羅　書　李燕舞　廣州中醫(yī)藥大學(xué)脾胃研究所(廣州 510405)

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補中益氣丸對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的行為研究*

羅書李燕舞?廣州中醫(yī)藥大學(xué)脾胃研究所(廣州 510405)

摘要目的：研究補中益氣丸對急性潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis，UC)小鼠行為影響，評估補中益氣湯對小鼠急性UC的預(yù)防作用。方法：將40只C57BL/6小鼠隨機分為空白組、模型組、陽性對照組，中藥組，每組10只。除正常組外，其余各組予葡聚糖硫酸鈉(Dextran sulfate sodium salt，DSS)造模?？瞻捉M，模型組每日給予蒸餾水；陽性對照組每日給予柳氮磺砒啶(SASP) ；中藥組給予補中益氣丸，連續(xù)給藥7d，期間觀察小鼠行為變化，之后取樣觀察。結(jié)果：與空白組對比，模型組小鼠出現(xiàn)便血、精神萎靡、體質(zhì)量下降等癥狀；與模型組對比，藥物干預(yù)組小鼠上述癥狀不同程度改善。與空白組小鼠對比，模型組小鼠體質(zhì)量明顯下降(P<0.05)，結(jié)腸長度明顯縮短(P<0.05)，結(jié)腸質(zhì)量明顯增加(P<0.05)；與模型組對比，藥物干預(yù)組小鼠體質(zhì)量無明顯差異(P>0.05)，結(jié)腸長度縮短明顯緩解(P<0.05)，結(jié)腸質(zhì)量無明顯差異(P>0.05)。結(jié)論：補中益氣丸對DSS誘導(dǎo)的小鼠急性UC有一定預(yù)防作用。

主題詞結(jié)腸炎,潰瘍性/中醫(yī)藥療法 補中益氣丸/治療應(yīng)用動物，實驗小鼠

UC是內(nèi)科較常見的難治性疾病，腸粘膜在炎癥反復(fù)發(fā)作的慢性過程中不斷破壞和修復(fù)，導(dǎo)致腸道正常結(jié)構(gòu)破壞，雖然UC的發(fā)病機理至今尚未完全明了，但是越來越多的證據(jù)顯示UC的發(fā)生是多因素共同作用的結(jié)果[1]。DSS誘導(dǎo)小鼠UC模型癥狀與人類UC臨床表現(xiàn)相似。DSS誘導(dǎo)的小鼠急性UC模型小鼠體質(zhì)量會逐漸下降，并伴隨腹瀉、縮背、食欲精神差、毛色光澤變差、粘液血便，甚至出現(xiàn)死亡的臨床表現(xiàn)[2]。中藥復(fù)方補中益氣丸是臨床治療UC的驗方，本實驗通過DSS誘導(dǎo)小鼠急性UC模型，動態(tài)觀察小鼠行為變化，從而評估補中益氣丸對小鼠急性UC的預(yù)防作用。

1 材料與方法1.1 實驗動物 C57BL/6小鼠，雌性，體質(zhì)量18～22g，由廣東省實驗動物中心提供(動物合格證編號：44007200014518)。

1.2 主要試劑 DSS(M.W.36000-50000，廣州市紅爍林生物科技有限公司)；SASP(上海三維制藥有限公司，批號：20130915)；補中益氣丸(北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，批號：Z11020244)。

1.3 分組與造模將40只C57BL/6小鼠隨機分為空白組、模型組、陽性藥物對照組，中藥組，每組10只。除空白組外，其余各組予3% DSS水溶液代替飲用水1周，隔天更換新鮮DSS水溶液。

1.4 給藥 研磨SASP片，補中益氣丸，制成溶液。于造模同時給藥，連續(xù)7d。空白組，模型組每日給予蒸餾水0.01mL·(g·d)-1；陽性藥物對照組每日給予柳氮磺砒啶, 1.33g/(kg·d)-1，按成人等效劑量換算；中藥組每日分別給予補中益氣丸,6g/(kg·d)-1，按成人等效劑量換算。

1.5觀察小鼠情況體質(zhì)量、飲食量、大便性狀、便血率。

1.6取樣頸椎脫位處死小鼠，剪取結(jié)腸，測量長度，清理內(nèi)容物，用預(yù)冷生理鹽水清洗，濾紙除去多余水分后稱重。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)用mean±SD表示，采用SPSS17.0軟件，輸入數(shù)據(jù)并進行獨立樣本t檢驗和單因素方差分析，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果2.1 一般體征 模型組小鼠于造模第3天出現(xiàn)血便，稀便，第5天后精神萎靡，無力，毛色黯啞，體質(zhì)量明顯下降，飲食明顯減少，解剖小鼠，部分見臟器黏連，結(jié)腸壁腫脹，未見明顯潰瘍灶。陽性對照組小鼠于造模第3天出現(xiàn)血便，稀便，第4天后精神萎靡，無力，毛色黯啞，體質(zhì)量下降，解剖小鼠未見臟器黏連，未見明顯潰瘍灶。中藥組小鼠于造模第3天出現(xiàn)血便，稀便，第4天后精神萎靡，無力，毛色黯啞，體質(zhì)量下降，解剖小鼠未見臟器黏連，未見明顯潰瘍灶。

2.2小鼠體質(zhì)量結(jié)果 統(tǒng)計顯示(表1) 與空白組對比，模型組小鼠體質(zhì)量明顯下降(P<0.05)；與模型組對比，陽性對照組、中藥組體質(zhì)量無明顯差異(P>0.05)。

表1　小鼠體質(zhì)量

注：?P<0.05，與正常組比較；▲P<0.05與模型組比較

2.3小鼠結(jié)腸長度結(jié)果 統(tǒng)計顯示(表2) 與空白組對比，模型組小鼠結(jié)腸長度明顯下降(P<0.05)，提示小鼠結(jié)腸出現(xiàn)病理性改變，充血水腫，腸上皮細胞脫落，形成潰瘍，導(dǎo)致腸壁皺縮。與模型組對比，陽性對照組、中藥組小鼠結(jié)腸長度縮短程度明顯緩解(P<0.05)。

2.4 小鼠結(jié)腸重量結(jié)果 統(tǒng)計顯示(表3) 與空白組對比，模型組小鼠結(jié)腸質(zhì)量增加(P<0.05)；與模型組對比，用陽性對照組、中藥組小鼠結(jié)腸質(zhì)量無明顯差異(P>0.05)，但有下降的趨勢。

表2 　小鼠結(jié)腸長度

注：?P<0.05，與正常組比較；▲P<0.05與模型組比較

表3　小鼠結(jié)腸質(zhì)量

注：?P<0.05，與正常組比較；▲P<0.05與模型組比較

3討論UC是一種發(fā)病機制并不是很明確的結(jié)腸和直腸慢性非特異性炎癥性疾病，發(fā)病率也在逐年上升[3]。一般情況下,潰瘍性結(jié)腸炎在臨床上往往伴隨著慢性粘液便、血便、腹痛,經(jīng)常會反復(fù)性發(fā)作，有時會伴有不同程度的全身癥狀，還有可能發(fā)生癌變[4]。

中醫(yī)認為UC屬于“痢疾”、“泄瀉”等范疇，張錫純言：“有痢久而清陽下陷者，其人或間作寒熱，或覺胸中短氣，當于治痢藥中，加生黃耆、柴胡以升清陽?！?UC多因外感邪毒，內(nèi)傷飲食而損傷脾胃，病位在腸，脾虛為根[5]。補中益氣丸是健脾益氣的經(jīng)典方，由黃芪、白術(shù)、陳皮、升麻、柴胡、人參、甘草、當歸、生姜、大棗組成，臨床將之用于UC取得較好療效。

桑力軒等[6]認為以DSS誘導(dǎo)小鼠UC逐漸出現(xiàn)腹瀉、粘液血便、體質(zhì)量減輕、倦怠懶動、毛色干枯等表現(xiàn)，是安全系數(shù)較高的造模方法。本研究用藥組能在不同程度上減輕小鼠急性UC的癥狀。在體質(zhì)量與結(jié)腸重量方面，中藥干預(yù)組雖與模型組未有明顯差異，但卻有改善的趨勢。結(jié)腸長度方面，中藥干預(yù)組與模型組有明顯差異，表明，補中益氣丸行預(yù)防干預(yù)可抑制腸上皮細胞的脫落，減少潰瘍的發(fā)生，減輕腸壁皺縮的程度。

參考文獻

[1]高三明. 臭氧聯(lián)合培菲康治療潰瘍性結(jié)腸炎臨床療效及對細胞因子IL-6、TGF-1水平的影響[J]. 陜西醫(yī)學(xué)雜志,2013,42(7):895-897.

[2]農(nóng)輝,黃雪. 葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型的研究進展[J]. 世界華人消化雜志,2014,22:3245-3250.

[3]陸淵,費建平. 潰瘍性結(jié)腸炎中醫(yī)治療研究[J]. 長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2012,06:1036-1038.

[4]李龍驤. 潰瘍性結(jié)腸炎中醫(yī)治療研究進展[J]. 深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志,2014,06:195-196.

[5]姚柳伊,舒勁. 黃芪在潰瘍性結(jié)腸炎治療中的運用[J]. 中醫(yī)研究,2013,10:51-53.

[6]桑力軒,高楠,常冰,等. DSS、TNBS、OXZ誘導(dǎo)結(jié)腸炎動物模型的對比[J]. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2013,12:1221-1224.

(收稿2015-10-14;修回2015-11-09)

【中圖分類號】R574.62

【文獻標識碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.02.048

通訊作者?

* 國家自然科學(xué)基金資助項目(81202627)