邱孫全

浙江大學醫(yī)學院附屬婦產科醫(yī)院 浙江省杭州市 310000

程序化和玻璃化凍融人卵裂期胚胎的臨床應用效果比較

邱孫全

浙江大學醫(yī)學院附屬婦產科醫(yī)院 浙江省杭州市 310000

目的：探討程序化和玻璃化凍融卵裂期胚胎的效果及臨床結局。方法：結果：玻璃化組的胚胎復蘇存活率高于程序化組，而周期取消率較低。在臨床結局上，玻璃化組的胚胎植入率與程序化組無顯著差異，而臨床妊娠率相比較高。結論：玻璃化法凍融卵裂期胚胎優(yōu)于程序化法，可獲得更高的臨床妊娠率。

玻璃化；程序化；卵裂期胚胎；體外受精-胚胎移植

自1984年首例凍融人類胚胎成功妊娠后，胚胎冷凍-復蘇技術不斷發(fā)展。目前應用于臨床的胚胎凍融方法主要有慢速程序化冷凍和玻璃化冷凍。相比程序化，玻璃化冷凍操作時間短，并且不需要價格高昂的程序化冷凍儀。而短時間內高濃度的玻璃化冷凍液是否會影響胚胎的發(fā)育潛能，仍有待更多的研究。本研究回顧性分析本中心的1154例胚胎凍融周期的臨床結果，比較兩種凍融方法的冷凍復蘇效果及臨床結局，以期為臨床上選擇適宜的凍融方法提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象

對2015年1月至2015年6月期間在本中心接受體外受精-胚胎移植（IVF-ET）的1154個冷凍-復蘇周期。其中程序化冷凍813例，玻璃化冷凍341例。

1.2 研究方法

1.2.1 程序化冷凍

試劑為FreezeKit Cleave和ThawKit Cleave（Vitrolife, 瑞典）。使用英國Planer程序降溫儀進行程序化冷凍。將胚胎置入ES3min，移入FS放置8min后裝管并放入程序降溫儀，以-2℃/min降溫至-7℃，植冰，然后以-0.3℃/min降溫至-30℃，之后以-30℃/min降溫至-150℃，取出迅速投入液氮中保存。解凍時，將麥管從液氮中取出，室溫30s，30℃水浴40s，取出將胚胎按序移入TS1、TS2和ES各5min，轉入培養(yǎng)液中置于CO2培養(yǎng)箱。

1.2.2 玻璃化冷凍

試劑為MediCult Vitrifcation Cooling和Medicult Vitrifcation Warming（Origio，丹麥）。冷凍時，將胚胎放入BS 1min，轉入ES 7min，然后移入VS漂洗數(shù)次并于1min內將胚胎滴在載桿上，迅速投入液氮保存。解凍時，將裝有胚胎的載桿從液氮中取出，迅速置入37℃的VS1,1min后按順序移入VS2、VS3、VS4，分別放置3min，轉入培養(yǎng)液中置于CO2培養(yǎng)箱。

1.2.3 胚胎移植

采用自然周期、激素替代法或hMG/ hCG促排卵周期準備內膜。移植后進行黃體支持，至4周后行B超檢查妊娠囊。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結果

（1）將1154例胚胎凍融移植周期分為程序化和玻璃化冷凍組，周期數(shù)分別為813和341。比較兩組的患者基本資料，包括年齡（31.18±3.37～30.92±3.71，P>0.05）、不孕年限（3.98±2.15～3.77±2.56，P>0.05）和內膜厚度（9.16±1.64～9.32±1.73，P>0.05）等，均無顯著差異。

（2）比較兩組的胚胎冷凍-復蘇存活率和移植周期取消率，以及行胚胎移植術后的胚胎植入率和臨床妊娠率。結果顯示，玻璃化組的胚胎復蘇存活率高于程序化組（93.0%～81.2%，P<0.05），而周期取消率較低（2.6%～4.9%，P<0.05）。在臨床結局上，玻璃化組的胚胎植入率與程序化組無顯著差異（26.3%～25.3%，P>0.05），而臨床妊娠率相比較高（51.2%～45.9%，P<0.05）。

3 討論

胚胎凍融技術可最大限度地利用胚胎，使一次取卵周期可能獲得多次胚胎移植機會，提高臨床累計妊娠率。目前，常用的胚胎冷凍為程序化冷凍法和玻璃化冷凍法。程序化法臨床應用較早，主要通過使用程序降溫儀來實現(xiàn)胚胎細胞的脫水。然而冷凍過程難以完全避免胞內冰晶的產生從而對胚胎造成損傷。玻璃化冷凍室利用高濃度的冷凍保護劑，使胚胎胞內液體變?yōu)椴ＡЩ癄顟B(tài)，從而避免冰晶形成。與程序化法相比，玻璃化冷凍法無需昂貴的設備，操作簡便，冷凍過程耗時較短[1]。而高濃度冷凍保護劑的使用會加大細胞毒性，其對胚胎后續(xù)發(fā)育的影響有待研究。

本研究選取1154例冰凍胚胎移植周期，并根據冷凍方法進行分組分析，發(fā)現(xiàn)玻璃化凍融法獲得的胚胎復蘇存活率比程序化法高（93.0%～81.2%），而移植周期取消率較低（2.6%～4.9%）。這一結果與國內外多數(shù)學者的研究結果一致[2-4]。臨床結局方面，比較兩組的胚胎植入率，結果顯示無顯著差異（26.3%～25.3%，P>0.05）。可能的原因是：高濃度的DMSO（二甲基砜）作為冷凍保護劑，對細胞具有潛在的毒性，研究表明DMSO可提高胚胎的甲基化水平，從而影響胚胎的發(fā)育過程。相比程序化法，玻璃化法凍融的胚胎可獲得更高的臨床妊娠率（51.2%～45.9%）。這可能是因為玻璃化凍融的胚胎存活率相比程序化法較高。

程序化凍融胚胎在臨床的應用已有30多年時間，其安全性已得到公認。而玻璃化法的應用時間較短，其安全性一直為輔助生殖領域所關注，包括嬰兒出生缺陷、體重、發(fā)育等健康狀況[5-7]。其后續(xù)影響值得進一步研究。

綜上所述，玻璃化凍融胚胎技術比程序化法具有較高的冷凍-復蘇率，且可獲得更高的臨床妊娠率。而對于后代安全性，仍需長期隨訪和后續(xù)研究。

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