葉麗云，魯 欣，吳恩典，楊春秀，吳小平

（福建農(nóng)林大學菌物研究中心，福建 福州 350002）

四種靈芝產(chǎn)品中多糖和三萜含量的比較*

葉麗云，魯 欣，吳恩典，楊春秀，吳小平**

（福建農(nóng)林大學菌物研究中心，福建 福州 350002）

以市場上的靈芝破壁孢子粉、未破壁孢子粉、子實體和精粉共4種靈芝產(chǎn)品為研究對象，比較分析其活性成分三萜和多糖含量的差異。應用光學顯微鏡比較破壁孢子粉與未破壁孢子粉的差別、熱水浸提法提取多糖、苯酚－硫酸法測定多糖含量、醇提法提取三萜、香草醛－冰醋酸法測定三萜含量、高效液相色譜法（HPLC）檢測靈芝酸。結果顯示精粉中多糖含量為52.40 mg·g－1，顯著高于其他三者，破壁與未破壁孢子粉多糖含量為（21.32±1.11）mg·g－1，差異不顯著，但高于子實體的9.83 mg·g－1。而子實體中三萜含量卻是最高的，為4.97 mg·g－1，破壁孢子粉中三萜含量為2.23 mg·g－1，明顯高于未破壁的1.10 mg·g－1。通過對比4種產(chǎn)品的三萜指紋圖譜發(fā)現(xiàn)，子實體和精粉中的靈芝酸種類遠遠多于破壁及未破壁孢子粉中的，且不同產(chǎn)品中有相同的組分。

靈芝產(chǎn)品；多糖；三萜；高效液相圖譜

靈芝（Ganoderma lucidum） 作為一種我國傳統(tǒng)的藥用真菌，享有“仙草”、“瑞草”等美稱，早在2000多年前的《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有關于靈芝的記載，被認為具有益心氣、安精魂、補肝益氣、堅筋骨的作用。明朝李時珍編著的《本草綱目》中記載靈芝具有“滋補強壯、延年益壽、利關節(jié)、治耳聾”等功效[1]。目前靈芝的臨床應用研究表明，靈芝具有很好的藥理活性，對于治療高脂血、高血壓、糖尿病等疾病具有很好的療效，同時也具有防止更年期綜合癥、增強記憶力等作用[2]。

隨著對靈芝價值的不斷探索，靈芝的藥用價值不斷被開發(fā)，市面上靈芝產(chǎn)品也越來越多。不同的靈芝產(chǎn)品功效卻不盡相同。湯坤鵬等[3]用灰色關聯(lián)分析法指出不同菌種的靈芝有效成分差異極大。楊巍等[4]發(fā)現(xiàn)靈芝精粉對Lewis肺癌模型小鼠免疫作用優(yōu)于靈芝孢子粉。楊新林等[5]研究指出破壁處理有利于靈芝孢子粉中化學成分的提取，而破壁孢子粉的醇提取液的抗腫瘤活性比未破壁的孢子粉強。湯瑩等[6]利用透射電鏡觀察破壁孢子粉A549的超顯微結構，得出破壁孢子粉對人肺癌細胞具有顯著抑制作用的結論。林瑋等[7]發(fā)現(xiàn)破壁靈芝孢子粉及靈芝提取物的混合物能夠改善小鼠的睡眠。黃曉蘭等[8]研究指出破壁孢子粉多糖含量較未破壁孢子粉高出70%。

本研究是對靈芝破壁孢子粉、未破壁孢子粉、子實體和精粉（靈芝子實體粉末的水提物烘干）這四種靈芝產(chǎn)品中的主要活性物質(zhì)（三萜和多糖）進行比較分析，以期為選購靈芝產(chǎn)品提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

已彈射完孢子的子實體、破壁孢子粉、未破壁孢子粉及靈芝精粉，所有產(chǎn)品均購買于福建某公司。

無水乙醇、氯仿、正丁醇、葡糖糖、硫酸、苯酚、香草醛、冰醋酸、甲醇等，均為分析純。

1.2 多糖的提取和測定

稱取2 g靈芝樣品（子實體需研磨成粉末狀），經(jīng)90℃熱水浸提后收集提取液，加入3倍體積的無水乙醇過夜后，加入Sevag溶液，劇烈振蕩以除去蛋白，取上清蒸餾水定容至25 mL。多糖含量的測定采用苯酚-硫酸法[9-10]。

1.3 三萜的提取和測定

稱取2 g靈芝樣品（子實體需研磨成粉末狀），加入30 mL的85%乙醇，常溫浸提，2 h后在超聲功率150 W下超聲0.5 h，用旋轉蒸發(fā)儀60℃抽濾，減壓蒸餾除去乙醇，用甲醇來溶解，用容量瓶定容至25 mL。

三萜含量的測定采用香草醛-冰醋酸法。吸取每個樣品0.25 mL至具塞試管中，60℃恒溫水浴鍋中蒸發(fā)去除甲醇溶劑，向管中加入0.4 mL剛剛配制好的5%香草醛-冰醋酸溶液和1.0 mL的高氯酸，搖勻，在65℃恒溫15 min后冷卻至室溫，并加入5.0 mL的冰乙酸，搖勻后置于室溫下30 min后，采用分光光度法測定。

1.4 靈芝酸種類的比較

高效液相法（HPLC）檢測。將提取液通過0.45 μm的有機微孔過濾膜備用，在黃生權[11]等的基礎上以乙腈（A）-0.1%乙酸水（B）的梯度洗脫系統(tǒng)，檢測波長為254 nm，柱溫為40℃，流速為0.8 mL·min-1，進樣量為10 μL。

2 結果與分析

2.1 破壁與未破壁孢子粉的顯微形態(tài)

在光學顯微鏡下檢測破壁孢子粉與未破壁孢子粉，其結果如圖1所示。未破壁的孢子粉孢子完整，而破壁的孢子粉破壁效果較好。

圖1 靈芝未破壁與破壁孢子的顯微結構Fig.1 Microstructure of nonbroken spores and sporoderm-broken powder of Ganoderma lucidum

2.2 不同靈芝產(chǎn)品中的多糖含量

使用熱水浸提不同產(chǎn)品中的多糖，其結果如圖2所示。

圖2 不同靈芝產(chǎn)品中的多糖含量Fig.2 Polysaccharides content of different Ganoderma lucidum materials

由圖2可見，精粉中的多糖含量非常高，達到52.40 mg·g-1，極顯著高于其他產(chǎn)品（P<0.01）。未破壁與破壁孢子粉中提取出的多糖含量均為（21.32± 1.11） mg·g-1，兩者間沒有顯著差異，但是卻都極顯著高于子實體中提取多糖含量（9.83 mg·g-1）。

2.3 不同靈芝產(chǎn)品中的三萜含量

采用醇提法提取不同靈芝產(chǎn)品中的三萜，測定結果見圖3。

由圖3可見，子實體中三萜含量最高，達到4.97 mg·g-1，極顯著高于其他產(chǎn)品（P<0.01)。破壁孢子粉中的三萜含量2.23 mg·g-1，極顯著高于未破壁孢子粉中的含量1.10 mg·g-1。

圖3 不同靈芝產(chǎn)品中的三萜含量Fig.3 Triterpenoids content of different Ganoderma lucidum materials

2.4 不同靈芝產(chǎn)品中靈芝酸種類的HPLC指紋圖譜差異

以靈芝酸A為標準品，采用高效液相法檢測不同產(chǎn)品中獲得的三萜的指紋圖譜差異，其結果見圖4。S1為子實體、S2為精粉、S3為未破壁孢子粉、S4為破壁孢子粉、R是以S1為參照生成的對照峰。

圖4 不同靈芝產(chǎn)品中的三萜HPLC圖譜Fig.4 HPLC spectrum of triterpene compounds of different Ganoderma lucidum materials

從圖4中可以發(fā)現(xiàn)，子實體和精粉中的靈芝酸的種類遠遠多于破壁及未破壁孢子粉。不同產(chǎn)品中有相同組分，但也有不同組分。例如在第39分鐘的峰，只存在于孢子粉中。不同靈芝產(chǎn)品中三萜的HPLC圖譜相似性見表1。

表1 不同靈芝產(chǎn)品中的三萜HPLC圖譜相似性Tab.1 Similarity of triterpene HPLC spectra of different Ganoderma lucidum materials

從表1中可以看出，子實體和精粉、破壁孢子粉與未破壁孢子粉相似性較高，但仍存在差異。

3 討論

經(jīng)過對購買于市面的靈芝產(chǎn)品多糖與三萜含量進行分析，我們可以發(fā)現(xiàn)靈芝的水提物烘干后得到的精粉中多糖含量極顯著高于其他產(chǎn)品，達到了55.87 mg·g-1，其三萜含量卻低于子實體，推測可能是該公司在生產(chǎn)精粉時添加了糊精等物質(zhì)，使其多糖含量大大提高。破壁孢子粉中多糖含量雖與未破壁孢子粉相比差異不顯著，但是其三萜含量卻是顯著高于未破壁孢子粉的，從而也證實了楊新林等[5]指出的破壁處理有利于靈芝孢子粉中化學成分的提取的說法。對比4種產(chǎn)品中的HPLC圖譜可以發(fā)現(xiàn)，子實體和精粉中所含有靈芝酸的種類明顯多于孢子粉中，但是孢子粉中也存在一些在子實體和精粉中所不具有的組分。

[1]李時珍.本草綱目[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1987：577.

[2]林志彬.靈芝的臨床應用研究進展（摘要）[J].食藥用菌，2015，23（5）：280-281.

[3]湯坤鵬，劉盛榮，吳小平，等.灰色關聯(lián)度法篩選適合液體深層發(fā)酵靈芝菌株[J].核農(nóng)學報，2015，29（10）：1963-1969.

[4]楊巍，張英林，牛坤偉，等.靈芝精粉與靈芝孢子粉對Lewis肺癌模型小鼠免疫功能的影響[J].中國生物制品學雜志，2012，25（9）：1171-1175.

[5]楊新林，朱鶴孫，趙東旭，等.靈芝破壁孢子與不破壁孢子的顯微鏡觀察與生化測定比較研究[J].中草藥，1997，28（12）：721-723.

[6]湯瑩，韓森，沈亞峰，等.破壁靈芝孢子粉對人肺癌細胞超顯微結構影響及抑制作用[J].解刨學雜志，2015，38（1）：18-21.

[7]林瑋，韓楓，徐維盛，等.破壁靈芝孢子粉及靈芝提取物的混合物對改善小鼠睡眠功能的研究[J].食品科技，2015，40（11）：172-175.

[8]黃曉蘭，吳惠勤，黃芳，等.破壁與不破壁靈芝孢子粉多糖的分析[J].中草藥，2006，37（6）：813-816.

[9]徐志祥，李剛，李保健.苯酚-硫酸法測定靈芝多糖含量的條件研究[J].食用菌，2000，22（3）：6-7.

[10]劉艷平，蔡紅軍.不同菌株培養(yǎng)的靈芝中多糖含量測定[J].廣州中醫(yī)藥大學學報，1999，16（1）：54-55.

[11]黃生權，姚松君，劉翠玲，等.不同生長時期的靈芝三萜含量測定及變化規(guī)律研究[J].現(xiàn)代食品科技，2001，7（8）：1015-1019.

Comparison on the Contents of Polysaccharides and Triterpenes from Different Kinds of Ganoderma lucidum Material

YE Li-yun,LU Xin,WU En-dian,YANG Chun-xiu,WU Xiao-ping
(Mycological Research Center of FAFU,Fuzhou 350002,China)

In this study,based on the materials of Ganoderma lucidum sporoderm－broken,nonbroken spores powder,fruiting body and essence powder of G.lucidum products from market,the differences were analyzed comparatively in the content of active ingredient,triterpenes and polysaccharide.The difference between sporoderm－broken and nonbroken spores powder were compared by optical microscope.The polysaccharide was extracted by hot water and the content were determined by phenolsulfuric acid method.The triterpenoids was extracted by ethanol and the content were determined by vanillin－glacial acetic acid method.High Performance Liquid Chromatography (HPLC)was used in the detection of G.lucidum acid.The results showed that the content of polysaccharide of essence powder(52.40 mg·g－1)was significantly higher than that of the other three.The difference of polysaccharide content[(21.32±1.11)mg·g－1]between sporoderm－broken and nonbroken spores powder were not significant,but it was higher than that in fruiting body (9.83 mg·g－1).However,the content of triterpenes of fruiting body (4.97 mg·g－1)was the highest,and that of sporoderm－broken (2.23 mg·g－11)was significantly higher than that in nonbroken spores powder(1.10 mg·g－1).By comparing the four kinds of materials’HPLC spectrum of triterpenes,it found that the G.lucidum acid in fruiting body and essence powder were far more than sporoderm－broken and nonbroken spores powder,and different materials had the same composition.

Ganoderma lucidum;products;polysaccharide;triterpenes;HPLC spectrum

S646.9

A

1003-8310（2016）05-0034-03

10.13629/j.cnki.53－1054.2016.05.009

福建省種業(yè)創(chuàng)新與產(chǎn)業(yè)化工程專項項目（2014S1477－21）。

葉麗云（1991－），女，在讀碩士研究生，主要研究方向為食用菌遺傳育種。E－mail:906613508＠qq.com

**通信作者：吳小平（1965－），男，博士，教授，主要從事食用菌教學與科研工作。E－mail:fjwxp＠126.com

2016－07－10