張新鵑，王海鳳，張彩坤，孫龍

（1.山東中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校 西醫(yī)教學(xué)部，山東 煙臺(tái) 264199；2山東省臨沂市沂水中心醫(yī)院神經(jīng)外科，山東 沂水 276400）

膠質(zhì)瘤（腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤）是顱內(nèi)最常見(jiàn)的腫瘤，近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，人表皮生長(zhǎng)因子受體4（human epidermal growth factor receptor 4，HER4）與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)[1]。但目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于膠質(zhì)瘤中的HER4表達(dá)情況報(bào)道很少。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HER4在不同病理級(jí)別的膠質(zhì)瘤腫瘤組織以及正常腦組織中HER4的表達(dá)，初步探討HER4在膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用。

1 材料與方法

1.1 病例資料

選取山東省臨沂市沂水中心醫(yī)院病理科存檔膠質(zhì)瘤標(biāo)本45例，均為2010年1月-2013年6月在該院接受手術(shù)治療的患者，男26例，女19例；年齡7～79歲，中位年齡41.52歲。全部患者均為初發(fā)，術(shù)前未行放、化療等治療。45例膠質(zhì)瘤標(biāo)本均由病理科經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師進(jìn)行核查和確診。根據(jù)WHO2007年公布的神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)[2]對(duì)所有膠質(zhì)瘤進(jìn)行組織學(xué)分級(jí)（Ⅰ～Ⅳ級(jí)），其中，Ⅰ級(jí)9例，Ⅱ級(jí)12例，Ⅲ級(jí)13例，Ⅳ級(jí)11例。45例患者中室管膜下巨細(xì)胞性星形細(xì)胞瘤9例，少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤12例，間變型少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤13例，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤11例。另取同期10例腦外傷患者施行減壓術(shù)中切除的正常腦組織作對(duì)照（本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及患者和家屬同意）。所有標(biāo)本制成4 μm厚切片備用。

1.2 主要試劑和方法

鼠抗人c-ErbB4/HER4單克隆抗體HFR-1購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，免疫組化試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。石蠟切片脫蠟水化，蒸餾水漂洗，高溫抗原修復(fù)，冷卻，蒸餾水及PBS沖洗，3%H2O2孵育，PBS清洗，山羊血清封閉，滴加一抗（稀釋度1∶200），4℃過(guò)夜；按照SP試劑盒說(shuō)明操作（以已知陽(yáng)性乳腺癌組織作為HER4陽(yáng)性對(duì)照，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照），DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，干燥，封片。

1.3 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判斷

進(jìn)行半定量判定，切片由兩位病理學(xué)醫(yī)師重復(fù)觀察，結(jié)果有分歧時(shí)由第三人閱片，討論判定。參照Kountourakis等[3]的研究標(biāo)準(zhǔn)，HER4主要在細(xì)胞質(zhì)著色，呈淺黃、棕黃及棕褐色程度不等的顆粒。通過(guò)胞質(zhì)著色程度來(lái)判讀：陰性（-），不著色或＜10%的腫瘤細(xì)胞著色；弱陽(yáng)性（+），≥10%的腫瘤細(xì)胞弱著色；中等陽(yáng)性（++），≥10%的腫瘤細(xì)胞中等強(qiáng)度著色；強(qiáng)陽(yáng)性（+++），≥10%的腫瘤細(xì)胞強(qiáng)著色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，HER4在正常腦組織及膠質(zhì)瘤中表達(dá)的差異和不同病理級(jí)別膠質(zhì)瘤之間HER4表達(dá)的差異均應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HER4陽(yáng)性細(xì)胞表現(xiàn)

細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中出現(xiàn)淺黃、棕黃及棕褐色不同強(qiáng)度的染色，陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)，大部分陽(yáng)性細(xì)胞在腫瘤組織中散在分布，分布不均勻，且HER4隨膠質(zhì)瘤惡性級(jí)別的提高表達(dá)增加（見(jiàn)圖1～4）。

圖1 HER4在正常腦組織的表達(dá)（×400）

圖2 HER4在膠質(zhì)瘤（Ⅱ級(jí)）的表達(dá)（×400）

圖3 HER4在膠質(zhì)瘤（Ⅲ級(jí)）的表達(dá)（×400）

圖4 HER4在膠質(zhì)瘤（Ⅳ級(jí)）的表達(dá)（×400）

2.2 HER4在正常腦組織和膠質(zhì)瘤腫瘤組織中的表達(dá)

正常腦組織HER4陽(yáng)性率為10%，膠質(zhì)瘤為68.9%，兩者差異明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.007）；室管膜下巨細(xì)胞性星形細(xì)胞瘤陽(yáng)性率為22.2%（2/9），少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤陽(yáng)性率為66.7%（8/12），間變型少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤陽(yáng)性率為84.6%（11/13），膠質(zhì)母細(xì)胞瘤陽(yáng)性率為90.9%（10/11）。高惡性度組（Ⅲ、Ⅳ級(jí)）HER4陽(yáng)性率為87.5%，低惡性度組（Ⅰ、Ⅱ級(jí)）為47.6%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.016）。

3 討論

HER4是表皮生長(zhǎng)因子受體家族4成員之一，該基因在人體中位于2號(hào)染色體長(zhǎng)臂，2q33.3- 34[4]。該家族其余3個(gè)成員分別是HER1（erbB1，EGFR）、HER2（erbB2，NEU）、HER3（erbB3）。四者在結(jié)構(gòu)上均由配體結(jié)合區(qū)、單鏈跨膜區(qū)及胞漿蛋白酪氨酸激酶區(qū)3部分組成。表皮生長(zhǎng)因子受體與其配體在胞外區(qū)結(jié)合形成二聚體，二聚體可以激活胞內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)，使受體的酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化，啟動(dòng)一系列信號(hào)傳導(dǎo)通路，將信號(hào)從細(xì)胞質(zhì)傳到細(xì)胞核，進(jìn)而活化一系列相關(guān)基因，促進(jìn)細(xì)胞從G1期過(guò)渡到S期，從而調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、增殖以及血管生成和凋亡[5]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：HER4在膠質(zhì)瘤組織的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有表達(dá)，但主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)。Kew等很早以前研究HER4在原發(fā)性乳腺癌中的定位時(shí)發(fā)現(xiàn)：原發(fā)性乳腺癌的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜及細(xì)胞核中均有不同程度HER4表達(dá)，其中，以細(xì)胞質(zhì)表達(dá)最多。這均與筆者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似；Tovey等[6]研究乳腺癌中HER4的表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)：不同的抗原位點(diǎn)可使不同位置出現(xiàn)不同的染色模式。H4.77.16可能選擇細(xì)胞膜，而HFR-1可能選擇細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。本實(shí)驗(yàn)筆者選用的是HFR-1，這可能是膠質(zhì)瘤組織細(xì)胞膜中未見(jiàn)到HER4明顯表達(dá)的原因。

國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)HER4在腫瘤中表達(dá)的研究結(jié)果差異比較大。Glibertson等早在1999年研究HER4在小兒髓母細(xì)胞瘤中的表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)：66%的髓母細(xì)胞瘤存在HER4高表達(dá)，而神經(jīng)原及正常星形細(xì)胞中只存在HER4弱表達(dá)，且HER4的單獨(dú)表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)無(wú)相關(guān)性 ；Bussu等[7]研究也發(fā)現(xiàn)：HER4在喉鱗狀細(xì)胞癌中呈過(guò)度表達(dá)。Feinmesser等[8]研究HER4蛋白在普通痣、異常增生痣和黑色素瘤中的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)：HER4蛋白在普通痣中陽(yáng)性表達(dá)率最高，在異常增生痣和黑色素瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率逐步降低；而最近的一項(xiàng)國(guó)內(nèi)研究卻發(fā)現(xiàn)：HER4在結(jié)腸癌組織中的過(guò)度表達(dá)明顯增強(qiáng)，并且與結(jié)腸癌的臨床分期密切相關(guān)[9]。本實(shí)驗(yàn)筆者發(fā)現(xiàn)：與正常腦組織相比，膠質(zhì)瘤存在HER4的高表達(dá)；且隨著膠質(zhì)瘤惡性程度的升高HER4表達(dá)也相應(yīng)增加。由此可以推斷：HER4是膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)的重要調(diào)控基因，并與膠質(zhì)瘤的惡性進(jìn)展有關(guān)，但其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

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