孫秀峰，孫成狀

(1.山東省費(fèi)縣城北畜牧獸醫(yī)工作站 273400；2.山東省費(fèi)縣上冶畜牧獸醫(yī)工作站 273400)

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豬的人工采精和精液保存

孫秀峰1，孫成狀2

(1.山東省費(fèi)縣城北畜牧獸醫(yī)工作站 273400；2.山東省費(fèi)縣上冶畜牧獸醫(yī)工作站 273400)

豬采精通常采用手握法。采精頻率依公豬而定，一般每2～3天或每4～5天采集1次。采精時(shí)廢棄最初射出部分液體，精子濃集部分收集后去凝膠。公豬射出的富精子部分通常在100～150 mL，在對(duì)精子的密度、活力、形態(tài)進(jìn)行評(píng)估后進(jìn)行稀釋。

1　液態(tài)精液

豬的輸精99%采用液態(tài)精液。由于豬的精子對(duì)低溫特別敏感，因此幾乎所有的豬精液是采用室溫稀釋液。精液在室溫下保存時(shí)，必須要抑制精子的活動(dòng)，以保證精子能保持足夠長(zhǎng)的活力。

20世紀(jì)60年代至70年代用于室溫保存的稀釋液基本都是依利諾伊變溫稀釋液(IVT)，近來(lái)已逐漸被Guelph稀釋液、BTS稀稀釋夜(貝滋維爾溶解液)和Zorlesco等稀釋液所取代。Guelph稀釋液比IVT稀釋液配制簡(jiǎn)單，但稀釋后精子活力保持時(shí)間與IVT液相當(dāng)。更為復(fù)雜配方的稀釋液，如Zorlesco稀釋液，可使精子在12 d內(nèi)保持受精能力，但試驗(yàn)表明有效期可能比此要短。美國(guó)使用最為廣泛的是BTS稀釋液。

通常建議的輸精精子數(shù)不得低于1×109個(gè)，如果在采集當(dāng)天未使用，則需加大精子數(shù)量。研究認(rèn)為，精液多保存1 d，精子數(shù)應(yīng)增加1×109個(gè)。因此，商業(yè)人工授精中心的常規(guī)一次輸精劑量所含的精子數(shù)為2.5×109。如果采精時(shí)無(wú)法準(zhǔn)確確定精子的密度，或是用于當(dāng)?shù)刎i群，推薦稀釋比例為1∶4～1∶7，每頭份輸精劑量所含精子數(shù)大約為(2～4.5)×109個(gè)。輸入精液的容積很重要，較大容積的精液量可以刺激子宮運(yùn)動(dòng)，保證有足量的精子能到達(dá)受精部位，而容積太小則達(dá)不到預(yù)期效果。建議的輸精量為70～100 mL(通常為80 mL)。輸精前精液通常盛放在塑料管(杯、瓶)中，15 ℃以上保存。在商品豬進(jìn)行人工授精時(shí)，可將不同公豬的精液混合使用，這樣可以消除不同公豬精液對(duì)稀釋的不良反應(yīng)，改進(jìn)輸精效果。

2　冷凍保存

豬精液冷凍保存的效果不好，解凍后精子復(fù)蘇率不高，個(gè)體之間差異較大，解凍后精子受精能力低于液態(tài)精液。冷凍精液解凍后兩次輸精，母豬受胎率最高可達(dá)到70%，而使用液態(tài)精液輸精后80%～90%的母豬受胎。冷凍精液每胎產(chǎn)仔數(shù)也低于液態(tài)精液。因此，采用凍精人工授精的豬僅占1%，主要用于國(guó)際貿(mào)易。

限制豬冷凍精液應(yīng)用的因素主要有兩個(gè)。第一，豬精子對(duì)冷休克極為敏感。卵黃和脫脂奶對(duì)大多數(shù)其他動(dòng)物的精液具有良好的抗冷休克保護(hù)作用，但對(duì)豬精子則幾乎沒(méi)有任何作用。第二，雖然甘油可能是豬精子最好的冷凍保護(hù)劑，但其對(duì)豬精子的毒性作用又比對(duì)其他動(dòng)物強(qiáng)。因此，使用凍精輸精后要獲得中等程度的受胎率，也需要非常高的精子濃度，一般每次輸精劑量要達(dá)到(5～6)×109個(gè)。因此制備凍精時(shí)，每次射出的精液僅可供5頭母豬使用。由于稀釋比例很低，因此只能用于以提高豬的遺傳品質(zhì)為目的的國(guó)際貿(mào)易和遺傳資源保存。

為了提高豬精液冷凍效果，人們進(jìn)行了大量的

研究，雖然早期的研究進(jìn)展緩慢，但解凍后精子的活力和穩(wěn)定性有所提高，而且在許多方面都有明顯的進(jìn)展。

(1)稀釋液的改進(jìn)當(dāng)稀釋液中添加清潔劑Orvas Es Paste(OEP)時(shí)，由于其能將脂肪球分解，因此有利于卵磷脂與細(xì)胞膜之間的相互作用，從而明顯提高了卵黃的保護(hù)效應(yīng)。在冷凍和解凍過(guò)程中，添加抗氧化劑，如維生素E、谷胱甘肽或超氧化物歧化酶可以阻止脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化。

(2)控制冷凍過(guò)程溫度的控制是精液冷凍成功的關(guān)鍵。以往在冷凍豬精液時(shí)通常采用冷凍大容量細(xì)管(5～6 mL)，冷凍和解凍過(guò)程中溫度不好控制，尤其是細(xì)管中心的溫度更難控制。如果將精液分裝在0.5 mL細(xì)管中(含2×109個(gè)精子)，解凍后再稀釋到適宜的容積，對(duì)冷凍溫度的控制要容易些，這樣的精液量也適宜解凍后輸精。有一種“扁平袋冷凍系統(tǒng)”，可將含5×109個(gè)精子的5 mL扁平塑料袋(內(nèi)裝有稀釋液)進(jìn)行冷凍，但必須保證受冷均勻、有效。

(3)公豬的選擇可根據(jù)精子對(duì)冷凍的反應(yīng)選擇公豬，選擇的公豬精液如果能很好地耐受冷凍，則精液在冷凍解凍后質(zhì)量穩(wěn)定，很少有射出的精液在冷凍后不能生存。有人建議應(yīng)根據(jù)精液的耐凍性對(duì)公豬進(jìn)行優(yōu)劣評(píng)定。在牛人工授精的早期，曾進(jìn)行過(guò)類(lèi)似的選擇，并以此有效淘汰了精液不耐凍的公牛(至少在奶牛上有效)。

(4)輸精近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，解凍后存活的精子并非沒(méi)有發(fā)生變化。在雌性生殖道內(nèi)，部分精子發(fā)生類(lèi)似獲能的反應(yīng)變化，使精子在雌性生殖道內(nèi)存活的時(shí)間縮短。選擇適宜的輸精位置和時(shí)間，有助于提高冷凍精液的受胎率和窩產(chǎn)仔數(shù)。

3　傳染病的控制

用于采精的公豬應(yīng)進(jìn)行血清學(xué)檢查，確保它們沒(méi)有攜帶生殖傳染病和其他有可能危害畜群健康的疾病。精液中添加抗生素可以消除非特異性和致病性細(xì)菌?？刂萍膊鞑プ钣行У姆椒ㄊ菣z疫每月進(jìn)場(chǎng)的豬群。在此期間，對(duì)觀察到有疾病臨床癥狀的公豬及時(shí)進(jìn)行血清學(xué)檢查。

2016-04-25

S828.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

1005-2739(2016)05-0030-02