靳高遠，汪建光，張麗柯，陳彥斌，袁鵬飛，劉德純

?

Axl在胃癌組織中的表達及其臨床病理意義

靳高遠，汪建光，張麗柯，陳彥斌，袁鵬飛，劉德純

摘要：目的研究受體酪氨酸激酶Axl(Anexelekto)在胃癌及癌旁組織中的表達，探討其與胃癌患者臨床病理特征的關系。方法采用免疫組織化學染色法檢測2013年1月至2013年12月河南科技大學第一附屬醫(yī)院50例胃癌及相應癌旁組織中的Axl表達，分析其表達情況與胃癌臨床病理特征的關系。結果Axl在胃癌組織中的表達高于癌旁組織(P<0.05)；胃癌組織中Axl的表達與患者分化程度、淋巴結轉移、TNM分期密切相關(P<0.05)，與患者的年齡、性別、腫瘤直徑大小及浸潤深度無關(P>0.05)。結論Axl在胃癌組織中的表達高于癌旁組織，胃癌組織中Axl表達與胃癌分化程度、淋巴結轉移及TNM分期相關，預示Axl可能參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。

關鍵詞：胃癌；受體酪氨酸激酶Axl；臨床病理特征；免疫組織化學

作者單位：河南科技大學第一附屬醫(yī)院，河南洛陽 471003

胃癌是目前最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率居第4位，致死率居第2位[1]。盡管在過去10 a胃癌發(fā)病率有所下降，但仍然是全球癌癥死亡的一個主要因素[2]。多數(shù)胃癌患者在確診時已處于進展期，錯失了最佳手術時間，而導致胃癌致死率高。因此，發(fā)現(xiàn)一個與胃癌發(fā)生發(fā)展相關的生物靶點，將有助于胃癌的診斷和治療[3]。研究發(fā)現(xiàn)，受體酪氨酸激酶Axl(Anexelekto)異常表達與結腸癌[4]、甲狀腺癌[5]、肺癌[6]、肝癌[7]、胰腺癌[8]及膀胱癌[9]的發(fā)生發(fā)展及臨床預后密切相關。本實驗采用免疫組織化學技術(immunohistochemistry，IHC)，檢測胃癌組織及癌旁組織中Axl的表達情況，探討Axl與胃癌患者臨床病理特征之間的關系，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1―般資料收集河南科技大學第一附屬醫(yī)院2013年1月至2013年12月行胃癌根治術，并且有完整臨床病理資料的50例患者的胃癌組織石蠟標本及對應的癌旁組織石蠟標本。本組男性35例，女性15例，年齡(59.00±1.25)歲。依據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會第7版胃癌TNM分期系統(tǒng)[10]對胃癌患者行TNM分期。所有組織均由病理科醫(yī)師確診，術前均未接受放、化療及生物治療。

1.2主要儀器及試劑本實驗所用兔抗人Axl多克隆抗體(ab37861)購自美國Abcam公司，山羊抗兔IgG二抗(SA00001-2)購自武漢三鷹生物技術有限公司(Proteintech Group, Inc)，PBS磷酸鹽緩沖液干粉(AR0030)購自武漢博士德生物工程有限公司(BOSTER)；DAB顯色試劑盒(DAB-0031/1031)購自福建邁新生物技術開發(fā)有限公司。

1.3免疫組織化學方法本實驗中所有石蠟組織標本經(jīng)切片機連續(xù)行4 μm厚切片。實驗前，將石蠟切片在60 ℃恒溫烤箱中烤片2 h，常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化。加3%過氧化氫甲醇溶阻斷過氧化物酶，高壓鍋加熱修復抗原20 min，加6%正常山羊血清封閉30 min，滴加一抗(濃度為1∶200)，4 ℃過夜孵育；次日復溫后，PBS沖洗3次×5 min，加HRP標記的二抗(濃度為1∶500)，室溫孵育60 min；PBS沖洗，加新鮮配制DAB溶液80 μL顯色，顯微鏡下觀察3～10 min，觀察切片顯色情況并及時置于清水中阻斷。經(jīng)過復染、脫水、透明后進行封片。每次實驗各組均進行陰性對照，陰性對照片以PBS代替一抗。

1.4結果判斷Axl陽性表達判斷標準：沒有染色記作0分，染色較淺(比背景染色稍高)記作1分，中等程度染色(比背景染色明顯高)記作2分，較強染色記作3分，極強染色記作4分；計算陽性細胞百分比積分：分別計數(shù)300個細胞(光鏡下進行)，并計算陽性個數(shù)占同類細胞的百分數(shù)：≤10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分。然后取兩項積分之和，具體結果如下：0～1分,陰性(-)；2～3分,弱陽性(+)；4～6分，陽性(++)；7～8分，強陽性(+++)。本實驗中將(-)、(+)歸為陰性表達，(++)、(+++)為陽性表達。

1.5統(tǒng)計學處理用SPSS 21.0軟件統(tǒng)計并分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用χ2檢驗(必要時采用Fisher精確概率法)，以α=0.05為檢驗水準，P<0.05表示具有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1Axl在胃癌組織及癌旁組織中的表達Axl表達主要定位在細胞膜與細胞質中，呈棕黃色彌漫或散在分布，見圖1。本組50例胃癌組織標本中Axl陽性28例，陰性22例，陽性表達率為56.0%(28/50)。癌旁組織中Axl陽性18例，陰性32例，陽性表達率36.0%(18/50)。Axl在胃癌組織中的表達高于癌旁組織(χ2=4.026，P=0.045)，有統(tǒng)計學意義。

圖1　Axl在胃癌組織的表達(SP，×100)

2.2Axl表達與胃癌臨床病理特征之間的關系Axl在胃癌組織中的表達與患者年齡、性別、腫瘤大小、浸潤深度無關；而與分化程度、淋巴結轉移、TNM分期相關，(分別為P=0.035，P=0.013，P=0.027)，見表1。

表1Axl 表達與胃癌臨床病理特征之間的關系

臨床病理特征Axl陰性陽性χ2P值年齡≤60歲1217>60歲10110.1920.661性別男1421女870.7580.384腫瘤大小<4cm78≥4cm15200.0620.804分化程度低分化1612中/高分化6164.4610.035①浸潤深度T1/T288T3/T414200.3440.558淋巴結轉移無93有13256.1580.013①TNM分期Ⅰ/Ⅱ149Ⅲ/Ⅳ8194.9190.027①

注：①P<0.05，差異有統(tǒng)計學意義。

3討論

Axl是TAM家族(Tyro3，Axl和Mer)成員之一，TAM家族調控細胞增殖、轉移、浸潤、細胞因子釋放與凋亡等一系列病理及生理過程[11-13]。生長停滯特異性基因6(growth arrest specific gene 6，Gas6)蛋白是Axl的配體， Gas6與Axl的結合能夠導致受體二聚化以及自身的磷酸化，并活化細胞內酪氨酸激酶的活性，引發(fā)一系列的信號傳導過程和生物學效應，介導腫瘤的發(fā)生發(fā)展。1991年在慢性粒細胞性白血病(chronic myeloid leukemia，CML)患者中首次分離得到Axl[14]。隨后，Dufies等[15]發(fā)現(xiàn)Axl高表達是對酪氨酸激酶抑制劑耐藥CML細胞的特點，且敲除Axl可使耐藥細胞對伊馬替尼敏感，證明Axl參與耐藥分子機制，并且Axl是CML中酪氨酸激酶抑制劑耐藥的一個新型標記。近年來，Axl與腫瘤關系的報道逐漸增多，研究發(fā)現(xiàn)Axl通過激活特定的信號轉導通路參與腫瘤細胞的增殖、轉移以及腫瘤細胞凋亡的抑制，是腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中重要的調節(jié)因素[16]。

本研究通過免疫組織化學染色法檢測胃癌及相應癌旁組織中Axl的表達情況，發(fā)現(xiàn)Axl在胃癌組織中表達高于癌旁組織，與Sawabu等[17]的研究結果相似，提示Axl可能在胃癌發(fā)生過程中發(fā)揮著重要作用，并有可能成為胃癌診斷及治療策略的靶點。Axl在結直腸癌的轉移和浸潤過程中起著重要的作用，并且預示著結直腸癌患者的不良預后[4]。本研究中胃癌組織Axl表達與胃癌分化程度、淋巴結轉移、TNM分期相關，提示Axl可能與胃癌細胞的惡性程度有關，介導了胃癌的侵襲和轉移，可作為胃癌潛在的預后標記，其具體機制有待于進一步研究。

綜上所述，本研究通過免疫組織化學染色法檢測胃癌及癌旁組織中Axl的表達情況，發(fā)現(xiàn)Axl在胃癌組織中表達高于癌旁組織，提示Axl在胃癌的發(fā)生過程中發(fā)揮著重要作用。同時，Axl的表達情況與胃癌細胞的分化程度、淋巴結轉移狀態(tài)及TNM分期相關，提示Axl可能參與胃癌進展過程，可能是胃癌診斷、治療及預后評估的潛在生物學標記。

參考文獻：

[1]Nagini S.Carcinoma of the stomach:a review of epidemiology, pathogenesis,molecular genetics and chemoprevention[J].World J Gastrointest Oncol,2012,4(7):156-169.

[2]Colquhoun A,Arnold M,Ferlay J,et al.Global patterns of cardia and non-cardia gastric cancer incidence in 2012 [J].Gut,2015,64(12):1881-1888.

[3]Cancer Genome Atlas Research Network.Comprehensive molecular characterization of gastric adenocarcinoma[J].Nature,2014,513(7517): 202-209.

[4]Dunne PD,McArt DG,Blayney JK,et al.AXL is a key regulator of inherent and chemotherapy induced invasion and predicts a poor clinical outcome in early-stage colon cancer [J].Clin Cancer Res,2014,20(1):164-175.

[5]Avilla E,Guarino V,Visciano C,et al.Activation of TYRO3/AXL tyrosine kinase receptors in thyroid cancer[J].Cancer Res,2011,71(5):1792-1804.

[6]Wu Z,Bai F,Fan L,et al.Coexpression of receptor tyrosine kinase AXL and EGFR in human primary lung adenocarcinomas [J].Hum Pathol,2015,46(12):1935-1944.

[7]Lee HJ,Jeng YM,Chen YL,et al.Gas6/Axl pathway promotes tumor invasion through the transcriptional activation of Slug in hepatocellular carcinoma[J].Carcinogenesis,2014,35(4):769-775.

[8]Koorstra JB,Karikari CA,Feldmann G,et al.The Axl receptor tyrosine kinase confers an adverse prognostic influence in pancreatic cancer and represents a new therapeutic target[J].Cancer Biol Ther,2009,8(7):618-626.

[9]Sayan A,Stanford R,Vickery R,et al.Fra-1 controls motility of bladder cancer cells via transcriptional upregulation of the receptor tyrosine kinase AXL[J].Oncogene,2012,31(12):1493-1503.

[10] Qiu MZ,Wang ZQ,Zhang DS,et al.Comparison of 6th and 7th AJCC TNM staging classification for carcinoma of the stomach in China[J].Ann Surg Oncol,2011,18(7):1869-1876.

[11] Shiozawa Y,Pedersen E,Patel L,et al.GAS6/AXL axis regulates prostate cancer invasion, proliferation, and survival in the bone marrow niche [J].Neoplasia,2010,12(2):116-127.

[12] Song X,Wang H,Logsdon C,et al.Overexpression of receptor tyrosine kinase Axl promotes tumor cell invasion and survival in pancreatic ductal adenocarcinoma [J].Cancer,2011,117(4):734-743.

[13] Li Y,Wang X,Bi S,et al.Inhibition of Mer and Axl receptor tyrosine kinases leads to increased apoptosis and improved chemosensitivity in human neuroblastoma[J].Biochem Biophys Res Commun,2015,457(3):461-466.

[14] O’Bryan JP,Frye RA,Cogswell PC,et al.Axl,a transforming gene isolated from primary human myeloid leukemia cells, encodes a novel receptor tyrosine kinase[J].Mol Cell Biol,1991,11(10):5016-5031.

[15] Dufies M,Jacquel A,Belhacene N,et al.Mechanisms of AXL overexpression and function in imatinib-resistant chronic myeloid leukemia cells [J].Oncotarget,2011,2(11):874-885.

[16] Wang X,Saso H,Iwamoto T,et al.TIG1 promotes the development and progression of inflammatory breast cancer through activation of Axl kinase[J].Cancer Res,2013,73(21):6516-6525.

[17] Sawabu T,Seno H,Kawashima T,et al.Growth arrest-specific gene 6 and Axl signaling enhances gastric cancer cell survival via Akt pathway[J].Mol Carcinog,2007,46(2):155-164.

Expression of Axl in Gastric Cancer and its Clinicopathological Significance

JIN Gao-yuan, WANG Jian-guang, ZHANG Li-ke, CHEN Yan-bing, YUAN Peng-fei, LIU De-chun

(First Affiliated Hospital, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the expression of Anexelekto(Axl) in gastric cancer and adjacent paracancerous tissues, and evaluate the association between Axl expression and the clinicopathological characteristic of patients with gastric cancer. MethodsThe expression of Axl in 50 gastric cancer and adjacent paracancerous tissues collected from January to December in 2013 were detected by immunohistochemical (IHC) staining. Besides, the relationship bewteen the expression of Axl and the clinicopathological characteristic of patients with gastric cancer were analyzed.ResultsAxl expression in gastric cancer was higher than adjacent paracancerous tissues (P<0.05). The positive expression of Axl was related to tumor differentia-tion, lymph node metastasis status and the TNM stage (P<0.05), but not related to age, gender, tumor size, and tumor depth. ConclusionThe expression of Axl in gastric cancer tissues was higher than adjacent paracancerous tissues, which positive expression of Axl was correlated with tumor differentiation, lymph node metastasis and TNM stage. It indicates that Axl may participate in the tumorgenesis and development of gastric cancer.

Key words:gastric cancer；receptor tyrosine kinase Axl；clinicopathological characteris-tics; immunohistochemistry

通信作者：劉德純，男，博士，教授，E-mail：liudechun2008@126.com

作者簡介：靳高遠(1987-)，男，河南鄭州人，醫(yī)師，從事腫瘤的基礎研究與臨床治療工作。

收稿日期：2016-01-08

中圖分類號：R735.2

文獻標志碼：A

DOI：10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2016.01.002

文章編號：1672-688X(2016)01-0005-03