□ 戴桂梅 黃智明 廣西玉林市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所

?

月餅中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的HPLC法測定

□ 戴桂梅 黃智明 廣西玉林市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所

采用直接進(jìn)樣方法同時(shí)快速測定月餅中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉，并對(duì)色譜條件進(jìn)行選擇，選用了230nm為檢測波長，甲醇+乙酸銨（0.02mol/L）（體積比：5：95）做為實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相，流速為1.0mL/min。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：三種分析物的濃度與峰面積之間呈現(xiàn)良好線性，相關(guān)系數(shù)＞0.9990， 加標(biāo)回收率在90%-101%之間，相對(duì)偏差分別為1.04，1.59，1.80。實(shí)際樣品測定中，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD范圍為0.63%-0.89%。該方法具有線性關(guān)系良好、回收率高、精密度好，快速等優(yōu)點(diǎn)，可用于日常測定月餅中的苯甲酸、山梨酸和糖精鈉。

目前，食品安全問題頻現(xiàn)，添加劑問題管理愈加嚴(yán)格。苯甲酸、山梨酸、糖精鈉是常用的食品添加劑，對(duì)人體的健康有不同程度的危害。苯甲酸的代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，在人體中難以分解，過量攝入會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生一定的危害。山梨酸超標(biāo)嚴(yán)重，消費(fèi)者長期服用，在一定程度上會(huì)抑制骨骼生長，危害腎、肝臟的健康。糖精鈉的甜度是蔗糖的300-500倍，是一種較多用于果脯、蜜餞行業(yè)的甜味劑，但其在人體內(nèi)不分解，當(dāng)使用較多的糖精鈉時(shí)，會(huì)影響腸胃消化酶的正常分泌，降低小腸的吸收能力，使食欲減退。食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定對(duì)食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的使用范圍和用量有嚴(yán)格的限定。但仍然有些廠商違法添加，因此，準(zhǔn)確快速檢測食品中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉具有非常重要的意義，尤其是中秋月餅質(zhì)量狠抓期。

實(shí)驗(yàn)部分

儀器和試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1200高效液相色譜

甲醇：色譜純，經(jīng)0.45μm濾膜過濾

乙酸銨：取1.54g乙酸銨，加水溶解并稀釋至1000mL，經(jīng)0.45μm濾膜過濾

苯甲酸、山梨酸、糖精鈉（1.00mg/ mL）標(biāo)準(zhǔn)品：中國計(jì)量科學(xué)研究院

樣品前處理

準(zhǔn)確稱取已經(jīng)粉碎的樣品10.0g（準(zhǔn)確到0.0001g）準(zhǔn)備好的樣品于25mL帶刻度具塞比色管中，加入10mL的純凈水，搖勻，超聲提取10min，分別加入亞鐵氰化鉀和硫酸鋅溶液各4mL，定容，混合均勻。過濾，經(jīng)0.45um濾膜過濾后，進(jìn)樣分析。

色譜分析條件

色譜柱：Thermo C18

柱溫：30℃

流動(dòng)相：甲醇+乙酸銨（0.02mol/L）（體積比：3：97）

流速；1.0mL/min

波長：230nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液混合液的配制。準(zhǔn)確吸取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，配制系列濃度分別為0.010、0.020、0.040、0.080、0.160、0.032mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按選定的色譜條件，各吸取10uL進(jìn)樣分析。根據(jù)各組分的響應(yīng)峰面積與相應(yīng)的濃度金相線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品測定

取經(jīng)0.45濾膜過濾后試液10uL進(jìn)樣分析，以外標(biāo)法為依據(jù)進(jìn)行定量分析。

結(jié)果與討論

色譜條件的選擇

由于苯甲酸在230nm波長處有較大吸收，大于254nm波長時(shí)苯甲酸的吸收過低而山梨酸的吸收過高，但在230nm時(shí)三者均有較理想的吸收，故選用了230nm為檢測波長。

根據(jù)苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的性質(zhì)，并參考文獻(xiàn)，選定甲醇+乙酸銨（0.02mol/L）（體積比：5：95）做為實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相時(shí)，山梨酸和糖精鈉的分離度不好，為較好分開山梨酸和糖精鈉，調(diào)整流動(dòng)相比例，選定為峰形較好，基線較平，分離度較好時(shí)的甲醇+乙酸銨（0.02mol/L）（3+97）為本實(shí)驗(yàn)研究的流動(dòng)相比例。

為避免流速過快過慢造成的分析時(shí)間長和分離度小的問題，選定1.0mL/ min做為流速。

線性關(guān)系與檢出限

在選定的色譜條件下，按配制好的標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線在（0.010-0.032mg/ mL）線性范圍內(nèi)，以峰面積y為縱坐標(biāo)，濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程分別為∶y=35386x-2.09617， y=60136x-2.3259，y=22483x+0.5263，相關(guān)系數(shù)分別為：1，0.9998，0.9990。

可見，三種分析物的濃度與峰面積之間呈現(xiàn)良好線性，相關(guān)系數(shù)＞0.9990。

加標(biāo)樣品回收率與精密度

取已知苯甲酸、山梨酸、糖精鈉空白的樣品進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。稱取樣品10g（精確到0.0001g），在樣品中添加苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液即樣品加標(biāo)量為0.02mg/mL。按上述前處理方法，進(jìn)行三水平測定。

三種分析物加標(biāo)回收率在90%-101%之間，具有較高的回收率，相對(duì)偏差分別為1.04，1.59，1.80，精密度較好。

實(shí)際樣品測定

采用本方法，分別對(duì)五仁叉燒月餅、蓮蓉月餅、哈密瓜月餅實(shí)際樣品進(jìn)行測定，采用三水平平行測定兩個(gè)樣品。測定結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD范圍為0.63%-0.89%（n=3），可見，該方法測定實(shí)際樣品的精密度較高。

小結(jié)

本方法具有線性關(guān)系良好、回收率高、精密度好等優(yōu)點(diǎn)，能快速測定月餅中的苯甲酸、山梨酸和糖精鈉，適用于月餅季節(jié)的高效檢測工作。