景詩(shī)學(xué) 吳波 羅添友

【摘要】目的：通過(guò)對(duì)隱睪患者檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞粘附分子（NCAM）及轉(zhuǎn)錄因子Oct-4蛋白，探討隱睪癥與生殖細(xì)胞腫瘤的關(guān)聯(lián)性。方法：搜集入住我院的隱睪癥的患者，采集隱睪睪丸標(biāo)本，并進(jìn)行睪丸活檢，檢測(cè)NCAM、Oct-4的表達(dá)；并分析兩個(gè)指標(biāo)的表達(dá)與隱睪位置和年齡的相關(guān)性。結(jié)果：NCAM在人隱睪中的表達(dá)與年齡組、睪丸位置無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。但是大于5歲后隱睪內(nèi)生精小管NCAM陽(yáng)性表達(dá)有增高趨勢(shì)。不同年齡組NCAM表達(dá)存在顯著差異性（P<0.05），小于1.6歲年齡組與大于5歲年齡組間存在顯著差異性（P<0.017），余年齡組間無(wú)顯著差異性。NCAM在間質(zhì)內(nèi)陰性表達(dá)與睪丸位置分布無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。Oct-4與NCAM生精小管內(nèi)同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)有4例，其年齡及睪丸位置分布無(wú)規(guī)律。結(jié)論：NCAM、Oct-4在人隱睪中存在病理性表達(dá)，NCAM和Oct-4可作為臨床預(yù)測(cè)隱睪患兒生殖潛能和睪丸癌變的篩查指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】隱睪；神經(jīng)細(xì)胞粘附分子；轉(zhuǎn)錄因子Oct-4；不育；癌變

【中圖分類(lèi)號(hào)】R679+. 22【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

隱睪是一種常見(jiàn)的男性不育疾病，發(fā)病率高達(dá)3%～4%，且其發(fā)病率有升高的趨勢(shì)＼[1，2＼]。臨床醫(yī)學(xué)研究已廣泛關(guān)注隱睪癥與癌變、不育的關(guān)系，有文獻(xiàn)報(bào)道隱睪癥引起了的生殖細(xì)胞腫瘤的概率是正常人的20～40倍＼[3＼]，引起約30%的睪丸腫瘤，是生殖細(xì)胞癌變的主要原因之一。特別是有人指出，即使將睪丸放入陰囊，也并不能改善隱睪患者的“不育、癌變”趨勢(shì)＼[4＼]。有研究認(rèn)為， 生殖母細(xì)胞遷移障礙或者分化延遲，不能形成足夠的精原細(xì)胞池，是隱睪患者“不育”及“癌變”的最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，而Oct-4及NCAM的表達(dá)，在這關(guān)鍵環(huán)節(jié)起重要作用。本組資料采用免疫組化方法對(duì)隱睪患者的NCAM、Oct-4進(jìn)行分析，探討其與患者睪丸位置、年齡之間的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1臨床資料

本研究以2011年10月至2012年前來(lái)我院體檢的48例隱睪患者為研究對(duì)象，單側(cè)患者41例，雙側(cè)患者7例，手術(shù)年齡在0.5～13.1歲之間，平均年齡為3歲。經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，獲得患者家屬知情同意條件下，共搜集50個(gè)睪丸標(biāo)本，在單側(cè)患者只取患側(cè)共41個(gè)，雙側(cè)患者只取一側(cè)共5個(gè)，取雙側(cè)者共2例4個(gè)。其中腹股溝型標(biāo)本共21例，外環(huán)口型標(biāo)本共14例，內(nèi)環(huán)口型標(biāo)本共10例，皮下型標(biāo)本共5例。

1.2組織病理學(xué)檢測(cè)

采用冰凍切片免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行睪丸組織病理檢測(cè)。手術(shù)切除睪丸組織，置冰凍切片機(jī)載物臺(tái)上，-22℃快速冷凍后，切片，將切片貼附于涂有APES膠的玻片上，用冷丙酮固定5s后晾干切片，再用Tris-HCL緩沖液洗10s，滴加細(xì)胞角蛋白即用型抗體于水平位置的玻璃片上，將組織覆蓋，將盛有玻璃片的試劑盒放入43℃冰箱內(nèi)孵育3min，用Tris-HCL緩沖液洗3次，每次10s，DAB顯色，顯微鏡下控制染色強(qiáng)度，用Mayers蘇木素復(fù)染20s，水洗后用梯度酒精脫水，二甲透明，封片，觀(guān)察結(jié)果。設(shè)備及試劑盒由我院病理科提供。

結(jié)果判定：（1）NCAM陽(yáng)性：新生鼠睪丸NCAM陽(yáng)性免疫組化染色片作陽(yáng)性對(duì)照，染色陽(yáng)性信號(hào)為棕黃色，位于細(xì)胞膜。（2）Oct-4陽(yáng)性判斷：以成人精原細(xì)胞瘤陽(yáng)性免疫組化染色片作陽(yáng)性對(duì)照，染色陽(yáng)性信號(hào)為棕黃色，位于細(xì)胞核。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)

統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件是SPSS17.0，不同組之間的差異比較采用方差分析，連續(xù)型變量?jī)山M間比較采用t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的采用秩和檢驗(yàn)，率的比較采用Fisher確切概率法/χ2檢驗(yàn)。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩兩比較應(yīng)用Bonfrroni法，校正檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)=0.05/檢驗(yàn)次數(shù)。

2結(jié)果

2.150個(gè)睪丸中生精小管內(nèi)NCAM、Oct-4病理表達(dá)規(guī)律及NCAM在隱睪生精小管和睪丸間質(zhì)內(nèi)表達(dá)NCAM生精小管（-）、睪丸間質(zhì)（+）有21例，占42%；NCAM生精小管內(nèi)（+）、睪丸間質(zhì)（+）有13例，占26%；NCAM生精小管內(nèi)陽(yáng)性表達(dá)（+）、睪丸間質(zhì)表達(dá)（-）有2例，占4%。NCAM在生精小管內(nèi)（-）、睪丸間質(zhì)（-）有14例，占28%。生精小管中NCAM（+）、Oct-4（-）有11例，占22%；生精小管中NCAM（+）、Oct-4（+）有4例，占8%；生精小管中NCAM（-）、Oct-4（+）有2例，占4%；總共17例，約34%在隱睪生精小管內(nèi)病理性表達(dá)。見(jiàn)表1、表2。

2.2NCAM生精小管內(nèi)表達(dá)、間質(zhì)內(nèi)陰性表達(dá)與年齡的相關(guān)性NCAM在人隱睪生精小管中的表達(dá)與年齡組無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。但是大于5歲后隱睪內(nèi)生精小管NCAM陽(yáng)性表達(dá)有增高趨勢(shì)。不同年齡組NCAM間質(zhì)內(nèi)陰性表達(dá)存在顯著差異性（P<0.05），小于1.6歲年齡組與大于5歲年齡組間存在顯著差異性（P<0.017），余年齡組間無(wú)顯著差異性。見(jiàn)表3。

2.3NCAM生精小管內(nèi)表達(dá)、間質(zhì)內(nèi)陰性表達(dá)與年齡的相關(guān)性Fisher確切概率法P=0.1415，P>0.05； NCAM間質(zhì)內(nèi)陰性表達(dá)與年齡的相關(guān)性Fisher確切概率法：P=0.0022，P<0.05。

2.4NCAM在人隱睪中的表達(dá)與睪丸位置無(wú)相關(guān)性（P>0.05）NCAM在間質(zhì)內(nèi)陰性表達(dá)與睪丸位置分布無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。Oct-4與NCAM生精小管內(nèi)同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)有4例，其年齡及睪丸位置分布無(wú)規(guī)律。見(jiàn)表4。

3討論

NCAM是細(xì)胞粘附分子的一員， 啟動(dòng)并維持生殖母細(xì)胞發(fā)育，是調(diào)控間質(zhì)細(xì)胞前驅(qū)體遷移及間質(zhì)細(xì)胞分化發(fā)育的重要因子之一＼[5，6＼]。在正常發(fā)育過(guò)程中NCAM在生精小管中的表達(dá)在出生3～4個(gè)月時(shí)消失，同時(shí)在睪丸間質(zhì)中開(kāi)始出現(xiàn)，其異常表達(dá)，代表生殖細(xì)胞的生長(zhǎng)分化異常，存在生殖潛能低下和/或癌變危險(xiǎn)性＼[7，8＼]。本研究中，NCAM在人隱睪生精小管中的表達(dá)與年齡組無(wú)相關(guān)性（P>0.05），提示隱睪患者生殖細(xì)胞發(fā)生癌變的風(fēng)險(xiǎn)較高，并不受年齡影響。但是NCAM在生精小管中的異常表達(dá)，大于5歲后有增高趨勢(shì)，提示可能隱睪患者生殖細(xì)胞發(fā)生癌變的風(fēng)險(xiǎn)隨年齡增高而增加，需進(jìn)一步增大樣本研究。不同年齡組NCAM間質(zhì)內(nèi)陰性表達(dá)存在顯著差異性（P<0.05），小于1.6歲年齡組與>5歲年齡組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.017），其它年齡組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示隱睪患者睪丸間質(zhì)細(xì)胞發(fā)生癌變的風(fēng)險(xiǎn)較高，并隨著年齡有增高趨勢(shì)，提示可能隱睪患者睪丸間質(zhì)細(xì)胞發(fā)生癌變的風(fēng)險(xiǎn)隨年齡增高，而增加，需進(jìn)一步增大樣本研究。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，本研究中NCAM生精小管內(nèi)、間質(zhì)內(nèi)陰性表達(dá)均與睪丸置分布無(wú)相關(guān)性，即睪丸位置與生殖細(xì)胞發(fā)生癌變無(wú)相關(guān)性＼[9，10＼]。

Oct-4是生殖母細(xì)胞特異性標(biāo)志物，參與睪丸生殖細(xì)胞的分化及睪丸結(jié)構(gòu)的形成，與癌前病變相關(guān)＼[11，12＼]。Oct-4生精小管內(nèi)的表達(dá)陽(yáng)性有6例，占12%，且與其年齡及睪丸位置分布無(wú)相關(guān)性，提示提示隱睪患者睪丸癌變的風(fēng)險(xiǎn)與年齡、睪丸位置無(wú)關(guān)，提示可能隱睪患者癌變的風(fēng)險(xiǎn)在睪丸下降之前已經(jīng)出現(xiàn)，但是本研究樣本量少＼[13＼]，需進(jìn)一步增大樣本研究。

綜上，.NCAM和Oct-4可作為臨床預(yù)測(cè)隱睪患兒發(fā)生生殖細(xì)胞癌變的篩查指標(biāo)，在50例標(biāo)本中， NCAM、Oct-4正常表達(dá)的有19例，僅占38%，雖然其表達(dá)在隱睪患者中隨年齡有增高趨勢(shì)，統(tǒng)計(jì)分析其表達(dá) NCAM、Oct-4在生精小管內(nèi)表達(dá)與其年齡及睪丸位置分布無(wú)相關(guān)性，提示可能隱睪患者癌變的風(fēng)險(xiǎn)在睪丸下降之前已經(jīng)出現(xiàn)＼[14，15＼]。本研究受到時(shí)間及臨床標(biāo)本來(lái)源限制，生殖細(xì)胞癌變預(yù)測(cè)指標(biāo)和隱睪位置及單雙側(cè)的相關(guān)性，NCAM在間質(zhì)表達(dá)異常與生殖細(xì)胞癌變的影響，是否治療越晚生殖潛能損害越重等眾多問(wèn)題，尚待進(jìn)一步擴(kuò)大標(biāo)本量和遠(yuǎn)期隨訪(fǎng)研究。

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（收稿日期：2015-02-02）