天津市薊縣藥品檢驗所（301900）霍玉榮

高效液相色譜法是上世紀六十年代產(chǎn)生的一種現(xiàn)代化分析方法，具有分析速度快、分離效率高等優(yōu)勢，是目前藥物分析領域重要的檢驗手段和分析技術[1]。超高效液相色譜法是基于高效液相色譜法的基礎上形成的藥物分析新技術，它由高壓輸液泵、高效固定相、信息化、機械化以及高靈敏度的檢測機械構(gòu)成，具有分離速度快、分析效率高，靈敏度高且能反復測試的優(yōu)點，已被廣泛應用于各種藥物質(zhì)量檢測中。

1 超高效液相色譜法概論

自2 0 世紀7 0 年代以來，隨著高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)技術的不斷發(fā)展，美國Waters公司于2004年的匹茲堡會議上推出了最新研制的ACQU ITY超高效液相色譜(Ultra Performance Liquid Chromatography， UPLC)，其采用細粒徑的新型固定相，可獲得高達2萬塊/m理論塔板數(shù)的超高柱效，并以系統(tǒng)整體設計的創(chuàng)新技術，全面提升了液相色譜的速度、靈敏度和分離度。超高效液相色譜技術的原理與高效液相色譜技術相同，都是以范德米特方程作為理論基礎[2]。范德米特方程為：HETP=AdP+B/v+CdP 2v。其中HETP表示理論塔板高度，A表示渦流擴散系數(shù)，dP表示填料微粒直徑，B表示分子徑向擴散技術，v表示流動相線速度，C表示傳質(zhì)因子。超高效液相色譜儀優(yōu)點[3]：①1.7μm小顆粒填充因此比高效液相色譜儀具有更好的分離能力。②1.7μm小顆粒提供的柱效比5μm顆粒的柱效提高了3倍。③超高效液相色譜儀采用1.7μm顆粒，比5μm顆粒柱長縮短3倍，柱效不變，結(jié)果分離時間縮短而分離度保持不變。④超高效液相色譜法減小顆粒度，使色譜峰變窄，信噪比增大，靈敏度提高。⑤超高效液相色譜能提高質(zhì)譜離子化效率減小基質(zhì)效應。

2 超高效液相色譜法在藥物分析中的應用

2.1 用于藥物的含量測定 李京峰等[4]用超高效液相色譜法測定紫杉肽中紫杉醇的含量。紫杉肽注射制劑以蒸餾水溶解，經(jīng)2.0mol/L氫氧化鈉溶液降解處理后，通過對紫杉醇降解產(chǎn)物的測定，間接標定紫杉肽注射制劑中紫杉醇mm的含量。采用Agilent SB C18（2.1mm×50mm，1.8μm）色譜柱，流動相為乙腈-水（10∶90，V/V），流速0.2ml/min，檢測波長240nm參比波長360nm），柱溫40℃（±0.5℃），自動進樣器溫度15℃（±0.5℃），進樣體積2μl。結(jié)果：紫杉醇濃度在0.31～5.00mg/ml范圍內(nèi)與其降解產(chǎn)物的峰面積呈現(xiàn)良好的線性關系（r=0.9992，n=5）。不同批次紫杉肽注射制劑中每支含紫杉醇的量在26.77～33.19mg范圍內(nèi)。王宇馳等[5]用超高效液相色譜法測定阿奇霉素分散片的含量，此方法準確可靠，具有良好的專屬性。陸小云等用超高效液相色譜法同時測定白芍藥中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量。

2.2 用于測定藥物的有關物質(zhì) 王勇躍等用超高效液相色譜-梯度洗脫法檢測注射用阿洛西林鈉的有關物質(zhì)。色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18，2.1mm×100mm，1.7mm；流動相A為10mmol/L甲酸銨溶液(用氨水調(diào)節(jié)pH值至6.5)，流動相B為8mmol/L甲酸銨溶液(乙腈/水=200/50)；柱溫為40℃；檢測波長為210nm；流速為0.43mL/min。結(jié)果：阿洛西林鈉主峰與其相關物質(zhì)峰分離良好，檢出雜質(zhì)數(shù)量遠多于中國藥典2010年版二部各論方法；在0.3～90μg/ml范圍內(nèi)阿洛西林呈良好的線性關系(r2=0.9999)，方法的檢測限為0.1μg/ml，重復性RSD為0.61%(n=6)。薛巧如等UPLC法測定奈韋拉平的有關物質(zhì)，此法簡便、準確，專屬性強。

2.3 測定藥物的血藥濃度 魯靜，陳天朝用超高效液相色譜法測定血清中苯妥英鈉、苯巴比妥和卡馬西平的濃度。色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱，流動相為乙腈-水（28∶72），流速：0.3ml/min，檢測波長220nm，柱溫20℃。結(jié)果苯妥英鈉、苯巴比妥和卡馬西平的血清濃度分別在2.5～80.0，5.0～160.0，1.0～32.0μg/m l 線性關系良好，日內(nèi)、日間精密度（RSD）均小于7.28%，提取回收率為96.18%～103.89%。本方法簡便、快速、準確。李碧艷用超高效液相色譜法測定環(huán)孢素A的血藥濃度。本法操作簡便，回收率高，精密度好。

2.4 用于體內(nèi)藥代動力學研究 唐進法等用超高效液相色譜法研究大鼠靜脈注射丹紅注射液后丹酚酸B的藥代動力學行為。方法：大鼠靜脈給予丹紅注射液后，于不同時間點采血，血漿樣品酸化后經(jīng)乙酸乙酯萃取。色譜條件為BEH ShieldRP18色譜柱(2.1mm×100mm，1.7μm)，流動相為甲醇-乙腈-0.5%甲酸水溶液(29∶10∶61)，體積流量0.3mL/min，檢測波長286nm，柱溫為30℃。結(jié)果：丹酚酸B在0.1705～31.40μg/ml的范圍內(nèi)線性關系良好，日內(nèi)、日間精密度的RSD均小于7.6%，方法回收率90.0%～92.1%。丹酚酸B的t1/2和AUC0-t分別為(1.21±0.69)h和(4.32±1.06)μg·h/ml。丹酚酸B在大鼠體內(nèi)的動力學過程符合二室模型。結(jié)論：所建立的測定丹酚酸B血藥濃度的色譜法內(nèi)源性干擾峰少，靈敏度較高。彭平等用超高效液相色譜法，PDA檢測器同時測定大鼠血清中紅景天苷及酪醇的含量。

2.5 用于藥物的代謝產(chǎn)物分析 王子銘、胡志偉等用超高效液相色譜法測定大鼠糞便中的樺木醇。采用Waters BEH C18色譜柱(2.1mm×50mm，1.7μm)，流動相為乙腈-水(9∶1)，體積流量0.25ml/min，檢測波長為210nm，進樣量10μL，運行時間5min。健康大鼠灌胃給藥500mg/kg后，在0～24h、24～48h、48～72h、72～96h時間點收集糞便樣品，測定糞便樣品中樺木醇。結(jié)果：測定數(shù)據(jù)使用分段線性回歸方程計算，在低質(zhì)量濃度1.25～20μg/ml和高質(zhì)量濃度20～320μg/ml范圍內(nèi)線性關系良好(r＞0.99)，平均提取回收率≥97%，給藥后96h內(nèi)樺木醇累加排泄量為(47.21±5.07)%。本方法簡單、快速、準確。張瑞、劉佳等用UPLC法測定小鼠糞便中的10-羥基喜樹堿。

3 結(jié)語

超高效液相色譜法在藥物分析中顯示出廣闊的應用前景和強勁的生命力，它具有超強的分離能力以及超高靈敏度。超高效液相色譜也有一定的缺點。超高效液相色譜儀器造價高影響了超高效液相色譜儀的進一步推廣使用；而且超高效液相色譜技術對色譜柱的要求高，一般廠家很難生產(chǎn);其進樣量少又采用半環(huán)方式進樣，峰面積重復性差，填充色譜柱的顆粒細，色譜柱容易堵塞，這就導致對樣品的要求更高。隨著色譜技術的發(fā)展，這些問題會得到克服。超高效液相色譜法在藥物分析中將會發(fā)揮越來越重要的作用。