干燥器中，冷卻30 min，迅速精密稱定質(zhì)量，計算干膏率。結果干膏率分別為17.91%、17.49%、17.29%，平均干膏率為17.56%，RSD=1.80%（n=3）。

2.3.2輔料比例的選擇以上述水提醇沉得到的浸膏為原料進行顆粒劑的制備。常用的稀釋劑有蔗糖、可溶性淀粉、糊精、乳糖，蔗糖有吸濕性，但糖尿病、肥胖癥、齲齒等患者不宜長期服用；乳糖化學性質(zhì)穩(wěn)定，與大多數(shù)的藥物不起作用，易溶于水，但價格昂貴，且糖尿病患者不宜長期服用；糊精和可溶性淀粉溶解性良好，吸濕而不潮解，在空氣中很穩(wěn)定，且價格低［11-12］。為了確保該制劑不吸潮，使用范圍更大，因此本實驗只考察可溶性淀粉和糊精，以制粒難易程度為評價指標，對可溶性淀粉和糊精不同的比例（見表4）進行考察，結果表明可溶性淀粉和糊精最佳比例為4∶3。

表4　輔料比例考察

2.3.3粘合劑的選擇以水為濕潤劑時，制得的軟材黏性較大，難以通過篩網(wǎng)制粒，故改用不同比例的乙醇為濕潤劑，以降低制粒的難度和顆粒的吸濕性［13］。以顆粒制粒難易和成型性為評價指標，對乙醇不同濃度為粘合劑進行考察（見表5），結果表明宜采用85%乙醇制粒。

表5　粘合劑的考察

2.3.4顆粒制備工藝加9倍量水浸泡30 min后煎煮3次，每次1.5 h，濾過，合并煎液并濃縮至相對密度為1 g/ml，50%乙醇醇沉，靜置12 h，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.30～1.35（60℃）的稠膏，加入糊精與可溶性淀粉（4∶3）混勻，烘干，打粉，加入適量85%乙醇制軟材，過16目篩制粒，于60℃烘干，整粒，即得。

3　討　論

復方威茯方是由多味中藥材組成的一個復方制劑，長期以來臨床以湯劑給藥，為遵循中醫(yī)傳統(tǒng)用藥的習慣，又考慮到生產(chǎn)成本及安全問題，故選用水作溶媒進行提取，并采用正交設計優(yōu)化其提取工藝。由于中藥復方藥味較多，有效成分還不完全清晰，且各味藥中所含有效成分的理化性質(zhì)不同，單純采用一個指標不易將各味藥的有效成分充分表達，故本文采用權重系數(shù)進行綜合加權評分，以能更加有效地控制該藥質(zhì)量，篩選更加合理、可行的制備工藝。

復方威茯方具有清熱燥濕、活血化瘀、通絡止痛之功效，已經(jīng)在臨床上應用近8年，治療痛風性關節(jié)炎收到良好效果。為了方便患者服用，考慮在原湯劑的基礎上進行二次開發(fā)——將其制備為顆粒劑。由于本組方中未有不良氣味的中藥材，故考慮在制粒過程中不添加任何矯味劑，且為滿足糖尿病等特殊患者的需求，擴大使用范圍，將其劑型定為無蔗糖型顆粒劑。經(jīng)試驗研究，復方威茯方最佳的水提工藝為：處方藥材加9倍量水，提取1.5 h，提取3次。提取液濃縮至相對密度為1 g/ml，以50%乙醇醇沉，靜置12 h，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.30～1.35（60℃）的稠膏，加入可溶性淀粉與糊精（4∶3），混勻，烘干，打粉，加入適量85%乙醇制軟材，過16目篩制粒，于60℃烘干，整粒，即制得復方威茯顆粒。

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（2016-01-04收稿/編輯陳明偉）

*通信作者，E-mail：1733013057@qq.com

基金項目：廣西科技基礎條件平臺建設項目（編號：13-051-06）；廣西中藥藥效研究重點實驗室開放課題（編號：13-051-06-K2）

中圖分類號：R283.6

文獻標識碼：A

文章編號：1003-0719（2016）01-0076-04