陳曾紅， 何秀容， 李 江*

(1.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550002；2.貴州宜民中醫(yī)骨傷燒傷專科醫(yī)院,貴州貴陽(yáng) 550000)

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醫(yī)院制劑傷科靈膏含量測(cè)定

陳曾紅1， 何秀容2， 李 江1*

(1.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550002；2.貴州宜民中醫(yī)骨傷燒傷?？漆t(yī)院,貴州貴陽(yáng) 550000)

摘要[目的]建立傷科靈膏的高效液相色譜法含量測(cè)定方法。[方法]采用BP-NH2色譜柱測(cè)定傷科靈膏中苦參堿和氧化苦參堿的含量；流動(dòng)相為乙腈：異丙醇：3%磷酸溶液(72.0∶4.5∶23.5)，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，流速0.8 mL/min。[結(jié)果]該含量測(cè)定法分離度較好；苦參堿在0.248～1.160 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為97.64%(RSD=1.25%)；氧化苦參堿在0.904～4.068 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為97.21%(RSD=1.84%)。[結(jié)論]建立的方法簡(jiǎn)便、可行、靈敏、準(zhǔn)確，可以用于傷科靈膏的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞傷科靈膏；高效液相色譜；含量測(cè)定

Content Determination of Hospital Medicament Shangkeling Ointment

CHEN Zeng-hong1, HE Xiu-rong2, LI Jiang1*(1. Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang, Guizhou 550002; 2. Guizhou Yimin Chinese Orthopedics Specialist Burns Hospital, Guiyang, Guizhou 550000)

Abstract [Objective] To establish HPLC content determination method for Shangkeling ointment. [Method] BP-NH2chromatographic column was adopted to determine matrine and oxymatrine content in Shangkeling ointment; the mobile phase was acetonitrile: isopropyl alcohol: 3% phosphoric acid solution(72.0∶4.5∶23.5), detection wavelength was 210 nm, flow rate was 0.8 mL/min. [Result] The content determination method had a good separation degree; the linear relationship of matrine was good in the range of 0.248 to 1.160 g, and the average recovery was 97.64% (RSD=1.25%); the linear relationship of oxymatrine was good in the range of 0.904-4.068 μg, the average recovery was 97.21% (RSD=1.84%). [Conclusion] The established method is simple, feasible, sensitive and accurate, which can be used in quality control of Shangkeling ointment.

Key wordsShangkeling ointment; High performance liquid chromatography(HPLC); Content determination

傷科靈的處方是貴州宜民中醫(yī)骨傷燒傷專科醫(yī)院何老中醫(yī)在長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐積累所獲得的經(jīng)驗(yàn)方，傷科靈處方為復(fù)方制劑，原方療法為藥材粉碎后加入白酒制成的藥膏調(diào)敷，是貴州宜民中醫(yī)骨傷燒傷?？漆t(yī)院院內(nèi)制劑，由見(jiàn)血飛、山豆根、仙鶴草、三棱、莪術(shù)、肉桂等八味藥組成，有消腫化瘀、療傷止痛的功效，可用于治療急、慢性軟組織損傷。軟組織損傷分為急性軟組織損傷和慢性軟組織損傷，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)軟組織損傷主要采取包扎、局部封閉、理療、服用抗炎鎮(zhèn)痛藥物(如消炎痛、布洛芬、芬必得、雙氯酚酸等)等治療方法，但目前這些方法尚存在療效欠佳、康復(fù)時(shí)間較長(zhǎng)、毒副作用較大[1]等問(wèn)題。軟組織損傷在中醫(yī)屬于“筋傷”范疇，中醫(yī)臨床常用的治療方法有推拿療法、針灸療法、中藥內(nèi)服、中藥外敷、熏洗療法、騰藥療法，中藥外涂或外敷便是其中具有特色的療法之一。而傷科靈膏的處方在貴州宜民中醫(yī)骨傷燒傷?？漆t(yī)院骨傷科臨床上以白酒調(diào)敷使用多年，臨床使用量大、療效好，但不易攜帶和貯存，因此為了滿足患者的需要，該醫(yī)院將傷科靈酒劑改為凝膠膏劑，凝膠膏劑不僅具有保濕性強(qiáng)的特性，且與皮膚的相容性較好，透氣性也較好，患者的依從性較強(qiáng)，耐老化，可以反復(fù)揭帖，刺激性、過(guò)敏性小，用藥安全，治療方便，無(wú)有機(jī)溶媒污染，符合環(huán)保要求[2-4]。貴州宜民中醫(yī)骨傷燒傷?？漆t(yī)院將對(duì)傷科靈膏的處方、制劑工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、穩(wěn)定性等進(jìn)行研究，含量測(cè)定研究是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中重要的一部分，在此筆者主要研究了傷科靈膏的含量測(cè)定，為傷科靈醫(yī)院制劑的申報(bào)奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1主要儀器日立(HITACHI)高效液相色譜儀(Hitachi High-Technologies Corporation)，電子天平(Sartorius德國(guó)賽多利斯)，恒溫水浴鍋(江蘇國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠)，科導(dǎo)SK8210HP型臺(tái)式超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。

1.2主要試藥傷科靈膏及陰性樣品由貴州黔南州中醫(yī)醫(yī)院制劑科提供，批號(hào)20140916、20140917、20140918。苦參堿對(duì)照品(110805-200508)，氧化苦參堿對(duì)照品(100780-201007)，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；乙腈、異丙醇為色譜純，水為純凈水；其他試劑均為分析純。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1對(duì)照品溶液的制備。分別稱取苦參堿對(duì)照品、氧化苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相分別制成每l mL含苦參堿62 μg、氧化苦參堿226 μg的混合溶液，即得。

1.3.2供試品溶液的制備。取本品5片，除去蓋襯，平展貼于醫(yī)用紗布上，剪成約1 cm×1 cm小片，精密稱定，取1/5，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入三氯甲烷-甲醇-濃氨(40∶10∶1)混合溶液100 mL，密塞，稱定重量，放置30 min，超聲處理30 min，再稱定重量，用三氯甲烷-甲醇-濃氨(40∶10∶1)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 mL，揮干，殘?jiān)蛹状?0 mL使溶解，定容，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1.3.3陰性對(duì)照品溶液的制備。取傷科靈膏陰性樣品，按“1.3.2”供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液[5]。

1.3.4色譜分析條件。色譜柱為BP-NH2(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈∶異丙醇∶3%磷酸溶液(72.0∶4.5∶23.5)，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，柱溫25 ℃，流速0.8 mL/min。

1.3.5方法學(xué)考察。

1.3.5.1系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。分別吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各5 μL，在“1.3.4”色譜條件下，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，考察系統(tǒng)適應(yīng)性。

1.3.5.2線性關(guān)系的考察。取“1.3.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，分別精密吸取2、4、5、6、8、9 mL置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣20 μL測(cè)定，注入液相色譜儀，按“1.3.4”色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積Y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性回歸方程。

1.3.5.3穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密吸取同一份供試品溶液(批號(hào)20140917)5 μL，室溫放置，按“1.3.4”色譜條件分別于0、4、8、12、24 h分別進(jìn)樣，測(cè)定苦參堿和氧化苦參堿的峰面積和RSD。

1.3.5.4精密度試驗(yàn)。精密吸取苦參堿、氧化苦參堿混合對(duì)照品溶液5 μL，按“1.3.4”色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算苦參堿和氧化苦參堿峰面積的RSD值。

1.3.5.5重復(fù)性試驗(yàn)。取同一供試品(批號(hào)20140917)按“1.3.2”方法制備供試品溶液6份，按“1.3.4”色譜分析條件，分別進(jìn)樣5 μL，計(jì)算苦參堿和氧化苦參堿的RSD。

1.3.5.6加樣回收試驗(yàn)。取已知含量的樣品(批號(hào)20140917)3.8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，每份樣品分別加入苦參堿、氧化苦參堿對(duì)照品9.72 mg，按“1.3.2”方法制備供試品溶液，再按“1.3.4”色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣量為5 μL，測(cè)定苦參堿、氧化苦參堿的含量，計(jì)算平均回收率和RSD。

1.3.6樣品的含量測(cè)定。取3個(gè)批號(hào)傷科靈膏，每批平行測(cè)定2份，每份取樣一片約7.7 g，精密稱定，按 “1.3.2”方法制備供試品溶液，再按“1.3.4”色譜條件測(cè)定，計(jì)算苦參堿和氧化苦參堿的含量。

2結(jié)果與分析

2.1方法學(xué)考察

注：1為苦參堿；2為氧化苦參堿。Note: 1. Matrine; 2. Oxymatrine. 圖1　對(duì)照品(a)、傷科靈樣品(b)和傷科靈陰性供試品(c)的HPLC圖譜Fig.1 HPLC map of CK(a), Shangkeling sample(b) and Shangkeling negative test sample

2.1.1系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。圖1表明，在“1.3.5.1”條件下，苦參堿、氧化苦參堿含量測(cè)定不受干擾，所測(cè)定的2個(gè)峰與其他的峰均完全分離(分離度>1.5)，且陰性對(duì)照均無(wú)干擾。2.1.2線性關(guān)系的考察。按“1.3.5.2”方法操作，以進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積Y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出苦參堿和氧化苦參堿的回歸方程分別為：Y=1.6×106X-2 782.4(r=0.999 9)、Y=1.8×106X+4 140.1(r=0.999 9)，表明苦參堿和氧化苦參堿分別在0.248～1.160、0.904～4.068 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.1.3穩(wěn)定性試驗(yàn)。按“1.3.5.3”方法操作，結(jié)果得出苦參堿和氧化苦參堿的RSD分別為2.38%、2.00%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.4精密度試驗(yàn)。按“1.3.5.4”方法操作，得苦參堿和氧化苦參堿峰面積的RSD分別為1.81%、1.69%，表明儀器精密度良好。

2.1.5重復(fù)性試驗(yàn)。按“1.3.5.5”方法操作，計(jì)算出苦參堿、氧化苦參堿的RSD分別為1.88%、1.83%，表明方法重復(fù)性良好。

2.1.6加樣回收率。由表1可見(jiàn)，苦參堿、氧化苦參堿的平均加樣回收率分為97.64%、97.21%，RSD分別為1.25%、1.84%，表明該方法準(zhǔn)確、可靠，可用于傷科靈膏中苦參堿和氧化苦參堿的含量測(cè)定。

2.2樣品的含量測(cè)定從表2可看出，3批樣品中苦參堿、氧化苦參堿的平均總含量為5.24 mg/g，計(jì)算得3批苦參堿和氧化苦參堿總含量為40.32 mg/片。

3討論與結(jié)論

傷科靈膏處方為治療急、慢性軟組織的復(fù)方制劑，見(jiàn)血飛雖為方中的君藥，但有效成分研究還甚少，所以人們常以其中的白屈菜紅堿為檢測(cè)成分，通過(guò)試驗(yàn)對(duì)見(jiàn)血飛藥材和制劑中白屈菜紅堿的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示藥材中的含量較低；制劑中受到其他成分和基質(zhì)的干擾，白屈菜紅堿的含量測(cè)定受到較大的干擾且含量甚微，缺乏定量依據(jù)。試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，傷科靈凝膠膏劑基質(zhì)為水溶性基質(zhì)，若用各濃度的乙醇作為提取溶劑時(shí)，基質(zhì)溶解后會(huì)導(dǎo)致過(guò)濾難的問(wèn)題，而許多學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)見(jiàn)血飛含量測(cè)定時(shí)多用80%乙醇作為提取溶劑[6-10]。所以最后選擇測(cè)定處方中山豆根的苦參堿和氧化苦參堿的含量，通過(guò)試驗(yàn)研究找到了適用于檢測(cè)傷科靈膏中苦參堿和氧化苦參堿的含量測(cè)定方法。

該試驗(yàn)研究了傷科靈膏的HPLC含量測(cè)定方法，結(jié)果表明，苦參堿和氧化苦參堿在規(guī)定含量范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，且樣品穩(wěn)定；儀器精密度和樣品的加樣回收率均達(dá)到了相關(guān)要求，且方法重復(fù)性較好，說(shuō)明該方法靈敏、可靠、準(zhǔn)確，可以用于傷科靈膏的質(zhì)量控制。

表1　加樣回收率試驗(yàn)

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果

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收稿日期2015-12-30

作者簡(jiǎn)介陳曾紅(1990- )，女，布依族，貴州龍里人，碩士研究生，研究方向：藥物制劑新技術(shù)與新劑型。*通訊作者，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事藥物制劑新技術(shù)與新劑型研究。

中圖分類號(hào)S 567

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2016)03-146-03