劉功成，張 倩，屈勇剛，楊 蓓，楊慧敏，王欣雨，王園園，李新順，馬 博（石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆 石河子 832003）

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新疆石河子地區(qū)規(guī)?；i場豬瘟抗體檢測及分析

劉功成，張 倩，屈勇剛*，楊 蓓，楊慧敏，王欣雨，王園園，李新順，馬 博（石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆 石河子 832003）

豬瘟（Classic swine fever ，CSF）是由豬瘟病毒（Classic swine fever virus，CSFV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。1993年后，一些已宣布消滅豬瘟的國家和地區(qū)，如荷蘭、瑞士、比利時、德國等，又相繼出現(xiàn)了豬瘟疫情[1]。目前，該病主要在亞洲、非洲、南美洲和歐洲等44個國家流行[2]。

近年來，新疆的養(yǎng)豬業(yè)受到生豬價格持續(xù)下跌的影響，部分小規(guī)模豬場遭到連續(xù)入不敷出的打擊后，不得不宣告破產(chǎn)；而一些較大規(guī)模的豬場仍然在等待養(yǎng)豬業(yè)的轉(zhuǎn)機(jī)。這種形勢無疑會對新疆石河子地區(qū)豬場防疫工作帶來影響。但在這種情況下，大多豬場CSFV的抗體水平仍相對較高，提示石河子地區(qū)對CSF的防疫基礎(chǔ)相對較好。

摘 要：為了解新疆石河子地區(qū)豬場豬瘟病毒（CSFV）抗體水平，試驗從新疆石河子地區(qū)的12個不同規(guī)模豬場共采血樣743份，采用間接ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）法檢測CSFV的抗體水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該地區(qū)CSFV抗體平均陽性率為85.87%（638/743），免疫抗體陽性率超過80.00%的豬場占75%，各豬場抗體水平差異極顯著（p＜0.01）。結(jié)果表明石河子地區(qū)CSFV抗體水平較高，該結(jié)果可為新疆石河子地區(qū)豬瘟防疫工作提供一定的參考。

關(guān)鍵詞：豬瘟病毒；ELISA；抗體水平；陽性率

1 材料與方法

1.1 血清樣品

2014—2015年，743份血液樣品采自新疆石河子地區(qū)12個規(guī)模化豬場（能繁母豬500頭及以上的4個，301～499頭的3個，201～300頭的2個，200頭以下的3個），其中選取9個豬場的豬群不同構(gòu)成成分如下： 0～10日齡仔豬42份，11～20日齡仔豬61份，21～30日齡仔豬70份，種公豬78份，后備母豬100份，經(jīng)產(chǎn)母豬135份，共486份血清。

1.2 檢測試劑盒和主要儀器

豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒（武漢科前生物制品有限責(zé)任公司，批號：141115），自動酶標(biāo)儀（美國BioTek公司）。

1.3 間接ELISA方法

根據(jù)試劑盒說明書的操作步驟，對待檢血清進(jìn)行1∶40稀釋(例如：195μL樣品稀釋液中加5μL待檢血清)。將稀釋好的血清100μL加入到抗原包被板中，同時設(shè)定陰性和陽性對照各1孔，均勻震蕩后，置于37 ℃溫箱中溫浴30 min。然后，棄去抗原包被板中的液體，對抗原包被板進(jìn)行洗滌，每孔加入羊抗豬酶標(biāo)二抗，同樣進(jìn)行37 ℃溫浴30 min，隨后棄掉廢液，再次洗滌。再在抗原包被板的每孔中分別加入底物A、底物B，混勻室溫避光顯色10 min，最后，每孔加入終止液，10 min內(nèi)，用酶標(biāo)儀在630 nm波長下對樣品的OD值進(jìn)行測定，根據(jù)OD值的大小，判定樣品抗體的水平。

1.4 結(jié)果轉(zhuǎn)化 (參照豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒使用說明書)

測定結(jié)果的轉(zhuǎn)化值見表1。

表1　豬瘟抗體ELISA檢測OD值與豬瘟間接血凝試驗（HIA）效價的轉(zhuǎn)換

1.5 統(tǒng)計分析

用Excel軟件、SPSS軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，OD值結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 新疆石河子地區(qū)12個規(guī)?；i場的豬瘟抗體水平

743份豬血清共檢出抗體陽性638份，陽性率為85.87%，OD平均值為1.210，標(biāo)準(zhǔn)差為0.773，平均效價為1∶256。A～L的12個豬場的陽性率分別為100.00%、85.71%、71.11%、46.88%、95.71%、93.65%、73.24%、81.25%、95.00%、95.45%、97.33%、98.21%，運用SPSS軟件進(jìn)行單樣本t檢測P為0.005，表明各豬場抗體水平差異極顯著（P＜0.01）。結(jié)果見表2。

2.2 部分豬場豬群不同構(gòu)成成分的豬瘟抗體水平

12個豬場選取9個豬場，對豬群不同構(gòu)成成分的豬瘟抗體水平進(jìn)行分析，0～10日齡仔豬、11～20日齡仔豬、21～30日齡仔豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的豬瘟抗體陽性率分別為85.71%、85.48%、77.14%、96.00%、89.63%、97.44%；豬群不同構(gòu)成成分之間的豬瘟抗體水平存在較大差異，種公豬的抗體水平最高，其次為后備母豬，21～30日齡仔豬的抗體水平最低，但也超過了70.00%，結(jié)果見表3。

表2　新疆石河子地區(qū)12個不同規(guī)模豬場豬瘟免疫抗體檢測結(jié)果

表3　部分豬場豬群不同構(gòu)成成分的豬瘟抗體水平

3 討論

3.1 新疆石河子地區(qū)豬瘟抗體水平相對較高

新疆石河子地區(qū)12個規(guī)?；i場的抗體陽性率有11個均大于70%，抗體的平均水平達(dá)到了農(nóng)業(yè)部《2012年國家動物疫病強(qiáng)制免疫計劃》規(guī)定的抗體合格率在70%以上的要求[3]。有1個豬場的抗體水平偏低，僅為46.88%，需要引起足夠的重視。根據(jù)杜希珍等研究報道，規(guī)?；i場豬瘟疫情穩(wěn)定需要豬瘟抗體合格率必須達(dá)到90%以上[4]，而新疆石河子地區(qū)豬瘟抗體陽性率達(dá)到了90%以上的豬場有7個，這說明新疆石河子地區(qū)各個豬場的豬瘟免疫狀況較好。近幾年來，個別豬場為了節(jié)約成本，沒有像以前一樣嚴(yán)格做好豬場的防疫工作。所以導(dǎo)致新疆石河子地區(qū)不同規(guī)?；i場的豬瘟抗體水平有所差異。

3.2 豬群不同構(gòu)成成分豬瘟抗體水平存在明顯差異

對1～10日齡仔豬，11～20日齡仔豬，21～30日齡仔豬，后備母豬，經(jīng)產(chǎn)母豬，種公豬的豬瘟抗體水平檢測發(fā)現(xiàn)，后備母豬和種公豬的抗體水平最高，21～30日齡仔豬最低，本試驗結(jié)果與牟群等（2012）對不同階段豬群豬瘟抗體進(jìn)行檢測分析結(jié)果[4]基本相符。筆者把0～30日齡仔豬按10日齡為一個階段分為3個階段，用以判斷仔豬豬瘟抗體水平的消長規(guī)律，來排除母源抗體的干擾以確定仔豬的最佳首免時間。結(jié)果發(fā)現(xiàn)新疆石河子地區(qū)各個規(guī)?；i場前兩個階段的仔豬抗體水平較高，第3階段抗體水平下降至77.14%，提示仔豬母源抗體保護(hù)作用效力下降，說明仔豬在20日齡左右時需要給予豬瘟疫苗接種。

3.3 科學(xué)做好豬場防疫工作

豬瘟抗體水平的高低直接反映了豬群免疫接種的效果，是豬群抵抗豬瘟病毒的關(guān)鍵因子[5]?，F(xiàn)在，很多豬場都懂得了防疫工作重要性，所以他們也在不斷加大對豬場防疫的投入。當(dāng)然，防疫工作中疫苗是關(guān)鍵，所以豬場在疫苗的采購時，一定要選擇質(zhì)量過硬的廠家，切勿貪圖便宜，購進(jìn)劣質(zhì)疫苗，以防給豬場帶來不可估量的后果。然后就是疫苗的保存工作，豬瘟疫苗是凍干苗，需要放在-20 ℃條件下保存，稀釋好后要在一定時間內(nèi)用完。同時，在給各類豬群接種疫苗時，要使用不同規(guī)格的針頭，切勿圖快打飛針，要保證每頭豬都接種上了規(guī)定的頭份，要對不同窩豬群接種疫苗時要注意更換針頭。同時，豬場要定期進(jìn)行血清學(xué)檢測，檢測不同豬群豬瘟抗體水平，及早發(fā)現(xiàn)問題，及時做好疫苗補免與淘汰工作，做到防微杜漸。

參考文獻(xiàn)

[1] 殷震，劉景華.動物病毒學(xué)[M].2版.北京：科學(xué)出版社，1997：652-664.

[2] S T A R K R，R U M E N A P F G，MEYERS，et al.Genomic localization of hogcholera virus glycoproteins [J]. Virology，1990(1)：280-286

[3] 劉志勇，韓慶安，劉乃強(qiáng)，等.規(guī)模養(yǎng)豬場主要疫病免疫效果評估模型的建立[J].中國獸醫(yī)雜志，2011（7）：88-90.

[4] 牟群，李茂寧，覃慶玉，等. 規(guī)?；i場不同階段豬群豬瘟抗體水平調(diào)查報告[J]. 畜牧獸醫(yī)雜志，2012（6）：86-88.

[5] 杜希珍，高麗娜，趙海山，等.規(guī)?；i場母豬群豬瘟抗體血清學(xué)調(diào)查[J].豬業(yè)科學(xué)，2009，26（6）：86-88.

收稿日期：（2015-11-13）

*通訊作者：屈勇剛（1971-），男，陜西渭南人，副教授，主要從事動物傳染病診斷與防治工作

基金項目：新疆石河子市農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)項目（2013NY04）
作者：劉功成（1990-），重慶合川人，碩士研究生，主要從事動物傳染病診斷與防治工作