蘇偉民

晚期結(jié)腸癌組織中ERCC1和BRCA1的表達與奧沙利鉑方案化療療效及預(yù)后的關(guān)系

蘇偉民

目的探討晚期結(jié)腸癌組織中ERCC1和BRCA1的表達與奧沙利鉑方案化療療效及預(yù)后的關(guān)系。方法選取晚期結(jié)腸癌患者68例，采用mFOLFOX6方案進行化療4個周期以上。分別檢測患者結(jié)腸癌組織中切除修復(fù)交叉互補基因1(ERCC1)蛋白和乳腺癌易感基因1(BRCA1)蛋白的表達。分析ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達的相關(guān)性;分別對比ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者的化療總有效率;對比ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者的2年生存率和中位生存期。結(jié)果ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達呈正相關(guān)(r=0.208，P＜0.05);ERCC1蛋白表達陰性患者化療總有效率為60.00%，顯著高于ERCC1蛋白表達陽性患者的總有效率(32.14%)，P＜0.05;ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均陰性患者化療總有效率為60.00%，顯著高于ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均陽性患者的總有效率(29.41%)，P＜0.05;ERCC1蛋白表達陰性患者的2年生存率顯著高于ERCC1蛋白表達陽性的患者(P＜0.05);ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陰性患者的2年生存率顯著高于ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陽性的患者(P＜0.05)。結(jié)論晚期結(jié)腸癌患者ERCC1蛋白和BRCA1蛋白的表達可影響奧沙利鉑方案化療療效，并可為臨床評估患者的預(yù)后提供重要的參考依據(jù)。

晚期結(jié)腸癌;ERCC1;BRCA1;奧沙利鉑;療效;預(yù)后

結(jié)腸癌是發(fā)病率和死亡率均較高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，由于腫瘤早期無特異性的臨床癥狀，多數(shù)患者在腫瘤的中晚期才獲得確診，治療難度大，預(yù)后較差［1］。早期腫瘤可通過根治性切除術(shù)清除腫瘤病灶，甚至徹底治愈疾病。對于中晚期惡性腫瘤，化療成為主要的治療措施。FOLFOX方案是結(jié)腸癌常用的化療方案，而奧沙利鉑是其中主要的組成藥物。臨床研究顯示，切除修復(fù)交叉互補基因1(ERCC1)和乳腺癌易感基因1(BRCA1)可修復(fù)奧沙利鉑所致的腫瘤細胞DNA損傷，從而導(dǎo)致腫瘤細胞對奧沙利鉑的抗腫瘤作用耐藥［2-3］。明確腫瘤細胞對鉑類藥物的耐藥機制可為臨床制定化療方案提供依據(jù)，同時也有助于評估患者的預(yù)后。本研究探討晚期結(jié)腸癌組織中ERCC1和BRCA1的表達與奧沙利鉑方案化療療效及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取自2012年1月-2014年1月期間我院收治的晚期結(jié)腸癌患者68例。其中男42例，女26例;年齡31～80歲，平均(57.18±14.05)歲。所有患者均經(jīng)活組織病理學(xué)檢查獲得確診，其中44例為腺癌，15例為粘液腺癌，7例為印戒細胞癌，1例為腺鱗癌，1例為鱗癌。體力狀態(tài)評分(PS評分)0～2分，平均PS評分為(1.37±0.24)分。

1.2 納入和排除標準

參照美國國家綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)發(fā)布的《NCCN結(jié)腸癌臨床診療指南》［4］進行診斷。所有患者均經(jīng)過電子結(jié)腸鏡檢查，結(jié)合其臨床癥狀、體征以及活組織病理檢查，明確結(jié)腸癌的臨床診斷，且均屬于腫瘤TNM分期Ⅳ期。同時排除合并其他惡性腫瘤、急性心腦血管事件、嚴重肝腎功能衰竭等嚴重疾病影響患者預(yù)后評估的患者;排除已經(jīng)接受其他化療方案治療的患者;排除未能完成本研究化療方案治療的患者;排除具有手術(shù)切除指征以及預(yù)期生存時間＜3個月的患者;排除臨床資料不完整，影響本研究統(tǒng)計學(xué)分析的患者。

1.3 化療方案

采用mFOLFOX6方案進行化療。第1天采用注射用奧沙利鉑(恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，國藥準字 H20040817)靜脈滴注2 h，使用劑量為85mg/m2;注射用亞葉酸鈣(揚子江藥業(yè)集團海瑞藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國藥準字H20073593)靜脈滴注2 h，使用劑量為400mg/m2;注射用5-氟尿嘧啶(海欣制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準字H20050511)靜脈推注，然后再持續(xù)靜脈滴注，劑量為2400mg/m2，維持46 h。14 d后在重復(fù)上述方案。所有患者均接受4個周期以上的化療，完成化療后進行相關(guān)指標的觀察。

1.4 ERCC1蛋白、BRCA1蛋白的檢測

所有患者均留取腫瘤組織標本檢測ERCC1蛋白、BRCA1蛋白的水平。先用4%的甲醛固定腫瘤組織標本，隨后經(jīng)脫水、石蠟包埋后，制成厚度為4μm的石蠟組織切片。切片制作完成后，經(jīng)脫蠟、水化和抗原修復(fù)后，在室溫下以3%的過氧化氫溶液孵育后，以磷酸鹽緩沖液沖洗。將鼠抗人ERCC1或者BRCA1單克隆抗體稀釋100倍后，滴入標本中。然后在室溫下培育，采用磷酸鹽緩沖液沖洗，二氨基聯(lián)苯胺顯色以及蘇木精對比染色。最后以梯度酒精脫水，二甲苯透明和中性樹脂封片。完成后在顯微鏡下觀察獲得結(jié)果。陰性對照為磷酸鹽緩沖液代替一抗。顯微鏡下觀察到細胞核中有棕黃色著色的顆粒為陽性細胞。檢測結(jié)果根據(jù)標本的染色強度以及陽性細胞所占的百分比進行評分。0分:腫瘤細胞無著色，1分:腫瘤細胞有淡黃色著色;2分:腫瘤細胞有棕黃色著色;3分:腫瘤細胞有深棕色著色。0分:陽性細胞的構(gòu)成比＜5%;1分:陽性細胞的構(gòu)成比≥5%而＜25%;2分:陽性細胞的構(gòu)成比≥25%而＜50%;3分:陽性細胞的構(gòu)成比≥50%而＜75%;4分:陽性細胞的構(gòu)成比≥75%。兩個評分結(jié)果的乘積為最終的評分結(jié)果，評分結(jié)果≥2判定為蛋白表達陽性，否則為陰性。

1.5 療效評價標準

參照實體瘤療效評價標準［5］，完全緩解(CR):經(jīng)過治療后，所有病灶被清除，且腫瘤標志物正常;部分緩解(PR):經(jīng)過治療后，病灶長徑總和較治療前縮小≥30%;疾病穩(wěn)定(SD):經(jīng)過治療后，病灶長徑總和較治療前縮小＜30%或增加＜20%，腫瘤標志物異常;疾病進展(PD):經(jīng)過治療后，病灶長徑總和較治療前增加≥20%或出現(xiàn)新病灶?？傆行蕿镃R、PR的構(gòu)成比例之和。

1.6 觀察指標

分析ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達的相關(guān)性;分別對比ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者的化療總有效率;對比ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者的2年生存率和中位生存期。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析

采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS17.0進行統(tǒng)計學(xué)處理。ERCC1和BRCA1表達的相關(guān)性采用Spearmen秩相關(guān)分析;采用Kaplan-Meier生存曲線進行生存分析，組間差異采用Logrank法檢驗，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 研究結(jié)果

2.1 ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達的相關(guān)性分析

ERCC1蛋白表達陽性的有28例，陽性率為22.76%;BRCA1蛋白表達陽性的有32例，陽性率為26.02%;ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均陽性的有17例，陽性率為13.82%。Spearmen秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達呈正相關(guān)(r=0.208，P＜0.05)，見表1。

表1 ERCC1和BRCA1表達的相關(guān)性分析

2.2 ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者總有效率的對比

ERCC1蛋白表達陰性患者化療總有效率為60.00%，顯著高于ERCC1蛋白表達陽性患者的總有效率(32.14%)，P＜0.05;BRCA1蛋白表達陰性患者化療總有效率為58.33%，高于BRCA1蛋白表達陽性患者的總有效率(37.50%)，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均陰性患者化療總有效率為60.00%，顯著高于ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均陽性患者的總有效率(29.41%)，P＜0.05，見表2。

表2 ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者總有效率的對比 n(%)

2.3 ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者的生存分析

ERCC1蛋白表達陽性患者的中位生存期為13個月(95%CI為10.518～15.506)，2年生存率為20.3%，ERCC1蛋白表達陰性患者的中位生存期為19個月(95%CI為12.529～25.458)，2年生存率為41.9%。ERCC1蛋白表達陰性患者的2年生存率顯著高于ERCC1蛋白表達陰性的患者(P＜0.05); BRCA1蛋白表達陽性患者的中位生存期為14個月(95%CI為11.508～16.512)，2年生存率為28.1%，BRCA1蛋白表達陰性患者的中位生存期為18個月(95%CI為12.754～23.235)，2年生存率為37.5%。ERCC1蛋白表達陰性和陽性患者的2年生存率對比，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陽性患者的中位生存期為12個月(95%CI為9.591～14.396)，2年生存率為16.9%，ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陰性患者的中位生存期為19個月(95%CI為9.732～28.268)，2年生存率為43.1%。ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陰性患者的2年生存率顯著高于ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陽性的患者(P＜0.05)。

3 討論

奧沙利鉑是結(jié)腸癌化療方案中的常用藥物，其抗腫瘤機制主要是通過與細胞 DNA結(jié)合，抑制DNA的生成而發(fā)生細胞毒性和抗腫瘤作用［6］。然而，近年來的研究顯示，腫瘤細胞對鉑類藥物的抗腫瘤作用產(chǎn)生耐藥現(xiàn)象，其中ERCC1和BRCA1表達的情況與腫瘤細胞對鉑類藥物的耐藥現(xiàn)象有關(guān)［7］。因此，進一步研究ERCC1和BRCA1的表達與奧沙利鉑方案化療療效和預(yù)后的關(guān)系對晚期結(jié)腸癌的臨床治療有重要的指導(dǎo)意義。

臨床研究已經(jīng)證實，對于非小細胞肺癌、卵巢癌等患者，BRCA1表達水平的下調(diào)可增加腫瘤細胞對鉑類藥物的敏感性，進而提高化療效果，改善患者的預(yù)后［8-9］。但是關(guān)于結(jié)腸癌患者ERCC1和BRCA1的表達對化療療效和患者預(yù)后的影響，目前的臨床研究較少，也尚未獲得一致的結(jié)論。本研究的結(jié)果顯示，晚期結(jié)腸癌組織中ERCC1蛋白和BRCA1蛋白的表達呈正相關(guān)關(guān)系，且ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陰性患者的化療療效顯著優(yōu)于ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性的患者。這一結(jié)論提示了ERCC1和BRCA1的表達可影響奧沙利鉑方案的化療療效。奧沙利鉑可與細胞DNA結(jié)合成鉑DNA加合物，引起鏈內(nèi)或鏈間交聯(lián)而損傷DNA，進而引起腫瘤細胞的凋亡［10］。因此，DNA損傷是奧沙利鉑發(fā)揮抗腫瘤作用的核心。ERCC1、BRCA1是機體核苷酸切除修復(fù)系統(tǒng)的關(guān)鍵基因。ERCC1蛋白通過與DNA修復(fù)酶缺乏互補基因F結(jié)合，可識別鉑類化合物并將其切除，從而修復(fù)DNA損傷。因此ERCC1表達的上調(diào)可增強DNA損傷修復(fù)能力，削弱奧沙利鉑的抗腫瘤作用［11］。BRCA1蛋白同樣具有修復(fù)DNA雙鏈斷裂損傷的作用［12］。在本研究中，ERCC1蛋白表達陽性患者的2年生存率顯著低于ERCC1蛋白表達陰性的患者，同時 ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陽性患者的2年生存率也顯著低于ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陰性的患者。這說明ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陽性可影響患者的預(yù)后。田丹等［13］的研究也觀察到，ERCC1蛋白表達陰性的結(jié)腸癌患者無病生存時間更長，使用奧沙利鉑方案的化療效果更好。

綜上所述，晚期結(jié)腸癌患者 ERCC1蛋白和BRCA1蛋白的表達可影響奧沙利鉑方案化療療效，并可為臨床評估患者的預(yù)后提供重要的參考依據(jù)。

［1］丁 璐，王亞東，王貴齊，等.城市居民大腸癌篩查知信行現(xiàn)狀及參與意愿的影響因素研究［J］.中國全科醫(yī)學(xué)，2015，18(34):4187-4191.

［2］謝 聰，尹如鐵，李玉玲，等.鉑耐藥和鉑敏感上皮性卵巢癌中ERCC1、survivin蛋白的表達及臨床應(yīng)用價值［J］.四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2011，42(1):86-89.

［3］趙 丹，張 偉，李曉光，等.三磷酸腺苷-腫瘤體外藥敏試驗聯(lián)合耐藥基因檢測預(yù)測原發(fā)性卵巢癌的化療敏感性［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2011，46(3):193-198.

［4］鄭 樹，黃彥欽.NCCN結(jié)腸癌臨床診療指南解讀［J］.實用腫瘤雜志，2007，22(3):206-207.

［5］楊學(xué)寧，吳一龍.實體瘤治療療效評價標準—RECIST［J］.循證醫(yī)學(xué)，2004，4(2):85-90，111.

［6］鄧 穎.奧沙利鉑的藥理作用及臨床應(yīng)用［J］.吉林醫(yī)學(xué)，2011，32(18):3707.

［7］陳紹俊.DNA修復(fù)基因在鼻咽癌的表達及鉑類化療耐藥的研究現(xiàn)狀［J］.癌癥進展，2012，10(5):457-461.

［8］徐光輝，李 玉，劉 毅，等.結(jié)直腸癌組織乳腺癌易感基因1的表達及與鉑類化學(xué)治療療效的關(guān)系［J］.中華消化雜志，2013，33(3):184-186.

［9］朱明珍，徐海燕，蔣 華.晚期非小細胞肺癌HIF-1α、ERCC1基因多態(tài)性與鉑類藥物療效的關(guān)系［J］.實用醫(yī)學(xué)雜志，2016，32(3):385-388.

［10］侯慶生，趙紅偉，公維鵬，等.奧沙利鉑誘導(dǎo)結(jié)腸癌HCT116細胞凋亡過程中p53凋亡刺激蛋白2的磷酸化對p53促凋亡功能的影響［J］.中華腫瘤雜志，2014，36(6):418-423.

［11］徐光輝，李 玉，葉勝龍，等.結(jié)直腸癌組織中 ERCC1和BRCA1的表達及其與鉑類化療療效的相關(guān)性［J］.復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2011，38(4):315-318，323.

［12］趙錫鵬，張鳳梅，鳳志慧，等.乳腺癌易感基因1在DNA損傷修復(fù)中作用的研究進展［J］.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2014，28(4):606-611.

［13］田 丹，程 越，劉卓星，等.ERCC1表達對結(jié)腸癌患者術(shù)后輔助化療療效及預(yù)后的影響［J］.廣州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2014，42(6):43-46.

R735.3+5;R730.53

:Adoi:10.3969/j.issn.1671-332X.2016.08.005

蘇偉民:普寧市人民醫(yī)院 廣東普寧 515300