姜輝，劉健，孟楣，戴敏，董六一

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，合肥 230031；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院；3.安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院)

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·基礎(chǔ)研究·

新風(fēng)膠囊連續(xù)灌胃對(duì)大鼠的毒性研究

姜輝1，劉健1，孟楣1，戴敏2，董六一3

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，合肥 230031；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院；3.安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院)

[摘要]目的觀察新風(fēng)膠囊連續(xù)灌胃6個(gè)月對(duì)大鼠的毒性反應(yīng)。方法選用SD大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為新風(fēng)膠囊(3.0 g浸膏/kg，9.0 g浸膏/kg，27.0 g浸膏/kg)組和溶媒對(duì)照組，每組20只。灌胃給予相應(yīng)濃度藥物，每天1次，連續(xù)6個(gè)月。除觀察一般狀況外，于給藥后3個(gè)月、6個(gè)月、恢復(fù)15 d后檢測(cè)血液學(xué)、血液生化學(xué)相關(guān)指標(biāo)，處死大鼠，摘取主要臟器，計(jì)算臟器系數(shù)，并進(jìn)行臟器病理組織學(xué)檢查。結(jié)果與溶媒對(duì)照組相比，新風(fēng)膠囊各劑量組大鼠一般狀況、體質(zhì)量、攝食量均無(wú)明顯變化；血液學(xué)、血液生化學(xué)個(gè)別指標(biāo)雖有所改變，但屬正常生理范圍的波動(dòng)；肺臟、脾臟系數(shù)變化雖有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但組織病理學(xué)檢查并未發(fā)現(xiàn)病理組織學(xué)改變。結(jié)論新風(fēng)膠囊長(zhǎng)期用藥對(duì)大鼠無(wú)明顯毒性。

[關(guān)鍵詞]藥物毒性;中草藥；關(guān)節(jié)炎,類(lèi)風(fēng)濕；大鼠,Sprague-Dawley

新風(fēng)膠囊是在長(zhǎng)期理論與臨床實(shí)踐基礎(chǔ)上，依據(jù)新安醫(yī)學(xué)“脾虛致痹，從脾治痹”理論創(chuàng)制而成的特色醫(yī)院制劑[1-2]，具有“益氣健脾，化濕通絡(luò)”之功效，主治類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，臨床運(yùn)用十余年，療效確切[3-4]，但目前尚缺乏新風(fēng)膠囊長(zhǎng)期服用安全性評(píng)價(jià)研究。本實(shí)驗(yàn)擬按照《中藥、天然藥物長(zhǎng)期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》要求[5]，觀察新風(fēng)膠囊重復(fù)給藥的長(zhǎng)期毒性，以期為其臨床應(yīng)用及后期開(kāi)發(fā)提供毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料與方法

1.1動(dòng)物SD大鼠，SPF級(jí)，80只，雌雄各半，體質(zhì)量90～120 g，由安徽省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(皖)2011-0002；SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)鼠料，由南京安立默科技有限公司提供。

1.2受試藥物新風(fēng)膠囊浸膏粉，深褐色粉末，每克含7.143 g生藥，批號(hào)：20140704，由安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑中心提供。

1.3儀器電子天平JT12001，上海精天電子儀器廠；全自動(dòng)高速冷凍離心機(jī)GL20A，湖南儀器儀表總廠離心機(jī)廠；Alcyon-300 型全自動(dòng)生化分析儀，美國(guó)雅培公司；電子顯微鏡XDS-1B，重慶光電儀器總公司。

1.4動(dòng)物分組與給藥大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按隨機(jī)數(shù)字表分為對(duì)照組、新風(fēng)膠囊(3 g浸膏/kg、9g浸膏/kg、27g浸膏/kg)組，分別相當(dāng)于臨床劑量的16.67倍、50倍、150倍，每組20只，雌雄各半。灌胃給予相應(yīng)劑量藥物，對(duì)照組給予等量溶媒，每天1次，每周6天，連續(xù)6個(gè)月，停藥恢復(fù)15 d。

1.5觀察指標(biāo)[6-8]

1.5.1一般狀況觀察給藥日每天上下午各觀察1次，非給藥日每天觀察1次。觀察并記錄每只動(dòng)物的臨床癥狀、瀕死或死亡情況；如出現(xiàn)毒性反應(yīng)，應(yīng)適當(dāng)增加觀察的頻率，詳細(xì)記錄毒性征狀起始時(shí)間、持續(xù)時(shí)間、嚴(yán)重程度等。

1.5.2體質(zhì)量稱(chēng)重隨機(jī)分組當(dāng)日稱(chēng)重1次，以后每周稱(chēng)重1次，解剖前稱(chēng)重1次。

1.5.3攝食量測(cè)定首次給藥后每周記錄1次每籠大鼠24 h所消耗的食物量，計(jì)算每只大鼠每天平均攝取量。

1.5.4血液生化學(xué)檢查給藥3個(gè)月、給藥6個(gè)月后每組分別處死8只大鼠、恢復(fù)15 d后每組處死4只大鼠，分別測(cè)定各組大鼠血液學(xué)和血液生化學(xué)指標(biāo)。

1.5.5臟器指數(shù)及病理組織學(xué)檢查取相應(yīng)器官，稱(chēng)重，計(jì)算臟器指數(shù)，并進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，方差不齊時(shí)用t'檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1新風(fēng)膠囊對(duì)大鼠一般狀況的影響 與對(duì)照組相比，新風(fēng)膠囊低、中、高劑量組在連續(xù)灌胃給藥3個(gè)月、6個(gè)月、恢復(fù)15 d期間，大鼠一般活動(dòng)、攝食、飲水正常，毛發(fā)光澤，眼、鼻、口無(wú)分泌物，未見(jiàn)異常情況。在給藥22周時(shí)，高劑量組有1只雄性大鼠死亡，在給藥24周和25周時(shí)，低劑量組分別有1只雄性大鼠死亡，死亡大鼠解剖均未發(fā)現(xiàn)臟器器質(zhì)性病變，提示死亡原因與藥物無(wú)關(guān)，可能窒息所致。

2.2新風(fēng)膠囊對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響與對(duì)照組比較，新風(fēng)膠囊高劑量組雄性SD大鼠在7～12周期間體質(zhì)量顯著性增加(P<0.05或0.01)，而高劑量組雌性SD大鼠體質(zhì)量在21周有一過(guò)性顯著降低。新風(fēng)膠囊中、低劑量組大鼠體質(zhì)量在實(shí)驗(yàn)研究期間，與對(duì)照組基本一致，未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果如圖1所示。

2.3新風(fēng)膠囊對(duì)大鼠攝食量的影響 與對(duì)照組相比，新風(fēng)膠囊低、中、高劑量組在灌胃給藥3個(gè)月、6個(gè)月、恢復(fù)期，大鼠攝食量均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果如圖2所示。

2.4新風(fēng)膠囊對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響與對(duì)照組相比，新風(fēng)膠囊不同劑量灌胃給藥3個(gè)月、恢復(fù)期大鼠血液學(xué)指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；給藥6個(gè)月時(shí)，高、中、低劑量組雄性大鼠RBC和HGB水平顯著降低(P<0.05)，同期雌性大鼠RBC和HGB值與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且各給藥組大鼠RBC和HGB值均在正常值范圍內(nèi)，因此給藥6個(gè)月時(shí)雄性SD大鼠RBC和HGB值降低與藥物無(wú)關(guān)，可能屬于一過(guò)性的波動(dòng)，結(jié)果見(jiàn)表1～3。

2.5新風(fēng)膠囊對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)的影響與對(duì)照組比較，連續(xù)灌胃給予新風(fēng)膠囊3個(gè)月后，雄性高、中、低劑量組、雌性中劑量組大鼠AST水平，雄性高劑量組大鼠ALT水平顯著降低；雄性中劑量組大鼠ALB和CHOL水平，雌性高、中、低劑量組大鼠TP和ALB水平出現(xiàn)一過(guò)性升高；雌性高劑量組大鼠TG水平，雌性高、中劑量組大鼠GLU水平顯著降低；但上述變化無(wú)劑量關(guān)系，且在正常范圍之內(nèi)，屬不確定變化。其他血液生化學(xué)指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表4。

±s)

注：RBC：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，HGB：血紅蛋白、PLT：血小板計(jì)數(shù)，WBC：白細(xì)胞計(jì)數(shù)，NE%：中性粒細(xì)胞百分比，NE#：中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，LY%：淋巴細(xì)胞百分比，LY#：淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)

±s)

注：RBC：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，HGB：血紅蛋白、PLT：血小板計(jì)數(shù)，WBC：白細(xì)胞計(jì)數(shù)，NE%：中性粒細(xì)胞百分比，NE#：中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，LY%：淋巴細(xì)胞百分比，LY#：淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù);與同性別對(duì)照組比較，aP<0.05

±s)

注：RBC：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，HGB：血紅蛋白、PLT：血小板計(jì)數(shù)，WBC：白細(xì)胞計(jì)數(shù)，NE%：中性粒細(xì)胞百分比，NE#：中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，LY%：淋巴細(xì)胞百分比，LY#：淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)

±s)

注：AST：天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶，ALT：丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶，ALP：堿性磷酸酶，TP：總蛋白，ALB：白蛋白，CHO：總膽固醇，TG：三酰甘油，TBIL：總膽紅素，GLU：血糖，BUN：尿素氮，CREA：血肌酐，K+：鉀離子，Na+：鈉離子，Cl-：氯離子;與同性別對(duì)照組比較，aP<0.05,bP<0.01

與對(duì)照組比較，連續(xù)灌胃給予新風(fēng)膠囊給藥6個(gè)月后，雄性大鼠高、低劑量組BUN和CREA水平，雄性中劑量組大鼠GLU水平降低。其他血液生化學(xué)指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表5。

與對(duì)照組比較，恢復(fù)期各組大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)未見(jiàn)異常變化，結(jié)果見(jiàn)表6。

±s)

注：AST：天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶，ALT：丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶，ALP：堿性磷酸酶，TP：總蛋白，ALB：白蛋白，CHO：總膽固醇，TG：三酰甘油，TBIL：總膽紅素，GLU：血糖，BUN：尿素氮，CREA：血肌酐，K+：鉀離子，Na+：鈉離子，Cl-：氯離子;與同性別對(duì)照組比較，aP<0.01,bP<0.05

±s)

注：AST：天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶，ALT：丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶，ALP：堿性磷酸酶，TP：總蛋白，ALB：白蛋白，CHO：總膽固醇，TG：三酰甘油，TBIL：總膽紅素，GLU：血糖，BUN：尿素氮，CREA：血肌酐，K+：鉀離子，Na+：鈉離子，Cl-：氯離子

2.6新風(fēng)膠囊對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響與對(duì)照組比較，連續(xù)灌胃新風(fēng)膠囊3個(gè)月后，雄性高劑量組大鼠肺臟系數(shù)，雄性高劑量組和中劑量組、雌性高劑量大鼠脾臟系數(shù)顯著性降低，需病理組織學(xué)檢查以進(jìn)一步評(píng)價(jià)；其他各臟器系數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見(jiàn)表7。

與對(duì)照組比較，連續(xù)灌胃新風(fēng)膠囊6個(gè)月后，恢復(fù)期各組大鼠臟器系數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見(jiàn)表8，9。

±s)

注：與同性別對(duì)照組比較，aP<0.05,bP<0.01

±s)

注：與同性別對(duì)照組比較，aP<0.05

±s)

2.7新風(fēng)膠囊對(duì)大鼠臟器病理組學(xué)的影響大鼠解剖后，經(jīng)肉眼觀察，各組大鼠胸腔、腹腔漿膜光滑，無(wú)胸水、出血、粘連等改變；各臟器的形態(tài)、大小、色澤均未發(fā)現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的變化。光鏡下，連續(xù)灌胃新風(fēng)膠囊3個(gè)月、6個(gè)月、恢復(fù)15 d后，各組大鼠腦、胸腺、肝臟、腎臟、腎上腺、脾臟、肺臟、心臟、附睪、睪丸、卵巢、子宮等臟器病理學(xué)檢查均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3討論

新風(fēng)膠囊由黃芪、薏苡仁、雷公藤、蜈蚣等藥物組成，方中黃芪益氣養(yǎng)血固表、利水消腫、健脾化濕除痹，薏苡仁健脾利濕、舒筋除痹，共為君藥；雷公藤祛風(fēng)除濕，活血通絡(luò)，消腫止痛，蜈蚣祛風(fēng)止痙、通絡(luò)止痛、攻毒散結(jié)，共為臣藥。諸藥合用，共奏“益氣健脾，化濕通絡(luò)”之功，切中RA“脾虛濕困、氣血虧虛、痰瘀互結(jié)”的基本病機(jī)[9]。

本研究發(fā)現(xiàn)，新風(fēng)膠囊連續(xù)灌胃3個(gè)月、6個(gè)月、恢復(fù)15 d后，各組大鼠一般狀況、攝食量、體質(zhì)量均無(wú)明顯變化；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，有3只大鼠死亡，但大體解剖均未發(fā)現(xiàn)臟器器質(zhì)性病變，提示其死亡原因與藥物無(wú)關(guān)，可能是窒息所致。

血液學(xué)、血液生化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，新風(fēng)膠囊連續(xù)灌胃3個(gè)月、6個(gè)月、恢復(fù)15 d后，其各項(xiàng)血液學(xué)、血液生化學(xué)指標(biāo)基本正常；雖有個(gè)別指標(biāo)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異，但差異無(wú)規(guī)律性，且未隨給藥周期的延長(zhǎng)、給藥劑量增大而加劇。因此，考慮上述變化屬正常生理范圍的波動(dòng)，并無(wú)毒理學(xué)意義[10]。

大鼠臟器系數(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，灌胃給予新風(fēng)膠囊6個(gè)月、恢復(fù)期各組大鼠臟器系數(shù)未見(jiàn)顯著變化；灌胃給藥3個(gè)月時(shí)，肺臟、脾臟系數(shù)雖有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但6個(gè)月時(shí)恢復(fù)正常，同時(shí)結(jié)合大鼠剖檢和組織病理學(xué)檢查，并未發(fā)現(xiàn)到，肺臟、脾臟有外觀和相應(yīng)的病理組織學(xué)改變。因此，考慮上述差異可能與解剖操作、放血不充分有關(guān)，而與新風(fēng)膠囊本身無(wú)關(guān)。

綜上，新風(fēng)膠囊無(wú)明顯的長(zhǎng)期毒性，其臨床用藥量為安全劑量，為新風(fēng)膠囊臨床應(yīng)用提供了可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

(本文圖1～4見(jiàn)插圖1-2)

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Experimental study on long-term toxicity of Xingfeng capsules in ratsJiangHui*,LiuJian,MengMei,DaiMin,DongLiuyi(*TheFirstHospitalAffiliatedtoAnhuiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Hefei230031,China)

[Abstract]ObjectiveTo observe the long-term toxicity of Xinfeng capsules(XFC) by continuously oral administration on rats.MethodsSD rats were randomly divided into four groups: normal control group,XFC high-dose group,XFC medium -dose group and XFC low-dose groups.Different doses of XFC were administrated by gavage once a day for 6 months.The body weight and food intake were observed and calculated during the administration.The hematology,blood biochemistry were measured at the 3,6 months of the administration and 15 days after the end of administration,respectively.After that,all rats were executed and main organs were examined by pathological method.ResultsThe appearance and behavior,body weight and food intake of rats treated with XFC were no significant difference compared with the controls.Individual index of hematology,blood biochemistry such as RBC,HGB,AST had small change but were within the normal physiological range.In addition,XFC reduced the lung and spleen coefficients,but no significant change appeared in histopathologic morphology.ConclusionXFC has no obvious toxicity in rats for long-term administration.

[Key words]Drug toxicity;Drugs Chinese herbal;Arthritis,rhenmatoid;Rats,sprague-dawley

(收稿日期：2015-09-10)

Corresponding author:Liu Jian,Email: liujianahzy@126.com

中圖分類(lèi)號(hào):R595

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

DOI:10.3969/J.issn.1672-6790.2016.01.024

作者簡(jiǎn)介：姜輝,博士在讀,主管藥師,Email:jhanbing@163.com通信作者：劉健，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，Email: liujianahzy@126.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家科技支撐計(jì)劃新安醫(yī)學(xué)傳承與發(fā)展研究子課題新安醫(yī)家名方驗(yàn)方篩選研究(2012BAI23B03)；國(guó)家中醫(yī)藥重點(diǎn)學(xué)科臨床中藥學(xué)建設(shè)項(xiàng)目(國(guó)中醫(yī)藥人教發(fā)[2012]32號(hào))