張怡敏　陳紅英　西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院(咸陽 712100 )

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蒜和大血藤等四種中藥合劑對(duì)2株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的體外抑菌研究

張怡敏△陳紅英▲西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院(咸陽 712100 )

摘要目的：探討大蒜和大血藤、五味子、五倍子、石榴皮四種中藥合劑對(duì)2株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌體外抑菌效果。方法：制備大血藤、五味子、五倍子、石榴皮、蒜藥液，采用牛津杯法和微量稀釋法，分別測(cè)定它們對(duì)2株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌體外抑菌圈、最小抑菌濃度(MIC)、最小殺菌濃度(MBC)。結(jié)果：大蒜、五味子、五倍子、石榴皮四種中藥合劑對(duì)2株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌體外有不同程度的抑菌效果，大血藤和蒜>蒜和石榴皮、蒜和五味子>蒜和大血藤+石榴皮+五味子+五倍子，蒜和五倍子效果最差。結(jié)論：蒜和這幾種中藥聯(lián)合效果不如純蒜汁在體外的抑菌效果。

主題詞 大蒜大血藤抗菌藥鮑氏不動(dòng)桿菌

鮑曼不動(dòng)桿菌是臨床上主要常見耐藥菌之一，僅次于銅綠假單胞菌，為條件致病菌，主要通過接觸和呼吸道傳播，由于耐藥性的出現(xiàn)，給臨床帶來很大困難，中醫(yī)目前對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌體外抑菌的研究大概有十多種中藥，都停留在單味藥對(duì)MDRAB的研究，從效果來看,陳澤慧[1]等通過對(duì)五味子、石榴皮等23味中藥研究，篩選出五味子、石榴皮、黃芩、黃連、連翹、血藤和金錢草7種抑菌效果較好的中藥進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)，結(jié)果顯示，7種中藥對(duì)產(chǎn)MBL(金屬13．內(nèi)酰胺酶)菌株和不產(chǎn)MBL菌株均有不同程度的抑菌作用，以五味子和石榴皮的抑菌效果最好，黃連和黃芩次之，連翹、血藤和金錢草的抑菌效果較弱。冷會(huì)勇等[2]通過肉湯二倍稀釋法檢測(cè)18種中藥水體液對(duì)AB多重耐藥株的MIC，結(jié)果顯示五味子、五倍子、黃芩等中藥對(duì)MDRAB具有良好的抗菌作用。張景皓等[3]采用試管二倍稀釋法對(duì)中藥藥液進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)，研究發(fā)現(xiàn)黃芩、黃連、五味子對(duì)不同的耐藥菌有不同程度的抑菌作用，對(duì)于AB的抑菌作用五味子大于黃連、黃芩。何祖光[4]采用K-B 紙片法，對(duì)大蒜提取液臨床體外抗鮑曼不動(dòng)桿菌的實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大蒜提取液抗鮑曼不動(dòng)桿菌無論單獨(dú)還是與抗菌藥物聯(lián)合均產(chǎn)生明顯效果。很多學(xué)者建議大蒜和其他中藥制成合劑對(duì)MDRAB體外抑菌可能有很好的抑菌效果，所以作者將目前抑菌效果相對(duì)好的4種中藥和蒜配成合劑看看它們的體外抑菌效果。

1材料1.1 實(shí)驗(yàn)中藥藥材制備1.5g/mL 生蒜提取液， 取優(yōu)質(zhì)白皮蒜籽15g，去皮、洗凈、烘干榨汁，反復(fù) 2 次，放在無菌量筒中，加10mL無菌蒸餾水，配成相當(dāng)于 1.5g/mL 蒜子濃度， 然后取上清液即 1.5g/mL，裝無菌管備用；五味子10g，反復(fù)2次加100mL水加熱濃縮10mL,裝無菌管備用；石榴皮10g，反復(fù)2次加100mL水加熱濃縮10mL,裝無菌管備用；五倍子10g，反復(fù)2次加100mL水加熱濃縮10mL,裝無菌管備用；大血藤30g，反復(fù)2次加200mL水加熱濃縮30mL,裝無菌管備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)菌株(鮑曼不動(dòng)桿菌)分離于本院 2014年 7 月 2例患者2株痰分泌物中。所分離試驗(yàn)菌株均按 《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》的程序進(jìn)行鑒定而確認(rèn)的鮑曼不動(dòng)桿菌，且耐藥特性均符合，對(duì)亞胺培南、頭孢哌酮/舒巴坦、 頭孢他啶 、美羅培南、妥布霉素、阿米卡星均耐藥，無抑菌圈。

1.3培養(yǎng)基為血瓊脂平皿、營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿，培養(yǎng)基由上海研生實(shí)業(yè)有限公司提供，牛津杯由東臺(tái)市吉泰不銹鋼制品廠提供(0誤差)，藥敏片由廣州納特生物科技提供，用質(zhì)控菌株驗(yàn)證藥敏片有效性，證實(shí)藥敏片均有效。

2方法2.1藥敏實(shí)驗(yàn)的方法按操作規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)涂布鮑曼不動(dòng)桿菌的4個(gè)藥敏血平皿(直徑 90mm)上貼上如下幾種藥敏片：亞胺培南、頭孢哌酮/舒巴坦、 頭孢他啶 、美羅培南、妥布霉素、阿米卡星，每種藥敏片貼上1片，每片為單獨(dú)抗菌藥物，培養(yǎng)均為 24h觀察結(jié)果，單獨(dú)藥敏紙片判斷標(biāo)準(zhǔn)按 NCCLS2002 標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果符合臨與方法床鑒定結(jié)果。

2.2牛津杯測(cè)抑菌效果取10個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿分別上面鋪滿鮑曼不動(dòng)桿菌(每5個(gè)平皿上種同1株鮑曼)，每個(gè)上面放2個(gè)牛津杯，分別是蒜汁，蒜汁+五

味子；蒜汁，蒜汁+五倍子；蒜汁，蒜汁+血藤；蒜汁，蒜汁+五味子+五倍子+石榴皮。溶液濃度1g/mL,裝入牛津杯，37℃，培養(yǎng)18h后，抑菌效果為：蒜汁>蒜汁+血藤>蒜汁+五味子=蒜汁+石榴皮>蒜汁+五倍子+五味子+石榴皮>蒜汁+五倍子。

2.3 MIC測(cè)定給96孔板第一行每孔加100μL濃度為1g/mL(蒜汁+血藤)藥液，2孔開始加液體培養(yǎng)基100μL和100μL濃度為1g/mL(蒜汁+血藤)藥液，3孔～12孔各加液體培養(yǎng)基100μL，再?gòu)?孔的混合液里取100μL加3孔一次到10孔，然后給第一行所有孔加10μL鮑曼不動(dòng)桿菌的菌液。同上第二行加蒜汁+五味子，第三行加蒜汁+五倍子，第四行加蒜汁+石榴皮，第五行加蒜汁+五味子+五倍子+石榴皮。37℃，培養(yǎng)18h第一行7、8、9孔可能沒菌生長(zhǎng)；第二行和第四行變化相同，6、7孔可能沒菌生長(zhǎng)，8孔可能有菌生長(zhǎng)；第三行可能2、3、4孔，第五行可能5、6孔。

2.4MBC測(cè)定取3個(gè)平皿，用無菌接種環(huán)在每個(gè)平皿取四個(gè)孔畫四個(gè)區(qū)，37℃，培養(yǎng)18h后，蒜+血藤8孔沒菌；二、四行7孔無菌；三行2孔沒菌；五行5孔沒菌。

3結(jié)果大蒜和大血藤、五味子、五倍子、石榴皮四種中藥合劑對(duì)2株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌體外有不同程度的抑菌效果，體外抑菌效：蒜>大血藤和蒜>蒜和石榴皮、蒜和五味子>蒜+石榴皮+五味子+五倍子，蒜和五倍子效果最差。蒜合劑反而影響了純蒜的效果，所以不建議體外蒜和這幾味中藥聯(lián)合使用。

4討論蒜汁和這幾位中藥聯(lián)合體外抑菌效果來看，就大血藤和蒜效果最好，但也沒有純蒜汁好，蒜合劑反而影響了純蒜的效果，所以不建議體外蒜和這幾味中藥聯(lián)合使用。但是由于中藥種類繁多，不排除可能存在某種中藥和蒜聯(lián)合使用效果強(qiáng)于純蒜汁。還有體內(nèi)抑菌牽扯代謝問題和聯(lián)合調(diào)理作用，那么就有可能體外抑菌弱的藥物在體內(nèi)抑菌效果還會(huì)很好，所以這些問題還需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]陳澤慧,田應(yīng)彪,李丹丹,等.五味子、石榴皮等中藥對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌體外的抑菌作用[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2011,15(31):1248-1251.

[2]冷會(huì)勇,閆志勇,王斌,等.十八種中藥制劑對(duì)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌體外抗菌作用的研究[J].中外醫(yī)療,2010，17:132.

[3]張景皓,肖明霞,季萍.黃芩、黃連、五味子對(duì)5種多重耐藥菌抑菌作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].新疆醫(yī)學(xué),2012,42:4-7.

[4]何祖光,柳枝,袁曉兵,等.大蒜提取液臨床體外抗鮑曼不動(dòng)桿菌的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2009，5(27):503-504.

(收稿2015-09-27;修回2015-10-29)

【中圖分類號(hào)】R285

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.02.046

通訊作者▲

△陜西中醫(yī)藥大學(xué)病原微生物及檢驗(yàn)學(xué)教研室 (咸陽 712046 )

·方藥縱橫·