杜楚玲， 夏 喜， 黃英紅， 張榮華， 楊 麗， 蔡 宇（暨南大學(xué)藥學(xué)院，廣東廣州510632）

?

滋腎陰方對(duì)去勢(shì)老齡鼠的預(yù)防和治療作用

杜楚玲， 夏 喜， 黃英紅， 張榮華， 楊 麗， 蔡 宇*
（暨南大學(xué)藥學(xué)院，廣東廣州510632）

摘要：目的 探索滋腎陰方對(duì)骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防和治療作用。方法 將100只老齡鼠按體質(zhì)量隨機(jī)均分為空白組、模型組、陽(yáng)性組（預(yù)防組和治療組）、給藥組（預(yù)防低、中、高劑量組和治療低、中、高劑量組），選擇去勢(shì)雌性大鼠動(dòng)物模型作為大鼠形成骨質(zhì)疏松的模型，預(yù)防組術(shù)后第7天給藥120 d，治療組術(shù)后第90天給藥30 d，給藥結(jié)束后測(cè)定血清生化指標(biāo)。取股骨制作病理切片，觀察骨形態(tài)學(xué)變化和進(jìn)行骨計(jì)量學(xué)分析。結(jié)果 與模型組對(duì)比，給藥組血清鈣（Ca）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TIACP）、骨堿性磷酸酶（BALP）、骨保護(hù)素（OPG）含有量顯著升高，血清磷（P）、骨鈣素（OCN）含有量顯著降低，股骨切片骨小梁平均寬度（Tb.Th）和骨小梁面積百分比（Tb.Ar）數(shù)值顯著升高，骨小梁分離度（Tb.Sp）數(shù)值顯著降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）；給藥組骨小梁變粗、變密，骨髓腔較小。結(jié)論 滋腎陰方可以改變?nèi)?shì)老齡鼠的骨代謝、骨形態(tài)從而達(dá)到預(yù)防和治療的作用。

關(guān)鍵詞：滋腎陰方；骨質(zhì)疏松；骨代謝；骨形態(tài)

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥是一種與年老女性密切相關(guān)的疾病，在女性絕經(jīng)后卵巢功能衰退，雌激素水平下降，體內(nèi)不同生化指標(biāo)發(fā)生改變，骨轉(zhuǎn)換加速，骨吸收大于骨形成，骨重建失衡引起骨量減少所導(dǎo)致，表現(xiàn)為骨顯微結(jié)構(gòu)異常，骨脆性增加且易發(fā)生骨折。從中醫(yī)理論，絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥屬“骨瘓”范疇，據(jù)《黃帝內(nèi)經(jīng)》記載，女子七七，“任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通”，進(jìn)而“腎臟衰，形體皆極”。腎為先天之本，主骨生髓，腎精虧虛則骨髓生化泛源，骨骼失養(yǎng)，骨礦含有量下降，骨密度降低，而發(fā)生骨質(zhì)疏松癥［1］。中醫(yī)藥臨床健骨多從滋陰補(bǔ)腎治療，本實(shí)驗(yàn)通過采用卵巢去勢(shì)手術(shù)誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松模型，探究由熟地、杜仲、黨參、山茱萸、制首烏、枸杞、山藥等中藥制備而成的滋腎陰劑對(duì)骨質(zhì)疏松預(yù)防和治療作用及可能的機(jī)制。

1 材料

1.1 藥材及試劑 滋腎陰方由熟地（15 g）、黨參（15 g）、山茱萸（15 g）、杜仲（15 g）、山藥（12 g）、制首烏（12 g）、枸杞（12 g）等藥材組成，提取工藝為浸泡1 h，提取2次，時(shí)間為2.5、2 h，料液比為1∶10、1∶8，所得提取液煎煮濃縮水提濃縮制成滋腎陰煎劑，生藥量3 g/mL，經(jīng)廣東省中醫(yī)院黃志海主任藥師鑒定為正品；配置方法為用蒸餾水把滋腎陰煎劑配制為高、中、低劑量，質(zhì)量濃度分別為1、0.5、0.25 g/mL，全部藥材均購(gòu)自廣州市二天堂大藥房；益腎補(bǔ)骨液（修正藥業(yè)集團(tuán)通化市制藥有限公司，批號(hào)130801）；血清鈣（Ca）測(cè)定試劑盒、血清磷（P）測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)20141127）；大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶（TIACP）、骨堿性磷酸酶（BALP）、骨鈣素（OCN）、骨保護(hù)素（OPG）酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒（上海拜力生物科技有限公司，批號(hào)201312）。

1.2 動(dòng)物 24周齡SD雌性大鼠100只（SPF級(jí)），體質(zhì)量（405±32）g，由中山大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)SYXK（粵）2011-0029。

1.3 儀器 SIGMA 1-15K冷凍離心機(jī)（德國(guó)Sigma實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)股份有限公司）；恒溫CO2培養(yǎng)箱（美國(guó)賽默飛公司）；Synergy H4全功能酶標(biāo)儀（美國(guó)伯騰儀器有限公司）；紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；OLYMPUS CKX41倒置相差顯微鏡（日本奧林巴斯株式會(huì)社）；OPTPro 3000圖像分析系統(tǒng)（重慶奧特光學(xué)儀器有限責(zé)任公司）。

2 方法

2.1 建立模型 選擇24周齡雌性大鼠，用20 g/L戊巴比妥鈉腹腔注射進(jìn)行麻醉，腹部剔除毛發(fā)，碘伏消毒，正中切開腹部皮膚，鈍性分離腹肌、腹膜后進(jìn)腹，卵巢于腎臟下方，呈粉紅色、桑椹狀，分別用絲線結(jié)扎將之摘除徹底，縫合切口［2］。術(shù)后注射十萬U青霉素，術(shù)后1周拆線。

2.2 分組與給藥 將100只SD大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為10組，即空白組、模型組、陽(yáng)性組（預(yù)防組和治療組）、給藥組（預(yù)防低、中、高劑量組和治療低、中、高劑量組）［3］。其中給藥預(yù)防組術(shù)后第7天灌胃給藥120 d，治療組術(shù)后第90天灌胃給藥30 d?？瞻捉M和模型組分別給予1.0 mL/kg體質(zhì)量蒸餾水，陽(yáng)性組給予益腎補(bǔ)骨液4.05 m L/kg，給藥組給予滋腎陰煎劑，低、中、高劑量分別為1.0、2.0、4.0 g/kg，每日灌胃給藥1次。

2.3 樣本收集與處理 實(shí)驗(yàn)大鼠于給藥期結(jié)束后，20 g/L戊巴比妥鈉麻醉，按0.1 mL/100 g體質(zhì)量進(jìn)行腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血約5 mL，于低溫離心機(jī)中3 000 r/min迅速離心5 min，取上層血清-20℃保存?zhèn)溆?；剝離肌肉，取出股骨，去除軟組織后固定于福爾馬林中，備用。

2.4 血清生化指標(biāo)檢測(cè) 依照購(gòu)買試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血清Ca含有量采用微板法測(cè)定，血清P含有量采用磷鉬酸法測(cè)定，血清TIACP、BALP、OCN及OPG采用ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，用酶標(biāo)儀和紫外讀取吸光度（D）值，記錄數(shù)值，根據(jù)試劑盒說明進(jìn)行計(jì)算。

2.5 骨組織形態(tài)學(xué)及計(jì)量學(xué)觀察 股骨固定于福爾馬林中24 h后拿出，15%乙二胺四乙酸（EDTA）脫鈣處理，石蠟切片，HE染色，制作股骨頭切片，光學(xué)顯微鏡下觀察股骨組織形態(tài)變化，觀察骨小梁結(jié)構(gòu)；每張切片隨機(jī)選取3個(gè)視野（×40），取平均值，采用OPTPro 3000圖像分析系統(tǒng)對(duì)其進(jìn)行骨組織計(jì)量學(xué)評(píng)價(jià)：骨小梁平均寬度（Tb.Th）、骨小梁面積百分比（Tb.Ar）及骨小梁分離度（Tb.Sp）［4］。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0及EXCEL 2007軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以（±s）表示，采用單因素方差分析對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，P＜0.05代表有顯著性差異，P＜0.01代表有極顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 血清Ca、P水平變化 與模型組對(duì)比，滋腎陰方各劑量組Ca含有量升高，且預(yù)防低和治療低劑量組有顯著性差異（P＜0.05），預(yù)防中、高和治療中、高劑量組有極顯著性差異（P＜0.01）；滋腎陰方各劑量組P含有量降低，且治療低、高有顯著性差異（P＜0.05），預(yù)防高和治療中劑量組有極顯著性差異（P＜0.01）；與模型組含有量有顯著性差異基礎(chǔ)上，與陽(yáng)性組對(duì)比，預(yù)防和治療組Ca含有量無顯著性差異，預(yù)防高劑量組P和治療各劑量組P含有量無顯著性差異（P＞0.05），結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠血清Ca、P水平比較（±s，n＝10）

表1 各組大鼠血清Ca、P水平比較（±s，n＝10）

注：與空白組比較，※※P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別　　劑量/ （g·kg-1）Ca/ （mmo1·L-1）P/ （mmo1·L-1）空白組-　 1.25±0.18　 0.86±0.21模型組　-　 1.01±0.34※※1.45±0.68※※預(yù)防陽(yáng)性組　4.5 mL/kg 1.22±0.14**0.92±0.15**預(yù)防低劑量組　1.0　 1.16±0.07*　1.29±0.79預(yù)防中劑量組　2.0　 1.20±0.04**　1.26±0.30預(yù)防高劑量組　4.0　 1.29±0.12**　0.92±0.15**治療陽(yáng)性組　4.5 mL/kg 1.22±0.16**0.98±0.24**治療低劑量組　1.0　 1.16±0.05*　1.01±0.34*治療中劑量組　2.0　 1.26±0.14**　0.90±0.09**治療高劑量組　4.0　 1.29±0.11**　1.02±0.17*

3.2 血清TIACP、BALP、OCN、OPG水平變化 與模型組對(duì)比，滋腎陰方各劑量組TIACP均升高，且預(yù)防低、中劑量組有顯著性差異（P＜0.05），預(yù)防高和治療中、高劑量組有極顯著性差異（P＜0.01）；滋腎陰方各劑量組BALP均升高，且預(yù)防高、治療中劑量組有極顯著性差異（P＜0.01）；滋腎陰方各劑量組OCN均降低，且預(yù)防低、高、治療高劑量組有顯著性差異（P＜0.05），預(yù)防中、治療低劑量組有極顯著差異（P＜0.01）；預(yù)防各劑量和治療中、高劑量組OPG均升高，且預(yù)防中、高劑量組有顯著性差異（P＜0.05），治療高劑量組有極顯著性差異（P＜0.01）。

與模型組含有量有顯著性差異基礎(chǔ)上，與陽(yáng)性組對(duì)比，預(yù)防低、中劑量組TIACP無顯著性差異；預(yù)防高和治療中劑量組BALP無顯著性差異。預(yù)防各劑量組、治療低、高劑量組OCN無顯著性差異；預(yù)防高劑量組OPG無顯著性差異（P＞0.05），具體見表2。

3.3 骨組織計(jì)量學(xué)變化 與模型組對(duì)比，滋腎陰方各劑量組Tb.Th均升高，且預(yù)防低和治療高劑量組有極顯著差異（P＜0.01），治療中劑量組有顯著性差異（P＜0.05）；滋腎陰方各劑量組Tb.Ar均升高，且預(yù)防低、中和治療低、中劑量組有極顯著性差異（P＜0.01），預(yù)防高、治療高組有顯著性差異（P＜0.05）；滋腎陰方各劑量Tb.Sp均降低，且預(yù)防各劑量組和治療中劑量有極顯著性差異（P＜0.01），治療低、高劑量組有顯著性差異（P＜0.05）。

表2 各組大鼠血清TRACP、BALP、0 CN、0 PG水平比較（±s，n＝10）

表2 各組大鼠血清TRACP、BALP、0 CN、0 PG水平比較（±s，n＝10）

注：與空白組比較，※P＜0.05，※※P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與陽(yáng)性組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別　　劑量/（g·kg-1）　TIACP/（U·L-1）　BALP/（ng·mL-1）　OCN/（ng·m L-1）　OPG/（ng·mL-1）空白組2.53±0.46　25.10±5.78　9.27±0.35　1.17±0.17模型組　-　3.12±0.30※　19.99±5.02※※　9.85±0.87　1.53±0.25※※預(yù)防陽(yáng)性組　4.5 mL/kg　3.58±0.70*　23.65±1.99　8.56±1.97　1.86±0.07**預(yù)防低劑量組　1.0　3.84±0.42*　23.03±3.83　8.13±2.35*　1.73±0.23預(yù)防中劑量組　2.0　3.77±0.65*　23.27±0.50　7.60±1.35**　1.73±0.21*#預(yù)防高劑量組　4.0　4.31±0.74**#　25.79±3.75**　8.26±2.35*　1.76±0.16*治療陽(yáng)性組　4.5 m L/kg　3.48±0.55　24.49±3.52*　8.15±1.27*　1.72±0.18治療低劑量組　1.0　3.48±0.75　20.17±2.78　7.14±1.77**　1.40±0.37治療中劑量組　2.0　3.91±0.33**#　27.80±7.33**　8.81±1.66　1.60±0.16治療高劑量組　4.0　4.48±1.13**##　23.54±5.03　7.22±1.34*　1.93±0.34**#-

表3 各組大鼠骨組織計(jì)量學(xué)比較（±s，n＝10）

表3 各組大鼠骨組織計(jì)量學(xué)比較（±s，n＝10）

注：與空白組比較，※P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與陽(yáng)性組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別　　劑量/（g·kg-1）　Tb.Th/μm　Tb.Ar/%　Tb.Sp/μm空白組88.80±2.72　53.92±2.52　272.57±39.95模型組　-　83.45±3.08※　48.83±8.23※　322.04±58.11※預(yù)防陽(yáng)性組　4.5 mL/kg　93.61±4.78**　54.54±6.36*　215.83±134.7*預(yù)防低劑量組　1.0　94.65±8.63**　58.49±5.62**　235.20±38.98**預(yù)防中劑量組　2.0　84.05±4.10　56.51±4.52**　236.73±55.48**預(yù)防高劑量組　4.0　84.89±6.76　55.66±7.16*　255.02±56.31**治療陽(yáng)性組　4.5 mL/kg　94.39±6.70**　54.99±1.04*　197.33±38.50**治療低劑量組　1.0　85.70±13.36　60.75±5.75**　256.48±84.97*##治療中劑量組　2.0　101.19±22.18*　55.09±6.78**　224.44±59.37**#治療高劑量組　4.0　91.62±4.43**　57.20±9.38*　237.29±88.05*#-

與模型組含有量有顯著性差異基礎(chǔ)上，與陽(yáng)性組對(duì)比，預(yù)防低和治療中、高劑量組Tb.Th無顯著性差異，預(yù)防和治療組Tb.Ar無顯著性差異，預(yù)防組Tb.Sp無顯著性差異（P均＞0.05），具體見表3。

3.4 骨組織形態(tài)學(xué)觀察 在100倍光鏡下拍照觀察大鼠股骨切片組織形態(tài)學(xué)變化，見圖1?？瞻捉M骨質(zhì)較厚且骨基質(zhì)沉積均勻，骨小梁排列緊密，表面可見破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞及骨細(xì)胞。模型組明顯骨小梁變薄、變細(xì)、穿孔甚至斷裂坍塌，骨基質(zhì)沉積明顯減小，髓腔明顯變大，破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞及骨細(xì)胞減少。陽(yáng)性組、預(yù)防組和治療組骨小梁排列都較緊密，明顯增厚，骨小梁變粗、變密，骨基質(zhì)沉積比較均勻，成骨細(xì)胞活躍，骨細(xì)胞密度增大，骨髓腔較小。

4 討論

破骨細(xì)胞作用時(shí)，Ca和P從骨質(zhì)中釋放出來稱為骨吸收，Ca和P沉著于類骨組織中形成新骨稱為骨形成，舊骨吸收和新骨形成構(gòu)成骨重建［5］。在正常情況下，血Ca和骨Ca處于一個(gè)平衡的狀態(tài)，當(dāng)骨吸收大于骨形成時(shí)，血Ca含有量降低，骨Ca就會(huì)釋放以維持血Ca含有量，骨Ca減少，出現(xiàn)骨質(zhì)疏松癥［6］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)比模型組，給藥組血清Ca含有量較高，這有助于維持血液中血Ca含有量的穩(wěn)定，降低骨Ca向血液中轉(zhuǎn)移，降低骨吸收；給藥組血清P含有量降低，這是因?yàn)镃a吸收主要依賴于Ca、P之間的比例，如果P含有量過高會(huì)與Ca2＋形成不溶性磷酸鈣，阻礙Ca2＋吸收，加劇骨質(zhì)疏松，在維持基本代謝的基礎(chǔ)上低P更利于Ca的吸收。這提示我們?cè)谥委熀椭委煿琴|(zhì)疏松時(shí)，必須增加鈣的攝入，控制磷的攝入。

破骨細(xì)胞是骨吸收的主要功能細(xì)胞，TIACP由破骨細(xì)胞合成并直接分泌入血，是破骨細(xì)胞的主要標(biāo)志［7］。成骨細(xì)胞是骨形成過程中重要的功能細(xì)胞，BALP由成骨細(xì)胞合成分泌，是成骨細(xì)胞的標(biāo)志，為反映骨形成的主要生化指標(biāo)［8-9］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠去卵巢后，TIACP升高，BALP明顯降低，表明破骨細(xì)胞活性升高，骨吸收增強(qiáng)，成骨細(xì)胞活性下降，骨形成下降，骨吸收大于骨形成，造成骨質(zhì)疏松，骨質(zhì)疏松模型成功。給藥后TIACP出現(xiàn)不同程度升高，BALP也出現(xiàn)不同程度升高，所以猜測(cè)給藥后，由成骨細(xì)胞主導(dǎo)的骨形成和破骨細(xì)胞主導(dǎo)的骨吸收在加快重建，成骨細(xì)胞活性增加，骨形成加強(qiáng)，骨質(zhì)代謝加強(qiáng)。OCN由成骨細(xì)胞合成并分泌，OCN可以反映成骨細(xì)胞活性和骨轉(zhuǎn)換水平，絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥屬于高轉(zhuǎn)換型，OCN明顯升高［10］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠去卵巢后，OCN有所升高，骨轉(zhuǎn)換率升高，容易造成骨質(zhì)疏松；給藥后，不同劑量組OCN都明顯地降低，骨轉(zhuǎn)換率下降。OPG是一種新發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子受體超家族成員，不僅可以抑制破骨細(xì)胞生成，還可以抑制破骨細(xì)胞主導(dǎo)的骨吸收。重組的OPG可以逆轉(zhuǎn)嚴(yán)重骨質(zhì)疏松［11-12］，表明大鼠去卵巢后OPG升高，其機(jī)制可能是由于雌激素突然降低，使得骨重建加強(qiáng)，骨吸收和骨形成增加，OPG過性升高來應(yīng)激調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的募集和形成，給藥后不同組別OPG升高，推測(cè)是由于藥物的作用，刺激OPG升高，以抑制破骨細(xì)胞生成，抑制抗酒石酸酸性磷酸酶生成，抑制骨吸收，降低骨質(zhì)疏松的水平。

圖1 大鼠股骨切片組織形態(tài)學(xué)變化（×100）

骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)是近年來研究骨質(zhì)疏松的一門體視學(xué)技術(shù)，可以直觀定量觀察和研究骨組織形態(tài)及結(jié)構(gòu)，對(duì)骨組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行定量分析的重要手段［13］。從組織學(xué)上，對(duì)骨微細(xì)結(jié)構(gòu)、骨質(zhì)特征等方面進(jìn)行研究。參考文獻(xiàn)研究表明骨質(zhì)疏松表現(xiàn)為骨小梁數(shù)量減少，骨體積分?jǐn)?shù)百分比降低，間距增加等現(xiàn)象［14］。本實(shí)驗(yàn)切片形態(tài)和計(jì)量數(shù)據(jù)顯示：空白組骨質(zhì)較厚、骨基質(zhì)沉積均勻，模型組明顯骨小梁變薄、變細(xì)、穿孔甚至斷裂坍塌，骨體積分?jǐn)?shù)百分比降低，骨基質(zhì)沉積明顯減小，髓腔明顯變大。陽(yáng)性組、預(yù)防組和治療組骨小梁排列都較緊密，明顯增厚，骨小梁變粗、變密，骨體積分?jǐn)?shù)百分比升高，骨基質(zhì)沉積比較均勻，骨髓腔較小。從形態(tài)學(xué)上，可以清楚地看出給藥骨質(zhì)增多、增厚，表明滋腎陰方能使骨骼健全、粗壯，對(duì)于預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松有非常顯著的效果。

中醫(yī)理論認(rèn)為，骨骼依賴于骨髓的滋養(yǎng)，骨髓又為腎精氣化所生，腎精的的盛衰決定骨骼生長(zhǎng)發(fā)育的強(qiáng)弱［15］。本方由熟地、黨參、山茱萸、杜仲、山藥、制首烏、枸杞等藥材組成，具有滋陰補(bǔ)腎的功效，通過對(duì)去勢(shì)老齡鼠骨代謝及骨形態(tài)影響的研究，發(fā)現(xiàn)其預(yù)防骨質(zhì)疏松和治療骨質(zhì)疏松作用顯著，這為進(jìn)一步臨床應(yīng)用提供了基礎(chǔ)，但其具體作用機(jī)制尚不完全明確，有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 謝 林，郭振球，姚共和.絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥中醫(yī)辨證分析［J］.中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1999，14（3）：35-39.

［2］ 周 麗，鄧偉民.去勢(shì)雌性大鼠動(dòng)物模型在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥中的應(yīng)用［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2008，12（7）：1323-1326.

［3］ 李高峰，鄭衛(wèi)東，張季鎧，等.防風(fēng)多糖對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠的作用及機(jī)制研究［J］.中成藥，2014，36（11）：2399-2401.

［4］ 李 義，張建中，宋 英.姜黃素對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松模型鼠的機(jī)制研究［J］.中成藥，2014，35（7）：1359-1362.

［5］ 湯淑媛.骨康對(duì)去勢(shì)大鼠鈣磷代謝影響的研究［D］.廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2001.

［6］ Hendy GN，Hruska K A，Mathew S，et al.New insights into minera1and ske1eta1regu1ation by active formsof vitamin D［J］. Kidney Int，2006，69（2）：218-223.

［7］ 董 偉，馮曉潔，梁永強(qiáng)，等.雙膦酸鹽對(duì)破骨細(xì)胞分化及抗酒石酸酸性磷酸酶的影響［J］.中國(guó)組織工程研究，2014，18（38）：6069-6073.

［8］ 蒲畫華.補(bǔ)腎中藥與阿法骨化醇聯(lián)合應(yīng)用對(duì)去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松的防治作用［D］.上海：復(fù)旦大學(xué)，2010.

［9］ 于海濤，李 慧，章 琦，等.狗脊炮制品中促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖分化成分的篩選［J］.中成藥，2012，34（6）：1139-1142.

［10］ 魏雙平，李 蒙，李瑞玉，等.傳統(tǒng)中藥對(duì)成骨細(xì)胞及骨鈣素合成的影響［J］.中國(guó)組織工程研究，2013，17（11）：2083-2090.

［11］ 王小斌，單其俊，馬根山.骨保護(hù)素的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)臨床康復(fù)，2004，8（20）：4066-4067.

［12］ 吳亞東，史曉林，晁振宇.福善美對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者血清骨保護(hù)素及骨密度的影響［J］.中醫(yī)正骨，2011，23 （6）：16-19.

［13］ 吳建斌.不同填充材料及脂肪源干細(xì)胞移植對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠的影響［D］.廣州：南方醫(yī)科大學(xué)，2013.

［14］ EstaiM A，Suhaimi F，Soe1aiman IN，et al.Bone histomorphometric study ofyoung rats fo11owing oestrogen deficiency［J］. Afr JBiotechnol，2011，56（10）：12064-12070.

［15］ 王少君，李 艷，劉 紅，等.中醫(yī)理論對(duì)骨質(zhì)疏松癥發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)［J］.世界中醫(yī)藥，2013，8（9）：1044-1048.

*通信作者：蔡 宇（1972—），男，教授，中藥制劑新工藝及新藥開發(fā)研究。Te1：18826237541，E-mai1：caiyu8@sohu.com

作者簡(jiǎn)介：杜楚玲（1990—），女，碩士，從事中藥制劑研究。Te1：13713322395，E-mai1：382169183@qq.com

收稿日期：2015-04-24

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.03.043

中圖分類號(hào)：I 285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1001-1528（2016）03-0676-05