張 雁

（酒泉市肅州區(qū)銀達(dá)鎮(zhèn)畜牧站，甘肅酒泉 735000）

淺談如何做好禽流感的檢測工作

張 雁

（酒泉市肅州區(qū)銀達(dá)鎮(zhèn)畜牧站，甘肅酒泉 735000）

已知的流感病毒分 A、B、C3 個(gè)血清型。A 型的為人畜（禽）共患，B、C 型僅對人致病。禽流感則是由 A 型禽流感病毒引起的傳染病，又稱真性雞瘟（歐洲雞瘟）。按流感病毒的致病性不同分為 3 類：高致病性毒株如 H5N1、中弱毒株如 H9N2和無毒株。雖然禽流感病毒血清型很多，分離毒株上千株，但有致病性的毒株占極少數(shù)，大多數(shù)為無毒株，只有高致病性禽流感病毒才對養(yǎng)禽業(yè)造成毀滅性的損失。

禽流感；抗體檢測；免疫

禽流感早期又稱真性雞瘟、歐洲雞瘟。近幾年，許多國家和地區(qū)相繼暴發(fā)本病。在病毒學(xué)上，禽流感病毒屬于正粘病毒科A型流行性感冒病毒屬。禽流感病毒根據(jù)血凝素（HA）分為16個(gè)亞型（分別為H1-H16）；根據(jù)神經(jīng)氨酸酶（NA）可分為10個(gè)亞型（分別為N1-N10）。臨床上常見的血清型毒株有H9N2、H5N1、H7N3等。這些禽流感病毒在不同禽類品種上表現(xiàn)的臨床癥狀和病理變化不盡相同。

禽流感監(jiān)測最為常用的是微量紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（HI檢測），其優(yōu)點(diǎn)是所用儀器設(shè)備簡單，操作簡便、快速等，在基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室及養(yǎng)禽場普遍應(yīng)用。但常因不能正確熟練地掌握這一技術(shù)或試驗(yàn)條件不具備，而影響監(jiān)測結(jié)果，從而錯(cuò)失免疫良機(jī)，造成疫情發(fā)生，遭受嚴(yán)重?fù)p失?，F(xiàn)將禽流感監(jiān)測工作應(yīng)注意的幾個(gè)問題，淺析如下：

1 正確采樣

1.1 采樣時(shí)間

應(yīng)根據(jù)抗體產(chǎn)生的規(guī)律，在免疫后21～30 d左右進(jìn)行采樣監(jiān)測，依此結(jié)果來判定免疫質(zhì)量和雞群免疫后抗體水平，指導(dǎo)免疫工作的進(jìn)行。如果只簡單地隨機(jī)采樣，就會(huì)出現(xiàn)：（1）剛剛免疫后就采樣 這時(shí)抗體水平還未上升，其測的結(jié)果，不能說明免疫工作做得好壞。（2）免疫后期采樣 在免疫后期或是超過免疫期的時(shí)間采樣監(jiān)測時(shí)，其抗體水平必然會(huì)下降，這是正常的。此時(shí)測得的結(jié)果不能認(rèn)為是免疫失敗，而是采樣監(jiān)測時(shí)間較晚。應(yīng)及時(shí)采取免疫措施。

1.2 采樣登記

在采樣時(shí)，應(yīng)注意將雞舍棟號、品種、代次、日齡、規(guī)模、采樣數(shù)量、免疫情況（免疫程序、時(shí)間、疫苗種類、疫苗生產(chǎn)廠家、免疫質(zhì)量等）進(jìn)行詳細(xì)登記。以便監(jiān)測后進(jìn)行結(jié)果的分析和判斷，為免疫工作提供科學(xué)依據(jù)。

1.3 采樣數(shù)量

采樣數(shù)量少，測得的結(jié)果不能代表全群抗體水平。因此，采血時(shí)，應(yīng)根據(jù)雞群數(shù)量多少，按照一定的比例采樣。一般雞群500羽要采10～15羽；1 000羽雞群要采15～20羽；2 000～4 000羽雞群要采20～25羽；5 000羽以上的雞群采30羽，并要求隨機(jī)采樣。

1.4 采樣操作

現(xiàn)多采用塑料管引流采血，其優(yōu)點(diǎn)是簡便、快速，對雞只損傷小，封存后便于攜帶、存放和分離血清。采樣前，把塑料管剪成6～8 cm長各段，采樣時(shí)，要一雞一針一管，血量不得少于管長的三分之二，否則血量過少，分離到的血清不足，監(jiān)測的結(jié)果不準(zhǔn)確。同時(shí)塑料管的一端一定要燒融封閉好，以免分離時(shí)漏掉血清。如果用注射器采血，可用干凈消過毒的小離心管盛血，血液要放成斜面，不能直立，否則不易分離出血清。還要防止振動(dòng)過猛或變質(zhì)造成溶血，如有血樣溶血不能用。另外，還應(yīng)在塑料管或離心管上標(biāo)明編號，以便區(qū)分。

2 采集血樣析出血清

除了離心分離血清外，如果想讓血清自然析出，不要急于將血樣放入冰箱內(nèi)。一般說氣溫在23℃以上時(shí)，采集完的血樣放置2～3 h，就可以析出清亮的血清。但氣溫為10℃以下的時(shí)候，采集完的血樣血清很難自然析出，最好立即將血樣管放入37℃培養(yǎng)箱中孵育2～3 h，可見血清析出。待血清析出后再次放入4℃冰箱內(nèi)，這樣不但有利于血清的析出，又可避免溶血現(xiàn)象的發(fā)生。被檢血清，應(yīng)無溶血，無雜菌污染，保存于4℃15d內(nèi)檢查。如果血清待檢超過15d，需低溫冰凍保存。

3 配成1%紅細(xì)胞懸液

標(biāo)準(zhǔn)采樣應(yīng)將多只雞血混合，制成紅細(xì)胞液，減少有的雞紅細(xì)胞有自凝現(xiàn)象的干擾。采血時(shí)要采非免疫成年健康公雞的血。針管內(nèi)加3.8 %的枸椽酸鈉抗凝，從翅靜脈（或心臟）采血。若采免疫雞的血，要充分洗去血清及其它物質(zhì)，一般洗7～8次。配成1%紅細(xì)胞懸液，4℃冰箱中可保存3 d，時(shí)間再長會(huì)發(fā)生溶血，最好現(xiàn)配現(xiàn)用，得出的結(jié)果快且明顯。切記，在使用前必須把紅血球混勻，并不時(shí)地?fù)u動(dòng)。

4 濃度要準(zhǔn)確的配制抗原

當(dāng)抗原濃度高時(shí)，HI滴度就下降；當(dāng)抗原濃度低時(shí)，HI滴度就會(huì)上升。用血凝試驗(yàn)測出標(biāo)準(zhǔn)抗原的效價(jià)，倒退2孔，為此病毒的4個(gè)血凝單位抗原。為保證抗原的配制準(zhǔn)確無誤，需作抗原回歸試驗(yàn)。一般來說，抗原開啟后，放在4℃冷藏，在一個(gè)月內(nèi)，抗原效價(jià)變化不大，每次檢測時(shí)根據(jù)樣品量多少來配制工作抗原，保證HI檢測結(jié)果的準(zhǔn)確，不會(huì)因?yàn)楣ぷ骺乖渲撇粶?zhǔn)確而反復(fù)進(jìn)行抗原回歸試驗(yàn)造成浪費(fèi)時(shí)間。4個(gè)血凝單位抗原需現(xiàn)配現(xiàn)用。

5 掌握稀釋液pH值

稀釋液pH值為5.8以下時(shí)，紅細(xì)胞會(huì)發(fā)生自凝現(xiàn)象，從而影響監(jiān)測結(jié)果。pH值為7.8以上時(shí)，吸附在紅細(xì)胞上的病毒易脫落，即凝聚圖形易消失，會(huì)造成觀察誤差。pH值為7.0時(shí)，紅細(xì)胞沉降最充分，圖形最清晰，HI滴度最大。試驗(yàn)證明，使用pH值為7.0～7.2的磷酸緩沖（PBS）比使用pH值為7.0～7.2的生理鹽水作稀釋液的效果好。

6 小結(jié)

商品代肉雞、肉鴨，在免疫后 21d 進(jìn)行 HI 抗體檢測，抗體滴度≥4log2 為免疫合格。其他家禽加強(qiáng)免疫后 1 個(gè)月進(jìn)行 HI 抗體水平檢測，抗體滴度≥5log2 為免疫合格。存欄禽群免疫合格率必須≥70%。根據(jù) HI 滴度判定禽群禽流感免疫狀況還應(yīng)注意使用疫苗種類、免疫方法、免后時(shí)間等，若檢測后抗體滴度達(dá)不到上述指標(biāo)，必須查明原因并立即重新進(jìn)行免疫；若檢測的禽群沒有進(jìn)行過禽流感免疫，而 HI 抗體滴度很高，應(yīng)注意是否有野毒入侵。

禽流感已經(jīng)給我國養(yǎng)禽業(yè)造成巨大損失，我國的各級政府、社會(huì)各界對禽流感的防制高度重視，目前我國的禽流感防制研究工作在全面有效開展，且接近國際先進(jìn)水平。但AIV一直嚴(yán)重威脅著養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展及人類的健康，尤其是我國現(xiàn)有的養(yǎng)殖條件所限，更應(yīng)加大對禽流感的防制力度。在研究敏感快速的檢測方法的同時(shí)，禽流感的血清學(xué)抗體檢測方法仍是目前條件下最重要的監(jiān)測方法，及早的發(fā)現(xiàn)禽流感、對實(shí)際生產(chǎn)的指導(dǎo)作用不容忽視。科學(xué)運(yùn)用禽流感抗體檢測方法對禽流感防控體系的建立提供切實(shí)的技術(shù)保障。

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