王佩紅 涂權(quán)梅

【摘要】目的：分析高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）陽(yáng)性患者子宮頸脫落細(xì)胞中人乳頭瘤病毒L1基因（L1）及人端粒酶RNA基因（hTERC）的表達(dá)情況。方法：自就診于我院和溫州醫(yī)科大學(xué)二附院HP-HPV陽(yáng)性者中，選取90例宮頸組織正常者作為A組，選取90例宮頸上皮內(nèi)瘤變者作為B組，選取90例宮頸癌者作為C組，對(duì)比分析三組間L1及hTERC表達(dá)情況。結(jié)果：三組間L1位點(diǎn)中CpG-1、CpG-2及CpG-3位點(diǎn)的甲基化水平間存在顯著差異，均以C組水平最低，以A組水平最高（P<005）。三組間hTERC陽(yáng)性表達(dá)率存在顯著差異，C組陽(yáng)性表達(dá)率為8333%最高，A組陽(yáng)性表達(dá)率為2667%最低（P<005）。結(jié)論：在HP-HPV陽(yáng)性者中，以宮頸癌者L1位點(diǎn)中CpG-1、CpG-2及CpG-3位點(diǎn)的甲基化水平及hTERC陽(yáng)性表達(dá)率最高。

【關(guān)鍵詞】人乳頭瘤病毒L1基因；人端粒酶RNA基因；子宮頸脫落細(xì)胞；高危型人乳頭瘤病毒

【中圖分類號(hào)】R711【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

宮頸癌為嚴(yán)重威脅女性身體健康及生命安全的惡性腫瘤之一，且其發(fā)病率在我國(guó)呈逐年上升的趨勢(shì)[1，2]。臨床有研究顯示，早期的診斷及及時(shí)的治療對(duì)于宮頸癌的治療有著極為重要的作用[3，4]。但目前對(duì)于宮頸癌的診斷仍主要依賴于組織病理學(xué)檢查，因此種檢查方法屬有創(chuàng)檢查方式，臨床常不宜用于早期診斷[5]。故本研究為可更為及時(shí)有效的對(duì)本病進(jìn)行診斷，將L1及hTERC基因的表達(dá)情況進(jìn)行分析，以初步探討L1及hTERC基因表達(dá)情況對(duì)宮頸癌診斷的作用。結(jié)果如下。

1資料與方法

11一般資料

自就診于我院和溫州醫(yī)科大學(xué)二附院的HP-HPV陽(yáng)性者中，選取90例宮頸組織正常者作為A組，選取90例宮頸上皮內(nèi)瘤變者作為B組，選取90例宮頸癌者作為C組。所有入選者宮頸組織正常、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌診斷均需經(jīng)病理學(xué)檢查明確診斷[6]，同時(shí)入選者均需完全了解本研究，同意參加本研究并簽署知情同意書(shū)。所有入選者中，A組患者年齡35～85歲，平均（5031±1323）歲；B組患者年齡36～84歲，平均（5267±1411）歲；C組患者年齡35～84歲，平均（5196±1691）歲。三組間年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005），具有可比性。

12觀察方法

分別留取所有入選者的子宮頸脫落細(xì)胞，分別對(duì)各組間L1位點(diǎn)中CpG-1、CpG-2、CpG-3位點(diǎn)的甲基化水平及hTERC陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。對(duì)比三組間L1位點(diǎn)中CpG-1、CpG-2、CpG-3位點(diǎn)的甲基化水平間差異及hTERC陽(yáng)性表達(dá)率間差異。

13檢查方法

L1位點(diǎn)中CpG-1、CpG-2、CpG-3位點(diǎn)的甲基化水平檢測(cè)應(yīng)用酚-氯仿抽提法聯(lián)合焦磷酸測(cè)序法進(jìn)行檢測(cè)。首先應(yīng)用酚-氯仿抽提法提取子宮頸脫落細(xì)胞中的DNA成分，并進(jìn)行DNA體外擴(kuò)增。成分留取并擴(kuò)增子宮頸脫落細(xì)胞中的DNA后，應(yīng)用焦磷酸測(cè)序法對(duì)L1位點(diǎn)中CpG-1、CpG-2、CpG-3位點(diǎn)的甲基化水平進(jìn)行測(cè)定[7，8]。hTERC陽(yáng)性表達(dá)率應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)進(jìn)行測(cè)定，首先應(yīng)用宮頸液基（TCT）低滲法制作子宮頸脫落細(xì)胞涂片，隨后應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)測(cè)定涂片中hTERC基因拷貝數(shù)，確定hTERC陽(yáng)性表達(dá)率[9]。

14統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以SPSS 170作為統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件。計(jì)量數(shù)據(jù)表示形式為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)表示形式為百分率，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所得統(tǒng)計(jì)結(jié)果中，以P<005作為存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2結(jié)果

21三組間L1位點(diǎn)甲基化水平分析

三組間L1位點(diǎn)中CpG-1、CpG-2及CpG-3位點(diǎn)的甲基化水平間存在顯著差異，均以C組水平最低，以A組水平最高（P<005）。見(jiàn)表1。

22三組間hTERC陽(yáng)性表達(dá)率分析

三組間hTERC陽(yáng)性表達(dá)率存在顯著差異，以C組陽(yáng)性表達(dá)率最高，以A組陽(yáng)性表達(dá)率最低（P<005）。見(jiàn)表2。

3討論

目前臨床研究顯示，人乳頭瘤病毒（HPV）為可導(dǎo)致宮頸上皮發(fā)生不典型增生的重要危險(xiǎn)因素之一[10，11]。而在HPV中，16型及18型屬高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV），已被證實(shí)為導(dǎo)致宮頸癌及宮頸癌前病變的主要原因之一[12]。故本研究為更好的診斷宮頸癌，通過(guò)對(duì)L1基因及hTERC基因在HR-HPV陽(yáng)性的不同疾病間的差異進(jìn)行對(duì)比分析，以期更為全面的探討在HR-HPV陽(yáng)性者中L1基因及hTERC基因表達(dá)情況對(duì)宮頸癌的診斷價(jià)值。

L1基因在人類基因組織中的含量最為豐富，臨床研究顯示，在人體正常組織中，L1基因的甲基化程度較高，而在包括胃癌、結(jié)腸癌及膀胱癌等多種惡性腫瘤患者中，其病變組織中的L1基因的甲基化程度較低[13]。故本研究留取子宮頸脫落細(xì)胞，以探討HR-HPV陽(yáng)性宮頸癌患者中子宮頸脫落細(xì)胞內(nèi)L1基因的甲基化程度。結(jié)果顯示：不同疾病的三組間L1位點(diǎn)中CpG-1、CpG-2及CpG-3位點(diǎn)的甲基化水平間存在顯著差異，均以宮頸癌患者的C組其L1各位點(diǎn)的甲基化水平最低，以宮頸組織正常者組成的A組其L1各位點(diǎn)的甲基化水平最高（P<005）?？梢?jiàn)在HR-HPV陽(yáng)性的宮頸癌患者中，其L1位點(diǎn)中CpG-1、CpG-2及CpG-3位點(diǎn)的甲基化水平均有顯著的降低的趨勢(shì)。而hTERC基因?yàn)楹铣啥肆Ｖ貜?fù)序列的重要模板，而近年來(lái)在臨床研究中顯示，在非典型增生的宮頸細(xì)胞中，hTERC基因均有著顯著的擴(kuò)增。且已有學(xué)者研究顯示，hTERC基因檢查在宮頸病變的早期診斷中具有較高的敏感性及特異性，且隨著宮頸病變惡性程度的增加，其陽(yáng)性表達(dá)率也隨之顯著的升高[14-16]。故本研究也將hTERC基因作為觀察指標(biāo)，結(jié)果顯示：三組間hTERC陽(yáng)性表達(dá)率存在顯著差異，C組陽(yáng)性表達(dá)率為8333%最高，A組陽(yáng)性表達(dá)率為2667%最低（P<005）。由此可見(jiàn)在HP-HPV陽(yáng)性的宮頸癌患者的子宮頸脫落細(xì)胞內(nèi)L1基因甲基化程度顯著偏低，而hTERC基因的陽(yáng)性表達(dá)率則顯著偏高。

綜上所述：在HP-HPV陽(yáng)性者中，以宮頸癌者L1位點(diǎn)中CpG-1、CpG-2及CpG-3位點(diǎn)的甲基化水平及hTERC陽(yáng)性表達(dá)率最高。在本研究中選取270例研究對(duì)象對(duì)L1基因及hTERC基因表達(dá)情況對(duì)HP-HPV陽(yáng)性者宮頸癌診斷的診斷價(jià)值進(jìn)行分析，研究對(duì)象較多，因此得到的結(jié)論具有較高的可信度。但是未對(duì)L1基因及hTERC基因表達(dá)情況對(duì)HP-HPV陽(yáng)性者宮頸癌診斷的診斷價(jià)值進(jìn)行進(jìn)一步探討，需要進(jìn)一步進(jìn)行探究。

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（收稿日期：2015-03-26）