●詹思

川明參中蛋白與多糖的同步提取及抗氧化性測定

●詹思

川明參是一種具有滋陰補肺和健脾益氣功效的中藥材，其中含有豐富的多糖、蛋白質(zhì)等化學(xué)成分。川明參中的多糖含量超過80%，粗蛋白的含量也高達5%，還有多種氨基酸，是其主要的功能成分之一，在醫(yī)藥和保健品領(lǐng)域中的應(yīng)用非常廣泛，具有廣闊的市場前景，所以如何高效率地提取川明參中的蛋白和多糖具有非常重要的意義。本文針對當前川明參中蛋白與多糖的同步提取的現(xiàn)狀，對其提取方法和抗氧化性的檢測進行了綜合分析。

川明參；蛋白；多糖；同步提??；抗氧化性

目前，川明參中蛋白和多糖主要采用的是單獨提取的方法，但是由于其中蛋白的總量并不高，這種提取方法會導(dǎo)致產(chǎn)品成分開發(fā)成本增加，為了降低成本，我們可以采用堿提法，同時將蛋白和多糖提取出來。而且，使用該方法提取之后，剩余的殘渣還可以提取出水溶性多糖。為了提高川明參的利用效率，本文的主要原料就是提取后的川明參殘渣，采用超聲波輔助堿提法對其中的蛋白和多糖進行同步提取，并設(shè)計了如下實驗，對其最佳輔助提取工藝和抗氧化性測定進行了綜述，希望能川明參蛋白和多糖的提取以及綜合開發(fā)提供指導(dǎo)。[1]

1 同步提取蛋白和多糖以及抗氧化性檢測的實驗設(shè)計

1.1 實驗材料和設(shè)備

①川明參和經(jīng)95%乙醇超聲提取川明參干燥粉之后的川明殘渣；②牛血清蛋白（北京拜耳迪生物技術(shù)）、考馬斯亮藍（上海寶曼生物科技，G250）、1-二苯基-2-三硝基苯肼（美國Sigma，DPPH）、葡萄糖、石油醚、無水乙醇、濃硫酸、苯酚均為分析純（成都科龍化工）；③中藥粉碎機（天津泰斯特，F(xiàn)W177）、數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器，KQ-250DB）、紫外可見分光光度計（上海美普達儀器，UV-3200掃描型）、高速冷凍離心機（美國TS，Sorval ST16）和凍干機（Heto Power Dry PL3000）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化，RE-52AA）和循環(huán)水真空泵（SHZ-Ⅲ）、恒溫鼓風干燥箱（上海一恒，101-4）、數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州澳華，HH-4）、電子天平（北京賽多利斯）。

1.2 實驗操作

1.2.1 蛋白與多糖的提取工藝流程

①原料預(yù)處理。將川明參渣使用石油醚，行2次索氏回流脫脂處理，每次6小時，然后放置在50℃的恒溫環(huán)境中烘干了，待其質(zhì)量恒定后粉碎，用80目篩進行過濾。②同步提取水溶性蛋白和堿溶性多糖。取5克川明參粉，按照一定比例加入pH和氫氧化鈉溶液，設(shè)置超聲功率、溫度和提取時間之后，采用冷凍離心機對混合液進行離心處理，過濾后，取上清液。在上清液中添加鹽酸溶液，調(diào)節(jié)pH，直至達到川明參蛋白的等電點。然后再次離心，分離沉淀和清液，對沉淀復(fù)溶，使其為中性，即pH=7，行真空冷凍干燥后，即可獲取川明參蛋白。清液行減壓濃縮操作，時期體積減少3/4，加入無水乙醇，使含醇量達到80%，在4℃環(huán)境中放置24小時，析出沉淀，經(jīng)離心、沉淀復(fù)溶和真空冷凍干燥，獲取川明參堿提多糖。按照1/40配置固體殘渣，在140W和75℃環(huán)境中，提取45分鐘，按照上述步驟對提取液行過濾、減壓和濃縮操作，得到川明參水提多糖。

1.2.2 抗氧化性測定方法

采用苯酚-硫酸法對川明參中的多糖含量進行檢測，將葡萄糖作為標準品，繪制出相關(guān)的標準曲線，測量多糖的含量。川明參中蛋白的含量則采用考馬斯亮藍染色法進行檢測，川明參渣中總蛋白的含量則按照GB5009.5-2010的規(guī)定，采用微量凱適定氮法進行檢測。將提取液中多糖的含量作為總多糖含量，同時根據(jù)蛋白和多糖的純度，粗蛋白和粗多糖中的蛋白和多糖含量進行計算，將兩者計算所得的結(jié)果，再對粗蛋白干品中蛋白質(zhì)量和粗多糖干品中多糖質(zhì)量與原料質(zhì)量的比值進行計算。[2]

上述操作完成之后，通過實驗確定川明參蛋白的等電點，對超聲輔助提取工藝參數(shù)的影響因素進行單因素實驗，并在此基礎(chǔ)上進行響應(yīng)面實驗，檢測DPPH自由基的清除能力和總還原能力。

2 實驗結(jié)果和分析

經(jīng)上述各指標實驗分析可知，采用超聲輔助提取工藝對川明參中的蛋白和多糖進行同時提取時，最佳的工藝參數(shù)具體如下：最佳超聲功率為255W，最佳超聲時間為38分鐘，最佳料液比為1：20，最佳超聲溫度為49℃。在上述工藝條件下，川明參中的蛋白所得率為（24.17±0.84）mg/g，多糖的所得率為（25.92±0.67）%。

通過方差分析，確定不同因素對蛋白與多糖所得率的影響程度，結(jié)果顯示，超聲功率、超聲功率和液料比的交互作用等因素，都會對蛋白和多糖的所得率產(chǎn)生較大的影響。

超聲輔助提取工藝同時提取蛋白和多糖具有顯著優(yōu)勢，能夠有效避免川明參蛋白總含有量相對較低而導(dǎo)致單獨提取成本較高的問題，有助于提高原料的可用率，降低成本。同時，這種提取方法操作簡單，還能夠縮短提取時間，有效提高蛋白和多糖的所得率，有利于川明參資源的綜合利用，為其多糖和蛋白的進一步開發(fā)利用提供參考。[3]

（作者單位：解放軍第184醫(yī)院）

[1]顏靜,劉繼,熊亞波,等. 川明參不同部位主要營養(yǎng)成分及氨基酸組成分析[J]. 食品科學(xué),2015,01（34）:240-244.

[2]董紅敏,李路,沈麗雯,等.川明參多糖及蛋白組成分析[J]. 食品工業(yè)科技,2015,17（20）:366-370.

[3]陳丹丹,彭成. 川產(chǎn)道地藥材川明參的研究進展[J].中國藥業(yè),2011,03（11）:1-2.