劉陽陽 張玲玲 倪宏波 聞曉波

牛病毒性呼吸道疾病混合感染的病例診斷報(bào)告

劉陽陽 張玲玲 倪宏波 聞曉波*

（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江大慶 163319）

牛呼吸道疾病綜合征是嚴(yán)重危害全球養(yǎng)牛業(yè)的一類重要疾病，具有高發(fā)病率和高死亡率的特點(diǎn)。本文對(duì)近日哈爾濱某牛場(chǎng)新引進(jìn)牛只，幾天后患病，采集鼻拭子，提取總DNA或RNA，進(jìn)行牛傳染性鼻氣管炎病毒、牛副流感3型病毒、牛病毒性腹瀉病毒和牛腺病毒的PCR或RT-PCR檢測(cè)，確診病牛為IBRV、BPIV和BVDV混合感染，情況較為嚴(yán)重，建議及時(shí)做好相關(guān)防治措施。

牛呼吸道疾病綜合征；PCR；IBRV；BPIV；BVDV

牛呼吸道疾病綜合征（Bovine respiratory disease complex，BRDC）是嚴(yán)重危害養(yǎng)牛業(yè)的一類重要疾病，臨床癥狀多表現(xiàn)為食欲下降、精神沉郁、高熱、呼吸困難和咳嗽等癥狀，牛自身免疫力、應(yīng)激強(qiáng)度、飼養(yǎng)管理也會(huì)影響疾病的嚴(yán)重程度。BRDC主要危害犢牛、育肥牛和奶牛，發(fā)病率和死亡率高，發(fā)生疾病后往往會(huì)給養(yǎng)殖戶造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。BRDC的病因比較復(fù)雜，常發(fā)生于新引進(jìn)的牛群，存在病毒、細(xì)菌和支原體等多種傳染性病原混合感染［1，2］，其中病毒是主要的病原。目前分離到的病毒主要有牛傳染性鼻氣管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV）、牛副流感3型病毒（Bovine parainfluenza virus type 3，BPIV-3）、牛病毒性腹瀉病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛呼吸道合胞體病毒（Bovine respiratory syncytial virus，BRSV）和牛腺病毒（Bovine adenovirus，BAV）等［3，4］。這些病毒能夠損壞牛呼吸道上皮細(xì)胞，導(dǎo)致牛肺炎、支氣管炎等疾病，而且還可以抑制牛的免疫系統(tǒng)，從而更易繼發(fā)其他病原感染，危害牛體健康，進(jìn)一步推升發(fā)病率和死亡率，從而加重經(jīng)濟(jì)損失［5］。此外，潮濕陰冷的環(huán)境、脫水缺氧的狀態(tài)、惡劣的天氣及污濁的空氣都有可能誘發(fā)BRDC的產(chǎn)生［6］，因此要注意改善牛舍環(huán)境，注意防寒保暖。

IBRV是引起牛急性、熱性、接觸性鼻氣管炎的病原，是世界衛(wèi)生組織（WHO）列出的B類傳染病之一，其可感染牛呼吸、黏膜、神經(jīng)、生殖等多個(gè)系統(tǒng)，并造成牛免疫力下降，從而容易繼發(fā)其他感染，使病情加重，導(dǎo)致死亡率上升［7］；還能夠影響育肥牛的生長發(fā)育、奶牛的產(chǎn)奶量等，對(duì)養(yǎng)牛業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。

BPIV-3是BRDC的主要病原之一，能夠引起急性、接觸性的牛副流感性感冒，又稱“運(yùn)輸熱”。該病毒能侵害牛呼吸系統(tǒng)，引發(fā)上呼吸道黏膜發(fā)生卡他性炎癥，使免疫機(jī)能下降而易繼發(fā)細(xì)菌感染，導(dǎo)致肺炎產(chǎn)生，降低了牛的生產(chǎn)性能，孕畜感染可能會(huì)流產(chǎn)，治療成本和死亡率也升高。

BVDV也是BRDC的重要病原之一，能夠引起牛病毒性腹瀉-黏膜病，其感染還會(huì)抑制牛機(jī)體免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致疫苗免疫失敗，也容易繼發(fā)其他病原感染，造成嚴(yán)重的危害。懷孕期間的母牛感染BVDV可能發(fā)生死胎、流產(chǎn)等繁殖障礙并向外排毒、散毒，危害健康牛群，形成持續(xù)性感染［8］。臨床特征為黏膜發(fā)炎、糜爛、壞死和腹瀉。BVDV感染能引起黏膜病爆發(fā)，死亡率可達(dá)100%，因此要格外注意對(duì)此病的預(yù)防和控制。

本文對(duì)近日哈爾濱某牛場(chǎng)患BRDC牛群進(jìn)行病毒分離鑒定，確診為IBRV、BPIV-3和BVDV混合感染。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1病料、試劑

哈爾濱某牛場(chǎng)采集的病牛鼻腔棉拭子病料5份。反轉(zhuǎn)錄試劑盒購于Thermo公司；RNA提取試劑盒購于康為世紀(jì)公司；DNA提取試劑盒購于博凌科偉公司。

1.2引物設(shè)計(jì)

根據(jù)GenBank中已發(fā)表的IBRV、BPIV-3、BVDV、BAV基因序列，設(shè)計(jì)特異性鑒定引物。引物由華大基因科技有限公司合成。引物序列、基因名稱見表一。

1.3病毒的處理和核酸的提取

將病料用800μl滅菌后的PBS溶液浸潤，浸潤所得溶液按照博凌科偉公司的DNA提取試劑盒和康為世紀(jì)公司的RNA提取試劑盒的操作步驟，分別提取DNA和RNA。按照Thermo公司的反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明，將提取的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄獲取cDNA。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)對(duì)病料病毒DNA和RNA的提取及PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分析。IBRV、BPIV和BVDV檢測(cè)目的片段大小分別為423bp、333bp和265bp。結(jié)果如圖一所示，5份病料均檢出IBRV、BPIV-3和BVDV，確診為IBRV、BPIV-3和BVDV混合感染。

3 討論

近年來，隨著我國養(yǎng)牛業(yè)的快速發(fā)展，牛只的跨區(qū)域流動(dòng)更加頻繁，而疾病的傳播和運(yùn)輸應(yīng)激造成牛呼吸系統(tǒng)疾病也更加泛濫，給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大損失［9］。通過對(duì)近日哈爾濱某牛場(chǎng)新引進(jìn)牛只患病后采集鼻腔黏膜拭子，運(yùn)用PCR方法檢測(cè)出IBRV、BPIV-3和BVDV混合感染，病情比較嚴(yán)重，需要盡快采取相應(yīng)處理措施，預(yù)防感染本場(chǎng)原有牛群，對(duì)患病牛只進(jìn)行隔離和對(duì)癥治療。對(duì)于牛群呼吸道疾病的綜合防治，首先應(yīng)做好牛群引進(jìn)的管理工作，禁止從疫區(qū)和正在發(fā)病的地區(qū)引進(jìn)牛只，對(duì)引進(jìn)牛只進(jìn)行隔離觀察和檢測(cè)，做好必要的預(yù)防接種和驅(qū)蟲后再與健康牛群混群；其次要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，確保牛群擁有清潔、充足的飲用水，適當(dāng)補(bǔ)充維生素、礦物質(zhì)元素等營養(yǎng)，并確保飼料新鮮；再者要重視衛(wèi)生和疾病防控，做好通風(fēng)、清潔和定時(shí)消毒工作，避免牛群過于擁擠，及時(shí)發(fā)現(xiàn)患有呼吸系統(tǒng)疾病牛只以早隔離、早治療。

［1］ 馬春霞，李軍，覃勇，等.牛呼吸道疾病綜合征病例的病原分析［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2015，42（9）：2481-6.

［2］ 范穎，張繼瑜，周緒正，等.牛呼吸道疾病的病原學(xué)與防制研究進(jìn)展［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2013，40（1）：157-163.