李美霞謝書陽

1濱州醫(yī)學院基礎醫(yī)學院 山東省煙臺市 264003 2山東省高青縣人民醫(yī)院 山東省高青縣 256300

宮頸癌組織CX43和Vimentin的表達與臨床意義研究

李美霞1,2謝書陽1

1濱州醫(yī)學院基礎醫(yī)學院 山東省煙臺市 264003 2山東省高青縣人民醫(yī)院 山東省高青縣 256300

目的：檢測正常宮頸組織和CIN及宮頸癌病灶中的CX43和Vimentin表達水平，分析二者與臨床病理指標之間的關系。方法：收集2014年1月-2015年6月年高青縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科手術切除的33例宮頸癌、32例CIN及16例正常宮頸組織標本作為對照組，試驗對象術前均未進行化療與放療，且均行HPV檢查。采用免疫熒光與Western Blot方法檢測CX43和Vimentin在3種組織中的表達水平。結果：（1）Cx43在對照組、CIN（I、II-III及宮頸癌中的陽性表達率分別為68.8%、66.7%、65%、27.3%，宮頸癌組cx43表達明顯低于對照組（p=0.006）；cx43在宮頸癌靜脈侵犯組的表達率顯著低于未侵犯組：13%VS60%，（p=0.018）；在淋巴結侵犯組的表達率顯著低于未侵犯組：9.1%和63.6%，（p=0.004）。（2）Vimentin在對照組、CIN（I、II-III及宮頸癌中的陽性表達率分別為12.5%、25%、50%、69.7%，進行X2檢驗顯示陽性表達率有顯著性差異（p=0.024）；Vimentin在宮頸癌侵犯靜脈組的表達率顯著高于未侵犯靜脈組：90.9%VS27.3%，（p=0.001）；在宮頸癌淋巴結侵犯組的表達率顯著高于淋巴結未侵犯組：86.4%和36.4%，（p=0.011）。（3）spearman相關分析顯示cx43與Vimentin的表達呈負相關（r=-0.485，p=0.004）。結論：CX43表達降低和Vimentin表達增多與宮頸癌惡性程度相關，Vimentin與CX43的表達呈負相關聯(lián)系。

宮頸癌；CIN；免疫熒光組織化學；Western Blotting；CX43；Vimentin

宮頸癌位于乳腺癌之后為第二普遍性癌癥，隨著宮頸癌分子遺傳學的進展已經(jīng)揭示癌癥的形成是多步驟過程，并且涉及到多種基因的改變。最近的證據(jù)已經(jīng)證明：EMT已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)與主要的癌癥類型具有聯(lián)系并且與生性生殖系統(tǒng)癌癥之間的聯(lián)系要比其他癌癥更為普遍[1]。CX43與vimentin是目前研究比較深入的癌癥相關細胞因子，在腫瘤增殖、浸潤與轉移過程各自發(fā)揮重要的作用，但是在宮頸癌中的兩者的研究比較少見，且與臨床病理特征之間的關系沒有統(tǒng)一結論。

1 材料和方法

1.1 臨床研究對象

收集2014年1月-2015年6月高青縣人民醫(yī)院手術切除33例宮頸癌、32例CIN及16例正常宮頸組織標本，試驗對象術前均未進行化療與放療，且均行HPV檢查?；颊咂骄挲g為（49.5±12.3）歲。歸類如下：宮頸癌33例，其中宮頸癌細胞侵犯靜脈系統(tǒng)23例，無侵犯靜脈10例，有淋巴結轉移22例，無淋巴結轉移11例。CINⅠ12例，CINⅡ-Ⅲ20例，以16例正常宮頸組織為對照。

1.2 主要試劑與方法

Vimentin、CX43免疫熒光試劑盒與Western Blot均購自武漢博士德生物工程有限公司。方法按照說明書的詳細步驟進行。

1.3 結果判定

熒光顯微鏡下可見細胞漿中出現(xiàn)藍色熒光者為陽性細胞。每張切片陽性細胞分布區(qū)隨機選取5個不重復視野，高倍鏡（×400）下觀察計數(shù)每個視野中陽性細胞數(shù)，并計算陽性率。imageproplus4.10版本的專業(yè)圖像分析軟件進行圖像分析，記錄積分光密度。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 Cx43和Vimentin表達與宮頸癌臨床病理特征的關系

（1）Cx43在正常宮頸組織、CIN I、Ⅱ-Ⅲ及宮頸癌中的陽性表達率分別為68.8%、66.7%、65%、27.3%。CIN I、CIN Ⅱ-Ⅲ組與正常宮頸組無統(tǒng)計學差異（p>0.05）；宮頸癌組cx43表達明顯低于正常宮頸組，差異有統(tǒng)計學意義（p=0.006）；cx43在宮頸癌侵犯靜脈組與未侵犯靜脈組的陽性表達率分別為13%和60%，組間有顯著性差異（p=0.018）；cx43在宮頸癌侵犯淋巴結組與未侵犯淋巴結組的陽性表達率分別為9.1%和63.6%，組間有顯著性差異（p=0.004）。

（2）Vimentin在正常宮頸組織、CIN I、Ⅱ-Ⅲ及宮頸癌中的陽性表達率分別為12.5%、25%、50%、69.7%，表達依次增強，對Vimentin在三種組織中的陽性表達率進行X2檢驗，Vimentin在三種組織中的陽性表達率有顯著性差異（p=0.024）；Vimentin在宮頸癌侵犯靜脈組與未侵犯靜脈組的陽性表達率分別為90.9%和27.3%，組間有顯著性差異（p=0.001）；Vimentin在宮頸癌侵犯淋巴結組與未侵犯淋巴結組的陽性表達率分別為86.4%和36.4%，組間有顯著性差異（p=0.011）。

（3）CX43和Vimentin表達之間的相關性分析。對Vimentin與cx43在宮頸癌中的表達情況進行spearman相關分析顯示：Vimentin與cx43的表達呈負相關（r=-0.485，p=0.004）。

2.2 免疫熒光染色及Western Blot結果顯示

結果顯示：Cx43在正常宮頸組織、CIN I、CIN Ⅱ-Ⅲ及宮頸癌中的蛋白表達逐漸降低，差異具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；Vimentin在正常宮頸組織、CIN I、CINⅡ-Ⅲ及宮頸癌中的蛋白表達逐漸升高，差異具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。

3 討論

宮頸癌EMT過程中涉及到的連接蛋白類可能相互矛盾。但對于CX-43而言這好像比較特殊，CX-43在本文中得到廣泛的研究。然而當EMT被考慮分為不同階段時，有些粘附性能夠以不同的形式被發(fā)現(xiàn)并且明顯的矛盾，在侵襲過程中連接蛋白所具有的作用。確實，EMT的第一個階段可允許侵襲性細胞從最初的腫瘤中進行分離是鈣粘著糖蛋白的依賴性細胞-細胞粘附力的丟失和特異性細胞-基質粘附力的建立的結果[2]。在這個階段有可能出現(xiàn)在E-鈣粘著糖蛋白和N-鈣粘著糖蛋白之間的這種轉換，并且經(jīng)常伴隨著交界性斑塊的丟失，這與GJIC的丟失是相互聯(lián)系的。通過整合素與ECM連接會出現(xiàn)允許CX-43表達的維持，這與或多或少的極化的交界斑相聯(lián)系。在這一點上，功能性GJIC好像在腫瘤細胞與間質細胞之間建立異型細胞性GJIC。反過來說，激活微環(huán)境對于癌癥細胞侵襲一個決定性的步驟。這種腫瘤旁間質的激活允許間質蛋白水解酶的分泌和激活，間質蛋白水解酶在ECM內有助于腫瘤細胞侵襲，在這個時間點，當侵襲過程導致肌動蛋白纖維和腫瘤細胞膜結構的重新組成，支架蛋白通過CX43-ct和/或半通道所起到的功能，可能更有助于由ECM降解所介導的侵襲過程。這種猜想可能被在平面遷移過程ECM沒有細胞間降解，在一個平面CX-43并沒有表現(xiàn)出本質的事實所支持。然而當ECM在侵襲性細胞中轉變?yōu)楣潭ú粍拥募毎?，CX-43好像能夠在轉錄、翻譯或翻譯后的水平進行不同的類型的調節(jié)，允許它們在質膜（脂筏）的triron不溶性結構的定位[3]。

波形蛋白被報道可以通過由PI3K/AKt和Erk1/2信號通路所介導的EGFR的激活進行上調，這在卵巢癌的細胞遷移和侵襲侵潤過程和發(fā)展過程中起到了重要的作用[4]。在宮頸癌中，波形蛋白表達水平的上調與EGFR的過度表達相聯(lián)系，作為宮頸癌細胞侵潤的潛在的刺激因素曾經(jīng)被報道過。據(jù)報道，在VIM的啟動子區(qū)域產(chǎn)生超甲基化可激活宮頸癌細胞的增殖和遷移。波形蛋白在子宮內膜癌細胞中也被報道呈過度表達狀態(tài)，在子宮內膜癌中癌癥相關性或纖維細胞可通過PI3K/AKt和MAPK/ Erk通路誘導子宮內膜癌細胞增殖[5]。

（通訊作者：謝書陽）

[1]Jongen W,Fitzgerald D,Asamoto M,et al.Regulation of connexin 43-mediated gap junctional intercellular communication by Ca2+ in mouse epidermal cells is controlled by E-cadherin[J].Cell Biol,1991,114,545-555.

[2]Meyer R,Laird D,Revel JP.Inhibition of gap junction and adherens junction assembly by connexin and A-CAM antibodies[J]. Cell Biol,1992,119,179-189.

[3]Wang Y,Rose B.An inhibition of gap-junctional communication by cadherins[J].Cell Sci,1997,110,301-309.

[4]Hernandez-Blazquez F,Joazeiro P,Omori Y.Control of intracellular movement of connexines by E-cadherin in murine skin papilloma cells[J].Exp Cell Res,2001,270,235-247.

[5]Nambara C,Kawasaki Y,Yamasaki H.Role of the cytoplasmic loop domainof Cx43 in its intracellular localization and function: possible interaction with cadherin[J].Membr Biol,2007,217,63-69.

李美霞（1981-），女，山東省壽光市人。大學本科學歷?，F(xiàn)為主治醫(yī)師。主要研究宮頸癌的治療與預防。