汪玉玲，李茂恩，董克江，劉濤，史亞?wèn)|，陳容前（.滁州城市職業(yè)學(xué)院，安徽滁州9000；.滁州市中心血站，安徽滁州9000；.安徽菊泰滁菊草本科技有限公司，安徽滁州9000）

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滁菊水提物抑制高脂飲食誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激

汪玉玲1，李茂恩2，董克江1，劉濤2，史亞?wèn)|3，陳容前1
（1.滁州城市職業(yè)學(xué)院，安徽滁州239000；2.滁州市中心血站，安徽滁州239000；3.安徽菊泰滁菊草本科技有限公司，安徽滁州239000）

摘要：探討滁菊水提物對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的內(nèi)臟沉積及氧化應(yīng)激的影響。將3周齡ICR小鼠[（10±2）g]隨機(jī)分為3組，每組7只：對(duì)照組（飼喂基礎(chǔ)飼料），高脂飲食組（飼喂高脂飼料）、滁菊干預(yù)組（飼喂高脂飼料+飲用滁菊水提物）。飼養(yǎng)8周后測(cè)量體重，處死后取附睪、腎周脂肪墊稱重計(jì)算脂體比，收集血清樣本并檢測(cè)血清丙二醛（MDA）、總谷胱甘肽（GSH）水平及超氧化物岐化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）酶活性。與對(duì)照組相比，高脂組脂體比、血清MDA水平顯著增高，而GSH水平及SOD、CAT活性則顯著降低。與高脂組相比，滁菊干預(yù)組脂體比、血清MDA水平均顯著降低，而GSH水平及SOD、CAT活性則顯著升高。結(jié)果表明，高脂飲食可誘導(dǎo)內(nèi)臟脂肪沉積及氧化應(yīng)激，滁菊干預(yù)可通過(guò)保護(hù)抗氧化系統(tǒng)抑制高脂飲食誘發(fā)的以上危害。

關(guān)鍵詞：滁菊；內(nèi)臟脂肪沉積；氧化應(yīng)激；抗氧化

肥胖癥是一種慢性流行性疾病，常伴有糖代謝、脂代謝紊亂等并發(fā)癥的發(fā)生，嚴(yán)重威脅著人們的健康[1]。研究發(fā)現(xiàn)，成人或兒童肥胖者體內(nèi)的氧化標(biāo)志物水平是升高的，而抗氧化分子及抗氧化酶的活力則是降低的，表明肥胖癥患者存在全身性氧化應(yīng)激[2-3]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖模型鼠肝、腎、心各臟器均存在氧化應(yīng)激損傷[4]。因此，肥胖可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，大量的活性氧或氮族通過(guò)對(duì)體內(nèi)各種生物分子進(jìn)行化學(xué)性修飾而改變它們的功能，進(jìn)而參與了肥胖癥及并發(fā)癥的發(fā)病進(jìn)程[3，5-6]。目前，對(duì)于控制肥胖及其并發(fā)癥的發(fā)病率和死亡率的措施很多，而抗氧劑補(bǔ)充療法是預(yù)防此類疾病的可選方案之一。我們先前的研究已經(jīng)證實(shí)，滁菊水提物可拮抗高脂飲食誘導(dǎo)的高血糖癥[7]及脂代謝紊亂癥[8]，據(jù)此我們推測(cè)滁菊的這種有益效果可能與其抗氧化作用有關(guān)。因此，本研究，我們將從滁菊對(duì)抗氧化系統(tǒng)的影響來(lái)探討其抗氧化功能，最終為開(kāi)發(fā)滁菊用以預(yù)防肥胖癥及其并發(fā)癥的功效提供一定的理論參考。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)用品

MDA、GSH、SOD及CAT試劑盒均購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所。

1.2主要儀器

SF-400A型電子天平：上海志榮電子科技公司；MK3型酶標(biāo)儀：芬蘭雷勃；CHEMIX-800型全自動(dòng)生化分析儀：日本sysmex。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性3周齡ICR小鼠21只，體重（10±2）g購(gòu)自南京青龍山實(shí)驗(yàn)動(dòng)物場(chǎng)。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1實(shí)驗(yàn)試劑的配制

高脂飼料的配制：按配方（基礎(chǔ)飼料100 g；奶粉10 g；豬油10 g；白糖10 g；雞蛋黃1個(gè)）配制高脂飼料。

添加VE的高脂飼料配制：取5?；萜丈烊痪S生素軟膠囊（每粒含3.8 mgVE）加入到500 g配好的高脂飼料中，配成濃度為38 mg/kg的富含VE的高脂飼料。

滁菊水提液的配制：滁菊花粉碎后，按料液比1∶30（g/mL）加入蒸餾水，經(jīng)微波136 W處理14 min，轉(zhuǎn)至水浴鍋70℃浸提30 min，過(guò)濾制成滁菊水提物原液。取3份20 mL原液，置于不同坩堝中干燥，得到提取物后并稱重，計(jì)算出原液提取物平均濃度（約為1.33%）。原液密封好置于冰箱4℃保存，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，再將原液配制成0.02 %、0.04 %、0.08 %不同濃度的滁菊飲水供小鼠飲用。

1.4.2實(shí)驗(yàn)小鼠分組及處理

雄性3周齡ICR小鼠21只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，空腹稱重，隨機(jī)分成3組，每組7只：（1）對(duì)照組（control，飼喂基礎(chǔ)飼料）；（2）高脂組（HF，飼喂高脂飼料）；（3）滁菊干預(yù)組（HF+CJ，飼喂高脂飼料+飲用濃度為0.04 %的滁菊水提物飲水）；飼喂8周末測(cè)空腹體重。處死后剝離附睪、腎周、大腸系膜脂肪墊并稱重。實(shí)驗(yàn)期間，動(dòng)物飼養(yǎng)在溫度為（21±2）℃，濕度（30%~70%），光照周期12 h/12 h的環(huán)境下，動(dòng)物自由采食和飲水。

1.4.3脂體比計(jì)算公式

脂體比=（[附睪脂肪濕重+腎周脂肪濕重）/體重]× 100 %

1.4.4氧化應(yīng)激及抗氧化酶檢測(cè)

小鼠禁食12 h后，乙醚麻醉，斷頭取血，將血液置于干燥清潔的試管中靜置2 h后，3 000 r/min離心20 min，分離出血清，根據(jù)相關(guān)試劑盒的操作說(shuō)明書(shū)，分光光度計(jì)法分別檢測(cè)血清MDA、GSH水平及CAT、SOD酶活性。

1.4.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2結(jié)果和分析

2.1滁菊干預(yù)對(duì)內(nèi)臟脂肪沉積的影響

為研究滁菊干預(yù)對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的內(nèi)臟脂肪沉積的影響，比較各組脂體比，見(jiàn)圖1。

圖1滁菊水提物對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的內(nèi)臟脂肪沉積的影響Fig.1 Effect of Chuju aqueous extract on ratio of fat to body mass

由圖1可知，高脂組脂體比較對(duì)照組顯著增加（P＜0.01），表明高脂飼料能誘導(dǎo)內(nèi)臟脂肪沉積。與高脂組相比，滁菊組脂體比則顯著降低（P＜0.01），表明滁菊可抑制高脂飲食促發(fā)的內(nèi)臟脂肪沉積。

2.2滁菊干預(yù)對(duì)氧化-還原狀態(tài)的影響

為了探討滁菊干預(yù)對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激的影響，我們通過(guò)測(cè)量血清丙二醛（MDA）及谷胱甘肽（GSH）水平以評(píng)價(jià)氧化應(yīng)激狀態(tài)，見(jiàn)圖2。

由圖2可知，與對(duì)照組相比，高脂組血清MDA顯著升高、GSH水平顯著降低，表明高脂飲食促進(jìn)氧化應(yīng)激；與高脂組相比，滁菊組MDA水平顯著降低，而GSH顯著升高；表明滁菊干預(yù)可改善高脂飲食誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激狀態(tài)。

圖2滁菊水提物干預(yù)對(duì)血清MDA、GSH水平的影響Fig.2 Effect of Chuju aqueous extract on serum levels of MDA and GSH

2.3滁菊干預(yù)對(duì)抗氧化酶的影響

為評(píng)價(jià)滁菊的抗氧化應(yīng)激狀態(tài)，是否與其保護(hù)抗氧化酶的活性有關(guān)，我們對(duì)各組的抗氧化酶：超氧化物歧化酶（SOD）及過(guò)氧化氫酶（CAT）的活性進(jìn)行檢測(cè)，見(jiàn)圖3。

由圖3可知，與對(duì)照組相比，高脂組血清SOD、CAT活性均顯著降低；與高脂組相比，滁菊組SOD、CAT活性均顯著升高；表明高脂飲食破壞抗氧化酶的活性，而滁菊干預(yù)則可以保護(hù)抗氧酶活性。

圖3滁菊水提物干預(yù)對(duì)血清SOD、CAT酶活性的影響Fig.3 Effect of Chuju aqueous extract on serum activities of SOD and CAT

3　討論

肥胖是一種全身性氧化狀態(tài)，傾向于發(fā)展成各種并發(fā)癥。肥胖發(fā)生的原因與能量過(guò)度攝入有關(guān)，當(dāng)能量攝入超過(guò)了機(jī)體自身的處理能力則引起能量失衡。過(guò)量的能量主要以脂肪的形式在脂肪細(xì)胞中不斷蓄積，脂肪細(xì)胞隨后肥大增生，最終功能受損。與對(duì)照組相比，高脂飲食組脂體比顯著增大。而與后者相比，滁菊干預(yù)組的脂體比則明顯減小，表明滁菊干預(yù)可抑制高脂飲食誘導(dǎo)的內(nèi)臟脂肪沉積（如圖1）。內(nèi)臟脂肪沉積與全身性氧化應(yīng)激有關(guān)[3]，脂肪的主要成分脂肪酸在氧化分解的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧[5]，從而造成全身各臟器的氧化應(yīng)激損傷。為探討滁菊對(duì)內(nèi)臟脂肪沉積造成的氧化應(yīng)激是否有改善作用，我們檢測(cè)了各組血清脂質(zhì)過(guò)氧化標(biāo)志物MDA的水平。與對(duì)照組相比，高脂組的MDA水平顯著升高，而與后者相比，滁菊干預(yù)組MDA水平則顯著降低。表明滁菊可通過(guò)抑制高脂飲食誘導(dǎo)的內(nèi)臟脂肪沉積改善氧化狀態(tài)。

氧化應(yīng)激是由于自由基的產(chǎn)生與機(jī)體的抗氧化能力的破壞之間失衡所致。機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)包括抗氧化分子（GSH等）及抗氧化酶（SOD、CAT等）。為了明確滁菊對(duì)氧化應(yīng)激的抑制作用是否與其增強(qiáng)機(jī)體抗氧化功能有關(guān)，我們檢測(cè)了血清GSH水平及SOD、CAT酶活力。與對(duì)照組相比，高脂飲食組GSH水平及SOD、CAT酶活力顯著降低，而滁菊干預(yù)組的以上指標(biāo)均得以恢復(fù)。表明滁菊可通過(guò)保護(hù)機(jī)體抗氧化功能預(yù)防長(zhǎng)期高脂飲食促發(fā)的氧化應(yīng)激。鑒于滁菊具有抑制脂肪沉積及抗氧化作用以及抗高血脂、抗高血糖效應(yīng)，我們有理由相信，滁菊水提物在預(yù)防肥胖癥及其并發(fā)癥中具有一定的開(kāi)發(fā)潛力，至于水提物中具體是何種有益成分發(fā)揮作用仍需進(jìn)一步研究。

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Aqueous Extract from Chrysanthemum Morifolium of Chuju Inhibited Oxidative Stress Induced by High-fat Diet

WANG Yu-ling1，LI Mao-en2，DONG Ke-jiang1，LIU Tao2，SHI Ya-dong3，CHEN Rong-qian1
（1. Chuzhou City Vocation College，Chuzhou 239000，Anhui，China；2. Chuzhou Center for Blood Station，
Chuzhou 239000，Anhui，China；3. Jutai Chuju Herbal Science and Technology Limited Company，Chuzhou 239000，Anhui，China）

Abstract：To explore the effects of aqueous extract from chrysanthemum morifolium of Chuju on visceral fat accumulation and oxidative stress induced by high-fat diet. Three-week old ICR mouse weighing [（10±2）g] were divided into three groups，seven for each group；groupⅠ：received normal diet，groupⅡ：received highfat diet，and groupⅢ：cotreated with high-fat diet and Chuju aqueous extract. All animals were fed for 8 weeks，and measured the body weight at the end，then separated the visceral fat pad and weighed it after sacrificing mouse to calculate the ratio of fat to body mass. Blood samples were taken for measurement of serum levels of MDA，GSH and the enzymatic activities of SOD，CAT. Compared by control，the high-fat diet group showed larger ratio of weight of visceral fat to body，higher serum MDA level，but lower level of GSH and reduced enzymatic activities of SOD and CAT；however，compared with the latter，the above effects of high-fat diet were reversed by exposure to aqueous extract of Chuju. Results described above suggest that high-fat diet could trigger visceral fat accumulation and oxidative stress which being inhibited with co-treatment of Chuju aqueous extract.

Key words：chrysanthemum morifolium of chuju；visceral fat accumulation；oxidative stress; antioxidant

收稿日期：2014-09-18

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.02.007

作者簡(jiǎn)介：汪玉玲（1976—），女（漢），高級(jí)講師，碩士研究生，主要從事藥理學(xué)研究。

基金項(xiàng)目：安徽高校省級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目（KJ2013Z241）