楊丹丹

（白城龍丹乳業(yè)科技有限公司，吉林 白城 137000）

奶粉中混合菌種檢驗方法的比較

楊丹丹

（白城龍丹乳業(yè)科技有限公司，吉林 白城 137000）

近些年，由于細菌污染導致人們患病的情況屢見不鮮，必須抑制細菌污染，做到及時準確的預防。采用直接平板分離法以及增菌培養(yǎng)法，對奶粉中的混合菌種進行分類、提純，依據不同菌種的特性，對其進行檢驗測試，以保證細菌檢驗結果的準確性。

奶粉；混合菌種；檢驗方法

近些年，隨著我國市場經濟的不斷發(fā)展，人們的物質生活不斷豐富，但在物質生活不斷豐富的同時，由細菌引起的突發(fā)性公共衛(wèi)生事件時有發(fā)生。如何有效的對疾病進行檢測，關系到人們的身體健康和社會的穩(wěn)定繁榮。為了對疾病預防提供精準、迅速的檢驗報告，檢驗人員不僅有豐富的理論知識，而且還要有嫻熟的試驗操作技術。混合菌種質量控制的檢驗，可以提高檢驗人員的整體實力，提高細菌室的整體水平。通過對混合菌種的檢驗，不僅可以檢驗自身的水平，而且可以在試驗中了解到不同因素對實驗所帶來的影響，方便其及時采取糾正措施，保證細菌檢驗結果的準確性。筆者采用平板分離法和增菌培養(yǎng)法兩種方法對混合菌種進行檢驗，并得出最終結論。

1 材料與方法

1.1 材料的選取

質控奶粉。中國疾病預防控制中心所要求的食品營養(yǎng)和食品安全所制備的質控樣品，是經過輻照滅菌后所得到奶粉與細菌培養(yǎng)物兩者的混合物，是呈乳白色的粉劑。每個檢驗機構在進行檢驗時都會選取兩支平行的質控樣品，一般每只選取的質量為3 g，其中一支用于檢驗使用，另一支則用于備份。對于每一份質控樣品，都包含1～3種常見的食源性致病菌，其中主要的食源性致病菌為革蘭陰性菌或革蘭陽性菌。

培養(yǎng)基。北京陸橋技術有限公司的產品有：BP瓊脂、mCCDA瓊脂、TCBS瓊脂、Skirrow氏培養(yǎng)基、Baird-Parker瓊脂、PALCAM瓊脂、阪崎顯色（DFI）瓊脂，7.5%NACL肉湯、MLST-Vm肉湯、3%堿性蛋白胨水、Mec+n肉湯、SC增菌液、緩沖蛋白胨水、LBI肉湯、布氏肉湯、TTB增菌液、LB2肉湯；法國CHROMagar公司的產品主要有：科瑪嘉沙門氏菌顯色瓊脂、科馬嘉O157顯色瓊脂、科瑪嘉單增李斯特菌顯色瓊脂；法國的梅里埃公司的產品有哥倫比亞瓊脂。

診斷血清。血清購于寧波天潤生物藥業(yè)有限公司，為出血性大腸埃希菌O157：H7血清。

1.2 方法的選擇

樣品處理。先選取10 mlBHI肉湯，將質控奶粉倒至其中，待溶解，完成后將其移入50 ml的無菌管中，在向其中加入10 ml的BHI肉湯，對其進行攪拌搖勻，制備成簡單奶粉溶液。

鏡檢。將樣品處理后得到的奶粉溶液進行取樣、涂片、染色，然后對其鏡檢。要求：在鏡檢過程中要發(fā)現兩種食源性致病菌，即一種為革蘭陽性球菌，另一種為格蘭陰性球菌。前者的特征是菌量較少且排列呈現雙球性，后者的特征是菌量較多，易于發(fā)現。

對細菌進行分離、增菌，然后鑒定。采用3種方法。首先，將奶粉溶液分別接種至下列的增菌液之中：7.5% NaCl肉湯、BHI肉湯、LBI肉湯、mEC+n肉湯、布氏肉湯、緩沖蛋白胨水，使其進行增菌。待增菌完成后，取24 h LBI肉湯培養(yǎng)物，將其接種至LB2肉湯之中，去緩沖蛋白胨水16 h增菌液，將其接種至TTB增菌液、MLST-Vm肉湯之中。然后將增菌液、奶粉溶液及5 h培養(yǎng)物分別劃線在以下的平板之上：TCBS平板、血平板、CT-SMAC平板、BS平板、Parker平板、沙門氏菌顯色平板、O157顯色平板、mCCDA平板、DFI、PALCAM平板、Skirrow瓊脂平板、旦增李斯特菌顯色平板，然后對其細菌進行分離式培養(yǎng)。在培養(yǎng)期間，認真觀察平板，細心記錄數據，挑選菌落，對其涂片、染色、進行鏡檢，并采用一定血清學試驗以及必要的升華試驗，對其結果及其特性進行進一步確定。

2 試驗結果

質控奶粉溶液在增菌后，使其接種至BS平板之上，在36℃的環(huán)境下培養(yǎng)48 h，并無菌落生長。在沙門氏菌顯色板上接種增菌液，在36℃的環(huán)境下，培養(yǎng)24 h后，觀察、鏡檢，并無刻意的菌落生長。在TCBS平板上接種的增菌液，在36℃的環(huán)境下，將其培養(yǎng)24 h后，觀察鏡檢，無菌落生長。在Baird-Parker平板上接種的增菌液，在36℃的環(huán)境下，將其培養(yǎng)24 h，刻意發(fā)現有菌落生長，且菌落呈現黑色，外邊緣為淡色，周圍伴隨有一混濁帶生成，而外層有一透明圈。取部分菌落涂片，對其進行鏡檢，發(fā)現有革蘭陽性球菌生成，為葡萄狀排列。再取菌落，將其接種至BHI肉湯之中，在36℃的環(huán)境下，將其培養(yǎng)24 h之后，對其做血漿凝固酶試驗（+）。

在血平板上接種的增菌液，在36℃的環(huán)境下，對其培養(yǎng)24 h，可以發(fā)現有兩種菌落生成。一種菌落呈現出灰白色，且較為扁平，對其取樣、涂片、染色、進行鏡檢，確定該菌落生長格蘭陰性球菌；另一種菌種顏色呈現淡黃，對其取樣、涂片、染色、進行鏡檢、最終確定為格蘭陽性球菌，排列成葡萄狀。在CT-SMAC平板上接種的增菌液，在36℃的環(huán)境下，對其培養(yǎng)24 h，可發(fā)現有無色菌落生成，通過涂片、染色、鏡檢，發(fā)現為革蘭陰性桿菌。

在單增李斯特菌顯色平板上接種的增菌液，在36℃的環(huán)境下，對其培養(yǎng)24 h，可發(fā)現并無明顯的菌落生成。在PALCAM平板上接種的增菌液，在36℃的環(huán)境下，對其培養(yǎng)24 h，無菌落生成。在DFI上接種的增菌液，在36℃的環(huán)境下，對其培養(yǎng)24 h，無菌落生成。在mCCDA平板上接種的增菌液，通過在42℃的溫度下，做微需氧48 h，并無菌落生成。在Skirrow瓊脂平板上接種的增菌液，通過在42℃的溫度下，做微需氧48 h，并無菌落生成。

通過對以上不同平板上培養(yǎng)的增菌結果，再通過升華試驗以及血清學鑒定，得出質控奶粉中檢測出的細菌種類，即該奶粉中含有大腸埃希菌以及金黃葡萄球菌。

3 討論

通過試驗發(fā)現，增菌5 h后做平板分離與直接取樣做平板分離所得數據相同，所以，可省去后兩步，以減少成本。本實驗最終得到細菌為大腸埃希菌以及金黃葡萄球菌，但也可能含有弧菌。要注意平板劃線至關試驗的成敗，一般要求9 cm的平板應分離出50個以上的單菌落。

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Comparison of test methods for mixed bacteria in milk powder

YANG Dan-dan
（BaichengLong Dan Dairy TechnologyCo.，Ltd.，137000，China）

In recent years，bacterial contamination has caused illness of people，how to suppress bacterial contamination and make timely accurate prevention.Plate separation method and enrichment cultivation method were taken to make classification and purification on mixed bacteria in milk powder.Inspection testing was made according to the characteristics of different strains，soas toensure the accuracy of test results of bacteria.

Milk powder；Mixed bacteria；Test methods

F224

B

1674-8646（2016）16-0018-02

2016-06-14