□張景艷 廊坊市食品檢驗(yàn)所

HPLC法測(cè)定食品中的葉黃素含量

□張景艷 廊坊市食品檢驗(yàn)所

葉黃素是存在食物中的色素，對(duì)人體健康有很大作用，通過(guò)研究食物中葉黃素的含量，近一步了解各種食物功能。高效液相色譜法是測(cè)定葉黃素的有效方法，不同種色素的波長(zhǎng)和極性存在差異，高效液相色譜正是根據(jù)這種差異來(lái)測(cè)定葉黃素的含量。葉黃素中存在著幾種同分異構(gòu)體，在高效液相色譜法測(cè)定葉黃素中會(huì)將這幾種同分異構(gòu)體分別檢測(cè)出來(lái)，但是本文只需要檢測(cè)食物中葉黃素整體的含量，所以不用顧慮同分異構(gòu)體的影響。

葉黃素又稱(chēng)胡蘿卜素，廣泛存在于蔬菜、水果和其他的食物中，人們通過(guò)進(jìn)食這些食物來(lái)補(bǔ)充體內(nèi)的葉黃素，進(jìn)而維持身體健康。據(jù)研究葉黃素的主要功能是抗氧化保持身體的年輕狀態(tài)，還可以抵抗血管的硬化以及抗癌等功能，其中最主要的功能是保護(hù)眼睛，預(yù)防失明和視力下降。為了解各個(gè)食物中所含葉黃素的含量，筆者對(duì)高效液相色譜法測(cè)定食物中葉黃素含量進(jìn)行研究。

關(guān)于高效液相色譜法

高效液相色譜法（HPLC）是在經(jīng)典的色譜基礎(chǔ)上添加了氣相色譜的理論，技術(shù)方面在普通的流動(dòng)兩側(cè)加入高壓，使同種物質(zhì)在高強(qiáng)度的壓力作用下進(jìn)入相同的色譜柱，這個(gè)色譜柱中添加的是特殊類(lèi)型的粒子，可以有效識(shí)別相應(yīng)成分。高效液相色譜法的主要優(yōu)勢(shì)為高壓、高速、高敏感性和高靈敏度，正是高效液相色譜法的這些優(yōu)勢(shì)才能用于測(cè)定食物中葉黃素的含量。需要注意的是，葉黃素在高溫的條件下容易發(fā)生構(gòu)象改變，因此，在處理葉黃素時(shí)需要在低溫環(huán)境下進(jìn)行。

測(cè)定方法

選取的設(shè)備和試劑

必備的設(shè)備為高效液相色譜儀器、美國(guó)公司的分光光度計(jì)和二極管檢測(cè)設(shè)備，使用的試劑為甲醇、乙醚、石油醚、乙醇和幾種烷類(lèi)物質(zhì)等，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的使用率要求為超高純度的水。以上設(shè)備和試劑準(zhǔn)備好后，需要配制葉黃素的標(biāo)準(zhǔn)溶液。首先將所要測(cè)量的食物融化成液體，放置在一定條件下，防止變質(zhì)。然后將標(biāo)準(zhǔn)的葉黃素5 mg放入100 mL容量瓶中，采用乙醇溶解，保持一定濃度后密封。1 d后，抽取葉黃素的乙醇儲(chǔ)備液，制成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用二極管和高效液相色譜儀器對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，以保證該溶液的準(zhǔn)確性。

調(diào)節(jié)色譜和處理樣品

不同顏色所對(duì)應(yīng)不同的元素，本文主要測(cè)定的是葉黃素，因此在液相色譜中需要調(diào)節(jié)一下色素的波長(zhǎng)，設(shè)置為葉黃素波長(zhǎng)的標(biāo)準(zhǔn)，采用甲醇和醚類(lèi)的流動(dòng)相，通過(guò)不同梯度來(lái)洗脫其他雜志留取葉黃素。測(cè)定葉黃素的標(biāo)準(zhǔn)為1 mL/min的流速、450 nm的波長(zhǎng)。樣品的前期處理需要在一定條件下進(jìn)行，要求高度閉關(guān)或需要紫外線的過(guò)濾燈光來(lái)處理，其主要目的是防止葉黃素發(fā)生結(jié)構(gòu)改變。將要測(cè)定的食物研磨成粉，稱(chēng)取2 g加入10 mL的高純水中溶化，如果所要研究的食物為液態(tài)吸取10 g即可，將樣本放置于離心管中，在向管內(nèi)放置5 mL的四氫呋喃溶液，混勻，將乙醇溶液放置混合液中進(jìn)行震蕩1 min，待充分反應(yīng)后放入醚類(lèi)的提取液10 mL，封好置于儀器中離心處理。待到一定時(shí)間后，將溶液取出再進(jìn)行上述步驟重復(fù)提取，將最終的提取液在氮?dú)猸h(huán)境下吹干，再次采用溶液溶解置于容器中，將溶液放置在高效液相色譜容器中進(jìn)行葉黃素的分析。

結(jié)果分析

溶液中的葉黃素在高效液相色譜儀的作用下與其他成分分離進(jìn)入到相應(yīng)的色譜柱中，測(cè)量相應(yīng)色譜柱中葉黃素的含量，就可以知道含有葉黃素的量。高效液相色譜儀是近些年來(lái)應(yīng)用十分廣泛的儀器，主要用于科學(xué)研究中，對(duì)我國(guó)的科學(xué)事業(yè)起著重要的推動(dòng)作用。葉黃素是廣泛存在于食物中的一種對(duì)人體有益的色素，對(duì)各種食物中葉黃素含量的測(cè)定有利于人們提取葉黃素，還可以通過(guò)食療的方法治療某些疾病。高效液相色譜儀是測(cè)量食物中葉黃素含量的有效方法，測(cè)量的步驟比較復(fù)雜，需要在一定條件下由專(zhuān)業(yè)人士進(jìn)行，為了保障結(jié)果的準(zhǔn)確性，工作人員要嚴(yán)格按照要求進(jìn)行。葉黃素存在同分異構(gòu)體，現(xiàn)階段在測(cè)定葉黃素中主要測(cè)定的是全反式結(jié)構(gòu)。因此，在結(jié)果上可能存在一定的誤差，但是這種誤差非常小，在允許的范圍之內(nèi)。

結(jié)束語(yǔ)

高效液相色譜法是測(cè)定食物中各種營(yíng)養(yǎng)成分的有效方法，本文主要研究其測(cè)定葉黃素的方法，主要從準(zhǔn)備物品、測(cè)定的步驟、和處理方法等幾個(gè)方面進(jìn)行了簡(jiǎn)單研究。希望通過(guò)本文的研究能夠幫助相關(guān)的工作人員提高其檢測(cè)的準(zhǔn)確性，同時(shí)是工作人員在使用高效液相色譜法測(cè)定相關(guān)物質(zhì)時(shí)能更加熟練。