孫 婷，姜建國(guó)，張廣欽

（1．河北省藥品檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊 050011； 2．中國(guó)藥科大學(xué)臨床藥學(xué)教研室，江蘇 南京 210009）

芍藥甘草湯的鎮(zhèn)痛抗炎作用研究

孫 婷1，姜建國(guó)1，張廣欽2

（1．河北省藥品檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊 050011； 2．中國(guó)藥科大學(xué)臨床藥學(xué)教研室，江蘇 南京 210009）

目的 研究芍藥甘草湯的鎮(zhèn)痛和抗炎作用，探討藥物間的相互作用。方法 采用二甲苯致小鼠耳腫脹，蛋清致小鼠足腫、熱板法、醋酸扭體法。結(jié)果 芍藥甘草湯顯著延長(zhǎng)小鼠熱板法的痛閾值，降低醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)；抑制二甲苯所致小鼠炎癥，但對(duì)蛋清誘導(dǎo)的炎癥無(wú)效；芍藥的作用類似于芍藥甘草湯，但藥效較弱；甘草無(wú)明顯的抗炎鎮(zhèn)痛抗炎作用。結(jié)論 甘草芍藥湯有明顯抗炎、鎮(zhèn)痛作用，其與甘草提高芍藥的作用有關(guān)。

芍藥甘草湯；鎮(zhèn)痛；抗炎

芍藥甘草湯為常見(jiàn)的經(jīng)典名方(以下簡(jiǎn)稱本方)，源于醫(yī)圣張仲景的《傷寒論》，主治經(jīng)筋攣急、脘腹疼痛等癥[1]。本方由芍藥、甘草組方，藥少而力專，當(dāng)屬治痛第一方。甘草別名甜草根、密草，來(lái)源于豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch．的根及根莖，主治脾胃虛弱、倦怠乏力、心悸氣短、咳嗽痰多，可緩解藥物毒性?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究認(rèn)為[2]，甘草有鎮(zhèn)靜、抑制末梢神經(jīng)的作用，可直接作用于平滑肌和骨骼肌而使其弛緩，消除攣急。白芍別名杭芍、亳芍、川芍，來(lái)源于毛茛科植物芍藥White Paeony Root．的根，可平肝止痛、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗，主治頭痛眩暈、脅痛、腹痛、四肢攣痛、血虛萎黃、月經(jīng)不調(diào)、自汗、盜汗。現(xiàn)代藥理學(xué)研究認(rèn)為，白芍對(duì)疼痛中樞和脊髓反射弓有鎮(zhèn)靜作用[2]。本方對(duì)中樞性、末梢性橫紋肌的攣急均有鎮(zhèn)靜作用[3]。此外，甘草芍藥湯治療小兒腹性癲癇，特別是對(duì)肝脾不和、氣血失調(diào)致胸脅不適，脘腹拘急疼痛，手足攣急等癥尤為有效，使之成為治療臨床各科疾病引起疼痛的首選方劑。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，酸敏感離子通道（ASICs）參與疼痛反應(yīng)，是鎮(zhèn)痛藥作用的一個(gè)新靶點(diǎn)[4]。本研究中應(yīng)用不同的鎮(zhèn)痛模型，探討了本方的作用機(jī)制，分別比較甘草芍藥湯與各單味藥的鎮(zhèn)痛效果，為在酸敏感離子通道上研究其作用機(jī)制提供參考。

1 材料

1．1 動(dòng)物、藥品與試劑

小鼠，昆明種，體重18～22 g，雌性，由中國(guó)藥科大學(xué)動(dòng)物房提供白青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)，合格證號(hào)為SCXK(蘇）2004－0018，飼養(yǎng)條件為溫度18～24℃，相對(duì)濕度70%。炙甘草和生白芍均購(gòu)于江蘇省藥材公司，經(jīng)中藥學(xué)院禹志領(lǐng)副教授鑒定確認(rèn)。試藥生產(chǎn)批號(hào)為060318；二甲苯（分析純，南京化學(xué)試劑廠，批號(hào)910911）；冰醋酸（分析純，南京化學(xué)試劑廠）；生理鹽水自配。

1．2 方藥提取

取藥材，置圓底燒瓶，加水浸漬12 h，回流提取2次，每次1 h，合并濾液，加熱濃縮至相當(dāng)于每1 mL含1．08 g原藥材，得單方藥。取甘草芍藥湯（生白芍、炙甘草組方），按2∶1比例配成處方，置圓底燒瓶，加水浸漬12 h，回流提取2次，每次1 h，合并濾液，加熱濃縮至相當(dāng)于每1 mL含1．08 g原藥材，得復(fù)方藥。

2 方法與結(jié)果

2．1 各劑量本方對(duì)小鼠熱板法致痛的影響

參照文獻(xiàn)[5]，將小鼠放入恒溫水浴燒杯中，溫度控制在(55±5)℃，記錄自放入燒杯至出現(xiàn)舔足所需時(shí)間，作為該鼠痛閾值。凡痛閾小于5 s或大于30 s或跳躍者棄之不用。篩選出小鼠40只，隨機(jī)分為生理鹽水組(0．2 g／mL)、低劑量組(0．093 g／mL)、中劑量組(0．0186 g／mL)、高劑量組(0．37 g／mL)，各10只。每組每日灌胃1次，連續(xù)5 d，與末次給藥30，60，90，120 min后，分別記錄疼痛反應(yīng)時(shí)間，測(cè)定不同時(shí)間各鼠痛閾平均值，計(jì)算用藥后痛閾提高的百分率。數(shù)據(jù)分析采用 t檢驗(yàn)觀察組間差異。結(jié)果見(jiàn)表1。可見(jiàn)，末次給藥后1 h，芍藥甘草湯對(duì)延長(zhǎng)小鼠的痛閾值達(dá)到最大效果，從而可選原藥材2 g／kg作為以下試驗(yàn)的給藥劑量。

表1 各劑量甘草芍藥湯對(duì)小鼠熱板法痛閾的影響（s，s，n＝10）

表1 各劑量甘草芍藥湯對(duì)小鼠熱板法痛閾的影響（s，s，n＝10）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0．05，＃P＜0．01。下表同。

組別給藥后給藥前生理鹽水組低劑量組中劑量組高劑量組20．29±12．71 15．75±2．83 25．73±7．06 20．83±6．71 30 min 22．55±8．15 35．97±36．89 67．72±48．81＃58．28±33．72＃60 min 33．81±17．29 48．26±50．31 63．56±47．02*69．48±43．54＃90 min 27．63±16．41 49．13±29．3*78．92±41．55＃83．78±41．75＃120 min 30．75±18．81 41．95±21．14 82．35±30．73＃78．48±35．55＃

2．2 各劑量本方對(duì)小鼠冰醋酸致痛作用的影響

取小鼠40只，雌性，分組同2．1項(xiàng)下方法，連續(xù)灌6 d，于末次給藥后60 min，各鼠腹腔注射0．6% 醋酸溶液每10 g體重0．1 mL，觀察并記錄注射醋酸溶液后20 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng) (腹部收縮內(nèi)凹，伸展后肢，臀部抬高，蠕行)的次數(shù)及時(shí)間，計(jì)算藥物的鎮(zhèn)痛百分率。抑制率(%)＝(對(duì)照組平均扭體次數(shù)－給藥組平均扭體次數(shù))／對(duì)照組平均扭體次數(shù)×100%。數(shù)據(jù)組間差異采用 t檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表2。可見(jiàn)，甘草芍藥湯各劑量對(duì)冰醋酸小鼠扭體反應(yīng)均有明顯的抑制作用。

表2 甘草芍藥湯對(duì)冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響（n＝10）

2．3 本方及各組分對(duì)熱刺激致痛的影響

將2．1項(xiàng)下篩選的小鼠40只，隨機(jī)分為生理鹽水組(0．2 g／mL)、甘草組(0．36 g／mL)、白芍組(0．73 g／mL)、芍藥甘草湯組(1．08 g／mL)，各10只。每組每日灌胃1次，連續(xù)5 d，末次給藥1 h后，測(cè)定疼痛的反應(yīng)時(shí)間。方法同2．1項(xiàng)。結(jié)果見(jiàn)表3?？梢?jiàn)，甘草芍藥湯中甘草對(duì)延長(zhǎng)小鼠的痛閾幾乎沒(méi)有作用，主要起作用的為生白芍，在末次給藥后1 h可顯著抑制小鼠熱敏感疼痛。

表3 甘草芍藥湯中單、復(fù)方對(duì)小鼠熱板法疼痛閾的影響（s，s，n＝10）

表3 甘草芍藥湯中單、復(fù)方對(duì)小鼠熱板法疼痛閾的影響（s，s，n＝10）

給藥后甘草組白芍組芍藥甘草湯組18．67±6．36 15．47±6．14 18．62±6．92 n．80 22．33±7．11 43．32±40．85 65．29±32．90＃60 min 17．55±5．03 19．12±6．83 39．05±31．46*50．44±25．44＃90 min 16．70±4．12 20．36±5．33 38．49±28．14*53．38±25．91＃120 min 17．37±4．52 18．93±7．31 41．38±32．34*65．68±32．45＃

2．4 本方及各組分冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

取小鼠40只，分組同2．3項(xiàng)下方法，每組灌胃劑量相同，每日灌胃1次，連續(xù)灌6日，于末次給藥后60 min，各鼠腹腔注射0．6% 醋酸溶液每10 g體重0．1 mL，觀察并記錄注射醋酸溶液后20 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)，方法同2．2項(xiàng)。結(jié)果見(jiàn)表4。可見(jiàn)，甘草芍藥湯中白芍與復(fù)方均對(duì)冰醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)有明顯抑制作用，但復(fù)方更強(qiáng)烈，表明甘草與白芍復(fù)方配伍可增強(qiáng)對(duì)小鼠扭體疼痛的抑制作用。

表4 甘草芍藥湯中單、復(fù)方對(duì)冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響（n＝10）

2．5 本方及各單味藥對(duì)二甲苯致炎作用的影響

參照文獻(xiàn)[5]，取小鼠40只，分組同2．3項(xiàng)下方法。每組每日灌胃1次，連續(xù)5 d，末次給藥30 min后，用微量進(jìn)樣器于每只小鼠右耳內(nèi)外兩面涂100%二甲苯20 μL致腫，左耳不涂為正常耳。1 h后脫頸椎處處死小鼠，用9 mm打孔器沖下左耳和右耳同一部位的圓片，于分析天平上稱重。右耳質(zhì)量減去左耳為腫脹度，用 t檢驗(yàn)比較組間差異的顯著性，并按抑制率（%）＝（對(duì)照組腫脹度－用藥足腫脹度）／對(duì)照組腫脹度×100% 計(jì)算。結(jié)果見(jiàn)表5。可見(jiàn)，芍藥甘草湯組對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹有顯著性抑制作用，白芍組對(duì)其有抑制作用，表明甘草與白芍配伍可增強(qiáng)抑制二甲苯致小鼠耳腫脹。

表5 甘草芍藥湯及各單味藥對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（n＝10）

2．6 本方及各單味藥對(duì)蛋清致炎作用的影響

取昆明種小鼠40只，分組如2．3項(xiàng)下方法。每組每日灌胃1次，連續(xù)灌胃5 d，最后1次給藥后1 h于每鼠右后跖皮下注射（從足掌心向踝關(guān)節(jié)方向進(jìn)針）10%雞蛋清溶液50 μL，3 h后脫頸處死，沿踝關(guān)節(jié)的標(biāo)記線剪下兩組，稱取質(zhì)量，按抑制率(%)＝（右足質(zhì)量－左足質(zhì)量）／左足質(zhì)量×100%計(jì)算。計(jì)量資料采用 t檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表6?？梢?jiàn)，甘草芍藥湯對(duì)蛋清引起的小鼠后足趾腫脹有抑制作用，但結(jié)果并不明顯。

表6 甘草芍藥湯對(duì)蛋清致小鼠后足趾腫脹的影響（n＝10）

3 討論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，在熱板和醋酸扭體疼痛模型中，甘草無(wú)明顯鎮(zhèn)痛作用，芍藥甘草湯有明顯鎮(zhèn)痛作用，芍藥也有明顯鎮(zhèn)痛效果，但明顯弱于芍藥甘草湯，說(shuō)明甘草與芍藥配伍后能明顯增強(qiáng)芍藥的鎮(zhèn)痛作用。在二甲苯和雞蛋清致炎模型中，芍藥甘草湯有明顯的抗炎作用，甘草和芍藥分別也顯示了不同的抗炎作用，但與芍藥甘草湯相比，兩藥合用無(wú)明顯的抗炎作用。且該藥的藥物組成經(jīng)長(zhǎng)期臨床驗(yàn)證，療效確切[6]。

藥物之間的配伍關(guān)系可歸納總結(jié)為7個(gè)方面，稱為“七情”。根據(jù)七情理論，在功效方面有某種共性的藥物配合應(yīng)用，輔藥能提高主藥的療效，稱為相使配伍。據(jù)此，芍藥與甘草的配伍屬相使配伍。在許多著名方劑中常有二者配伍，以協(xié)同增效，如芍藥甘草湯、芍藥湯、小建中湯等，可養(yǎng)血益陰、緩肝和脾、緩急止痛，在臨床也有較好療效[7]，常用于炎癥性疾病和各種痛癥的治療[8]。張保國(guó)等[9]的研究顯示，日本將芍藥甘草湯作為漢方鎮(zhèn)痛的有效方劑，不論寒熱虛實(shí)皆可應(yīng)用。近年來(lái)研究認(rèn)為[10]，在一些外傷、水腫及其他一些疾病引起的疼痛發(fā)應(yīng)時(shí)，往往是由于組織損傷局部產(chǎn)生、釋放前列腺素(PG)、白三烯、組胺等致炎致痛因子，其中PG是很強(qiáng)的致炎致痛因子。芍藥甘草湯既可顯著鎮(zhèn)痛，又可明顯降低動(dòng)物血清和脊髓中PGE2濃度，提示抑制PG合成是芍藥甘草湯的鎮(zhèn)痛機(jī)制之一。此外，一氧化氮(NO)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新第2信使神經(jīng)遞質(zhì)，是細(xì)胞間信息傳遞的重要調(diào)節(jié)因子。其發(fā)揮作用的機(jī)制之一是提高靶細(xì)胞的環(huán)鳥苷酸(cGMP)水平，即NO－cGMP途徑。芍藥甘草湯的鎮(zhèn)痛部位既在外周神經(jīng)末梢，亦可能在中樞神經(jīng)，其鎮(zhèn)痛作用機(jī)制可能與一氧化氮有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，甘草與芍藥配伍后明顯增強(qiáng)鎮(zhèn)痛作用，這兩種模型均與酸敏感離子通道的激活有關(guān)，且抗炎作用無(wú)明顯的增強(qiáng)作用。因此推測(cè)，甘草與芍藥配伍對(duì)鎮(zhèn)痛的增強(qiáng)作用，可能是通過(guò)作用與酸敏感離子通道上的不同部位，從而改變酸敏感離子通道的開放，達(dá)到增強(qiáng)對(duì)酸敏感離子通道的阻斷作用，從而增加鎮(zhèn)痛效果，其作用與抗炎作用無(wú)關(guān)。

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Analgesic and Anti－Inflammatory Efficacy of Paeornia and Glycyrrhiza Dicoction

Sun Ting1,Jiang Jianguo1,Zhang Guangqin2
(1．Hebei Institute for Food and Drug Control,Shijiazhuang,Hebei,China 050011; 2．Department of Clinical Pharmacy,China Pharmaceutical University,Nanjing,Jiangsu,China 210009)

Objective To study the analgesic and anti－inflammation efficacy of the Paeornia and Glycyrrhiza Dicoction and to investigate the interaction between drugs．Methods Hot plate and writhing test were applied to observe analgesic effect in mice;the models of the ear swilling and paw edema of mice were adopted to assay anti－inflammation．Results The Paeornia and Glycyrrhiza Dicoction obviously prolonged pain latency on hot plate,decreased the writhing response and inhibited the paw edema of mice,but no effect on the pedal swelling rate induced by egg white．Paeornia showed similar to effect of Paeornia and Glycyrrhiza Dicoction,but its efficacy was weak．Glycyrrhiza had not the analgesic effect,but it could enhance the analgesic effect of paeornia．Conclusion Paeornia and Glycyrrhiza Dicoction has anti－inflammation and analgesic efficacy Glycyrrhiza elevates the analgesic effect of paeornia．

Paeornia and Glycyrrhiza Dicoction;analgesic efficacy;anti－inflammation

R285．5；R289．5

A

1006－4931(2016)03－0018－03

孫婷（1983－），女，碩士研究生，主管藥師，主要從事藥品檢驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究工作，（電子信箱）122547652＠qq．com；張廣欽，主要從事臨床藥學(xué)工作，本文通訊作者，（電子信箱）njzhanggq＠163．com。

2015－02－05；

2015－06－19)