陳安平，黃勇軍，汪勝峰（浙江尖峰健康科技有限公司，浙江金華321000）

?

市售藍(lán)莓類產(chǎn)品的原花青素含量測(cè)定

陳安平，黃勇軍，汪勝峰
（浙江尖峰健康科技有限公司，浙江金華321000）

摘要：采用紫外分光光度法對(duì)市場(chǎng)上藍(lán)莓類產(chǎn)品中原花青素含量進(jìn)行測(cè)定，在546 nm處測(cè)定吸光度，試驗(yàn)表明原花青素在10μg/mL~150 μg/mL之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，認(rèn)為以藍(lán)莓為主要成分產(chǎn)品非常有必要標(biāo)示原花青素含量，原花青素可以作為藍(lán)莓類產(chǎn)品的質(zhì)量控制指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：藍(lán)莓；原花青素；紫外分光光度法

原花青素（Proanthocyanidins，簡(jiǎn)稱PC）是植物王國(guó)中廣泛存在的一大類多酚類化合物的總稱。這類化合物由不同數(shù)目的黃烷醇聚合而成，在無機(jī)酸存在和加熱處理下能產(chǎn)生紅色的花青素。原花青素具有極強(qiáng)的抗氧化活性，是一種良好的氧游離基清除劑和脂質(zhì)過氧化抑制劑，具有很強(qiáng)的抗氧化活性和自由基清除功能[1]。原花青素在體內(nèi)其抗氧化、清除自由基的能力是VE的50倍、VC的20倍，它能防治80多種因自由基引起的疾病，包括心臟病、關(guān)節(jié)炎等，還具有改善人體微循環(huán)功能[2]。與其它抗氧化劑不同的是，它能通過血腦屏障，直接保護(hù)大腦的神經(jīng)系統(tǒng)[3]。目前，原花青素已廣泛應(yīng)用于食品、藥品、化妝品等領(lǐng)域[4]。

藍(lán)莓，起源于北美，多年生灌木小漿果果樹，因果實(shí)呈藍(lán)色，故稱為藍(lán)莓。果實(shí)中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，被聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織列為人類五大健康食品之一[5]。特別是花青素與原花青素，可促進(jìn)視網(wǎng)膜細(xì)胞中視紫質(zhì)的再生成，可預(yù)防重度近視眼及視網(wǎng)膜剝離，并可增進(jìn)視力[6]。因?yàn)樗臓I(yíng)養(yǎng)價(jià)值，市場(chǎng)上出現(xiàn)了很多以藍(lán)莓為主要成分的食品。但由于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)定的過于粗糙，導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊，好壞無從分辨。筆者采用紫外可見分光光度法分析測(cè)定市售以藍(lán)莓類產(chǎn)品中原花青素的含量，并對(duì)藍(lán)莓為主要成分及藍(lán)莓為輔料的藍(lán)莓味產(chǎn)品原花青素含量進(jìn)行檢測(cè)對(duì)比，通過檢測(cè)原花青素含量控制市售藍(lán)莓類產(chǎn)品質(zhì)量的可行性進(jìn)行初步探索。

1主要材料、儀器設(shè)備及原理

1.1主要材料

藍(lán)莓凝膠糖果、藍(lán)莓果醬、藍(lán)莓草莓混合果汁、藍(lán)莓果汁（含原花青素26 mg/1 000 mL）、藍(lán)莓果汁（含原花青素3 mg/1 000 mL）、藍(lán)莓飲品、野生藍(lán)莓果肉飲料、藍(lán)莓酒、藍(lán)莓醋、藍(lán)莓餡餅：市售；藍(lán)莓凝膠糖果空白：根據(jù)藍(lán)莓凝膠糖果中配方除去藍(lán)莓成分制作。

原花青素標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.4 %）：天津尖峰天然產(chǎn)物研究開發(fā)有限公司；其它化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.2儀器設(shè)備

1.3試驗(yàn)原理

原花青素是含有兒茶素和表兒茶素單元的聚合物。原花青素本身無色，但經(jīng)過用熱酸處理后，可以生成深紅色的花青素離子，在546 nm處測(cè)定原花青素在水解過程中生成的花青素離子，吸光度與原花青素含量成正比，故可測(cè)定原花青素的含量[7]。

2　方法

2.1原花青素標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密稱取原花青素對(duì)照品10 mg，用甲醇溶解定容至于10 mL，制成1 mg/mL原花青素標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2試驗(yàn)溶液的制備

精密稱取硫酸鐵銨2.00 g，加2 moL/L鹽酸溶液溶解并稀釋至100 mL，搖勻，即為2.0 %硫酸鐵銨溶液；于100 mL容量瓶中加入約2/3的正丁醇，精密加入鹽酸5.0 mL，用正丁醇定容至刻度，即為5 %HCL/正丁醇溶液。

2.3供試品溶液的制備

檔案管理及保護(hù)部門的工作人員專業(yè)素養(yǎng)較差，檔案管理部門在進(jìn)行檔案管理及保護(hù)時(shí)，沒有選取有專業(yè)能力的工作人員，招聘的工作人員并沒有相關(guān)的工作經(jīng)驗(yàn)也沒有學(xué)習(xí)過專門的檔案管理及保護(hù)知識(shí)。這樣的現(xiàn)象不僅是對(duì)檔案保護(hù)的不負(fù)責(zé)，也是對(duì)檔案信息安全的不負(fù)責(zé)。

精密稱取藍(lán)莓凝膠糖果、藍(lán)莓凝膠糖果空白2 g，加溫水熔化定容至10 mL，精密吸取1 mL，用甲醇稀釋定容至10 mL。野生藍(lán)莓果肉飲料、藍(lán)莓草莓混合果汁，離心取上清液，用甲醇稀釋；藍(lán)莓果汁、藍(lán)莓飲品、藍(lán)莓醋用甲醇稀釋；藍(lán)莓果醬、藍(lán)莓餡餅用甲醇攪拌后離心，取上清液甲醇稀釋。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

分別精密吸取原花青素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1、0.25、0.5、1.0、1.5 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述溶液1 mL，加入6 mL 5 %鹽酸/正丁醇溶液、0.2 mL 2.0 %硫酸鐵銨溶液置具塞試管中，將試管瓶口密塞，置沸水浴中精確加熱40 min，冰浴冷卻15 min；用1 mL甲醇、6 mL 5 %鹽酸/正丁醇溶液和0.2 mL 2.0 %硫酸鐵銨溶液做空白，于546 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

2.5供試品中原花青素含量的測(cè)定

取供試品溶液各1 mL，以空白試劑為參比，按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定法，分別測(cè)定其吸光度值，計(jì)算樣品中原花青素的含量。

3　結(jié)果

3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程建立

用紫外分光光度計(jì)，以試劑空白參比，在546 nm波長(zhǎng)處測(cè)定對(duì)照品溶液吸光度。

以吸光度為縱坐標(biāo)，原花青素濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1原花青素標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 The standard curve of the Procyanidines

得其線性回歸方程式Y(jié)=3.594 2X+0.027，R2= 0.999 2，相關(guān)系數(shù)r=0.9996，表明原花青素在10μg/mL~ 150 μg/mL的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.2凝膠糖果空白原花青素測(cè)定結(jié)果

按上述原花青素含量測(cè)定方法，同時(shí)做3個(gè)重復(fù)測(cè)定，經(jīng)測(cè)定吸光度值分別為0.012、0.009、0.011，凝膠糖果空白為根據(jù)藍(lán)莓凝膠糖果中的其它成分定制，因此藍(lán)莓凝膠糖果中的其它成分，對(duì)原花青素檢測(cè)基本無干擾，本方法檢測(cè)專屬性強(qiáng)。

3.3穩(wěn)定性試驗(yàn)

取藍(lán)莓凝膠糖果測(cè)試溶液，以空白試劑為參比，按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定法，每隔10 min測(cè)定1次吸光度，觀測(cè)其穩(wěn)定性，結(jié)果表明在顯色60 min時(shí)間內(nèi)吸光度穩(wěn)定，結(jié)果見表1。

表1穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Table 1 The result of stability experimentation

3.4精密度試驗(yàn)

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg/mL）1 mL進(jìn)行精密度試驗(yàn)，連續(xù)進(jìn)行6次測(cè)定其吸光度，得RSD=0.61 %，RSD＜5 %，表明精密度好，結(jié)果見表2。

表2精密度試驗(yàn)結(jié)果Table 2 The result of precision experimentation

3.5重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次藍(lán)莓凝膠糖果，配制6份供試品溶液，與標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制測(cè)定方法相同，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算試樣中原花青素的含量，檢驗(yàn)該測(cè)定方法的重現(xiàn)性，得RSD=1.03 %，RSD＜5 %，表明重復(fù)性較好，結(jié)果見表3。

表3重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果Table 3 The result of reproducibility experimentation

3.6回收率試驗(yàn)

取藍(lán)莓凝膠糖果4 g，加溫水20 mL制成0.2 g/mL藍(lán)莓凝膠糖果溶液；取上述溶液1 mL 5份，分別加入0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL的濃度為1 mg/mL原花青素標(biāo)準(zhǔn)溶液，加甲醇溶解定容至10 mL。與標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制測(cè)定方法相同，分別測(cè)定其吸光度，計(jì)算回收率，結(jié)果見表4，樣品平均回收率均為101.43 %，RSD為1.74 %。

表4回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 4 The result of recovery rate experimentation

3.7方法的檢出限和定量限

重復(fù)測(cè)定空白試劑吸光度20次，計(jì)算空白試劑吸光度平均值為0.006；取1 mg/mL原花青素標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，用甲醇稀釋制成10 ug/mL低濃度貯備液；取上述溶液8、4、2、1、0.5 mL于10 mL量瓶中，制成一系列低濃度原花青素標(biāo)準(zhǔn)溶液，與標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制測(cè)定方法相同，分別測(cè)定其吸光度；取3倍、10倍空白試劑吸光度值的濃度作為方法的檢出限和定量限，并重復(fù)測(cè)定3次，結(jié)果見表5，原花青素的檢測(cè)限為4 μg/mL，定量限為10 μg/mL。

表5方法檢出限和定量限實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 5 The result of LOD and LOQ experimentation

3.8藍(lán)莓類產(chǎn)品原花青素含量測(cè)定

精密吸取樣品溶液1 mL，與標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制測(cè)定方法相同，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算試樣中原花青素的含量。各產(chǎn)品的原花青素檢測(cè)結(jié)果見表6。

表6各產(chǎn)品原花青素檢測(cè)結(jié)果Table 6 The Proanthocyanidins content in blueberry products

各產(chǎn)品原花青素含量檢測(cè)結(jié)果見圖2。

圖2原花青素含量Fig.2 Concentration of PC

4　結(jié)論

通過試驗(yàn)可知，原花青素濃度在10 μg/mL~150μg/mL范圍內(nèi)，用紫外分光光度法測(cè)定藍(lán)莓類產(chǎn)品中原花青素含量，適宜于藍(lán)莓類產(chǎn)品中的原花青素測(cè)定。用該法檢測(cè)藍(lán)莓類產(chǎn)品試驗(yàn)結(jié)果表明，以藍(lán)莓為主要成分的藍(lán)莓類產(chǎn)品原花青素檢出較高，藍(lán)莓凝膠糖果的原花青素含量最高為3.64 mg/g；而以藍(lán)莓為輔的藍(lán)莓味產(chǎn)品原花青素檢出很低，藍(lán)莓醋的原花青素檢出最低為0.03 mg/mL。因此，認(rèn)為藍(lán)莓為主要成分產(chǎn)品非常有必要標(biāo)示原花青素含量，通過檢測(cè)原花青素含量作為藍(lán)莓類產(chǎn)品的質(zhì)量控制指標(biāo)是可行的。

參考文獻(xiàn)：

[1]羊芹,杜泓璇,馬堯,等.柳樹葉的原花青素的抗氧化性研究[J].西南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2009,32(6):106-110

[2] Bakowska A,Kucharska A Z,Oszmianski J.The effects of heating,UV irradiation,and storage on stability of the anthocyanin-polyphenol copigment complex[J]. Food Chemistry,2003(81):349-355

[3]胡雅馨,李京,惠伯棣.藍(lán)莓果實(shí)中主要營(yíng)養(yǎng)及花青素成分的研究[J].食品科學(xué),2006,27(10):601-602

[4]張妍,吳秀香.原花青素研究進(jìn)展[J].中藥藥理與臨床,2011,27(6): 114-115

[5]聶飛,韋吉梅,文光琴.藍(lán)莓的經(jīng)濟(jì)價(jià)值及其在我國(guó)產(chǎn)業(yè)化發(fā)展中的前景探討[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(1): 117-119

[6]趙秀玲.藍(lán)莓的成分與保健功能的研究進(jìn)展[J].中國(guó)野生植物資源,2011,30(6):22

[7]黃雨三.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)[M].北京:清華同方電子出版社,2003:1214-1215

The Determination of Proanthocyanidins Content in Blueberry Products on the Market

CHEN An-ping，HUANG Yong-jun，WANG Sheng-feng
（Zhejiang Jianfeng Health Tech. Co.，Ltd.，Jinhua 321000，Zhejiang，China）

Abstract：To determine the content of（Proanthocyanidins）in blueberry products on the market by ultraviolet spectroscopy，absorbencies of samples were detected at 546 nm，the result indicated that there was a good linear relationship between the absorbency and the content of PC in the range of 10 μg/mL-150 μg/mL. It's suggested to label the content of PC and use it as a key indicator for blueberry products.

Key words：blueberry；proanthocyanidins；ultraviolet spectroscopy

收稿日期：2015-03-10

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.01.041

作者簡(jiǎn)介：陳安平（1984—），女（漢），工程師，碩士，主要從事保健食品、藥品的質(zhì)量控制。