宋培燕　劉倩平　章志?！∥骸◤V州市花都區(qū)人民醫(yī)院　廣州510800）

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白血病干細(xì)胞介導(dǎo)的白血病耐藥性及小白菊內(nèi)酯的干預(yù)作用

宋培燕劉倩平章志福魏濤（廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院廣州510800）

摘要：目的：分析白血病干細(xì)胞介導(dǎo)的白血病耐藥性及小白菊內(nèi)酯的干預(yù)作用。方法：以在我院確診為急性髓系白血病的30例患者作為研究對象，應(yīng)用免疫磁珠分選法分離白血病干細(xì)胞，并將獲得的白血病干細(xì)胞分為試驗組（白血病干細(xì)胞+小白菊內(nèi)酯）和對照組（未加小白菊內(nèi)酯），應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測兩組中粘附分子CXCR4、CD62L、CD44、CD49d的蛋白表達情況。采用MTT法檢測小白菊內(nèi)酯對白血病干細(xì)胞增殖的抑制作用。結(jié)果：試驗組白血病干細(xì)胞粘附分子CXCR4、CD62L、CD44、CD49d的蛋白表率明顯低于對照組，細(xì)胞增殖的抑制率明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：小白菊內(nèi)酯可通過抑制白血病干細(xì)胞表面的粘附分子的表達，發(fā)揮促進白血病干細(xì)胞凋亡的作用。

關(guān)鍵詞：白血病干細(xì)胞白血病耐藥性小白菊內(nèi)酯干預(yù)作用

白血病是一種造血系統(tǒng)惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅人類生命、健康。近年來，國內(nèi)外不斷有臨床研究結(jié)果顯示，白血病患者機體內(nèi)存在的白血病干細(xì)胞發(fā)揮著促進患者病情發(fā)展的作用，可增加白血病耐藥性，認(rèn)為白血病干細(xì)胞是白血病患者治療耐藥和復(fù)發(fā)難治的根源[1]。此外，國內(nèi)外大量臨床研究發(fā)現(xiàn)，小白菊內(nèi)酯可促進白血病干細(xì)胞凋亡，對白血病干細(xì)胞介導(dǎo)的白血病耐藥性也具有干預(yù)作用[2]。基于國內(nèi)外上述研究，我院本次研究對白血病干細(xì)胞介導(dǎo)的白血病耐藥性及小白菊內(nèi)酯的干預(yù)作用進行了分析，以期能為臨床對該課題的研究提供參考。

1　資料與方法

1.1一般資料：本次研究分別選取經(jīng)病史、臨床生化、骨髓穿刺等檢查確診的急性髓系白血病患者（包括初診的及復(fù)發(fā)難治的）30例作為研究對象。30例患者中，包括男性17例和女性13例，年齡23～51歲，平均年齡（36.2±1.5）歲。本次研究已事先獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者已在知情同意書上簽字。

1.2研究方法

1.2.1試驗儀器及試劑：白血病干細(xì)胞體外培養(yǎng)基及試劑由Sigma Aldrich公司生產(chǎn)，細(xì)胞培養(yǎng)板由Nest公司生產(chǎn)，細(xì)胞檢測試劑由美國Promega生產(chǎn)，CXCR4+蛋白一抗由美國Santa Cruz公司生產(chǎn)，流式細(xì)胞儀由美國Beckman-Coulter公司生產(chǎn)。

1.2.2細(xì)胞分組及相關(guān)指標(biāo)檢測方法：應(yīng)用免疫磁珠法分離30例急性髓系白血病患者骨髓獲得白血病干細(xì)胞CD34+、CD38-，并隨機將白血病干細(xì)胞分成試驗組（白血病干細(xì)胞+小白菊內(nèi)酯）和對照組（未加小白菊內(nèi)酯）。使用流式細(xì)胞儀檢測兩組中CXCR4的蛋白表達以及CD62L、CD44、CD49d的蛋白表達情況。使用MTT法檢測白血病干細(xì)胞的增殖活性，具體檢測方法為在細(xì)胞培養(yǎng)板上的每個孔內(nèi)接種1.5×103個細(xì)胞，共接種96個孔板，培養(yǎng)24h后更換培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48h，然后對培養(yǎng)的細(xì)胞進行處理，處理結(jié)束后加入50mg/mLMTT繼續(xù)培養(yǎng)3h，最終計算細(xì)胞抑制率。

1.3對比指標(biāo)：本次研究對比試驗組和對照組白血病干細(xì)胞CXCR4、CD62L、CD44、CD49d的蛋白表達情況和細(xì)胞增殖抑制率。1.4統(tǒng)計學(xué)方法：本次研究過程中得到的符合正態(tài)分布的研究數(shù)據(jù)全部在計算機上用SPSS15.0統(tǒng)計軟件包處理，計量資料均采用（±s）表示，均數(shù)檢驗采用t，率的對比指標(biāo)采用X2檢驗，P< 0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組白血病干細(xì)胞黏附分子CXCR4、CD62L、CD44、CD49d的蛋白表達率比較：采用流式細(xì)胞儀檢測兩組白血病干細(xì)胞黏附分子CXCR4、CD62L、CD44、CD49d的蛋白表達水平發(fā)現(xiàn)，試驗組白血病干細(xì)胞黏附分子CXCR4、CD62L、CD44、CD49d的蛋白表達率明顯低于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1所示。

表1　兩組白血病干細(xì)胞黏附分子CXCR4+、CD62L+、CD44+、CD49d+的蛋白表達水平比較[β-Actin（%）]

2.2兩組細(xì)胞增殖抑制率比較：采用MTT法檢測發(fā)現(xiàn)試驗組培養(yǎng)后不同時點的細(xì)胞增殖抑制率均高于對照組，差異顯著（P< 0.05），詳見表2所示。

表2　兩組細(xì)胞增殖抑制率比較（%）

3　討論

臨床研究發(fā)現(xiàn)白血病干細(xì)胞的耐藥性增強是導(dǎo)致白血病治療失敗的主要原因[3]。近年來，隨著臨床對白血病的不斷深入研究，越來越多的學(xué)者發(fā)現(xiàn)白血病干細(xì)胞及其耐藥性與白血病的發(fā)生和復(fù)發(fā)存在密切關(guān)系。采用傳統(tǒng)化療藥物治療白血病，只能殺死活躍在患者體內(nèi)細(xì)胞周期中的白血病幼稚細(xì)胞，對活躍在外周血的白血病干細(xì)胞無明顯作用，故不能取得顯著治療效果，復(fù)發(fā)率較高[4]。

小白菊內(nèi)酯是存在于植物藥野甘菊中的一種主要活性成分，本質(zhì)是一種倍半萜烯內(nèi)酯化合物。近年來，不斷有臨床研究發(fā)現(xiàn)，小白菊內(nèi)酯具有抗腫瘤的作用，可誘發(fā)肝癌、結(jié)腸癌、白血病等惡性腫瘤的腫瘤細(xì)胞凋亡，對機體造血干細(xì)胞和造血祖細(xì)胞產(chǎn)生的影響較小[5]。分析小白菊內(nèi)酯抗白血病的機制可能是通過抑制患者體內(nèi)白血病干細(xì)胞上的黏附分子，抑制白血病干細(xì)胞增殖，促使白血病干細(xì)胞凋亡。

我院本次選取30例白血病患者作為研究對象，針對小白菊內(nèi)酯對白血病干細(xì)胞的干預(yù)作用進行了研究。結(jié)果顯示試驗組白血病干細(xì)胞的粘附分子CXCR4、CD62L、CD44、CD49d蛋白（β-Actin；肌動蛋白）表達率明顯低于對照組，采用MTT法檢測發(fā)現(xiàn)試驗組培養(yǎng)后不同時點的細(xì)胞增殖抑制率明顯高于對照組。該研究結(jié)果與上述臨床研究結(jié)果具有一致性，表明小白菊內(nèi)酯可對白血病干細(xì)胞的增殖產(chǎn)生抑制作用，發(fā)揮促使白血病干細(xì)胞凋亡的作用。同時也提示對小白菊內(nèi)酯抗白血病的藥理作用進行研究，是探索白血病新治療藥物的一條重要途徑。

參考文獻

[1]梁英民.酪氨酸激酶抑制劑時代異基因造血干細(xì)胞移植在慢性髓性白血病治療中的地位[J].中華血液學(xué)雜志，2014，35（2）：92-93.

[2]王玲玲.干擾素治療慢性髓細(xì)胞白血病的研究進展[J].國際輸血及血液學(xué)雜志，2014，37（2）：151-154.

[3]章志福.小白菊內(nèi)酯促進CD34+CD38-白血病干細(xì)胞凋亡的表面粘附分子CXCR4機制研究[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2015，14（14）：1155-1158.

[4]李倩，彭琪，夏平方，等.白血病干細(xì)胞免疫表型在治療急性髓系白血病方面的研究進展[J].中國輸血雜志，2015，28（4）：462-466. [5]張煥新.磷酸酯酶與張力蛋白同源物和白血病干細(xì)胞關(guān)系的研究進展[J].國際輸血及血液學(xué)雜志，2015，38（2）：119-122.

中圖分類號：R733.7

文獻標(biāo)識碼：B

文章編號：1672-8351（2016）01-0124-02