孫麗麗

哈藥集團世一堂制藥廠 黑龍江哈爾病 150000

試析對大黃中土大黃苷檢測方法的改進

孫麗麗

哈藥集團世一堂制藥廠 黑龍江哈爾病 150000

目的：在大黃類中成藥中不含有與土大黃苷物質(zhì)。本文主要通過HPLC法來對四類含有大黃的中成藥進行鑒別與測定，研究其中土大黃苷的含量，分析中成藥中大黃的質(zhì)量。方法：利用Lichrospher C18色譜柱，乙腈-甲醇-水作為流動相，檢測到波長是320nm，流速是 1.0mL·min-1，并且采用外標法進行定量性質(zhì)的測定。結(jié)果：當土大黃苷保持在 2.62～261.6μg·mL-1的范圍中時，和峰面積之間會形成良好的線性關(guān)系；平均回收率是96.30%。結(jié)論：本次實驗采用的方法簡單、準確，通用功能較強，具備較高的靈敏度。在鑒別與測定大黃的中成藥中土大黃苷時，值得推廣應用。

大黃；土大黃苷；檢測；方法

大黃屬于一種應用范圍較廣的中藥，其功能包括瀉熱通腸、化瘀通經(jīng)、涼血解毒。不少普遍的中藥處方中都包含大黃。在相關(guān)的藥物書籍中，提出大黃主要有三種，分別是蓼科植物掌葉大黃、唐古特大黃以及藥用大黃的干燥根及根莖。另外，同類的植物中有一種土大黃，人們經(jīng)常分不清土大黃與正品大黃。二者在化學構(gòu)成與功效方面有不同之處，在價格方面也有很大的差異。本文主要分析了大黃中土大黃苷檢測方法的改進，具體內(nèi)容如下。

一、儀器與試劑

1、METTLER AE-240電子天平，Waters 2690液相色譜儀系統(tǒng)，Millennium32色譜數(shù)據(jù)處理軟件。土大黃苷對照品[-9國藥品生物制品檢定所，批號：794—200103(供鑒別用)]；土大黃(成都康弘制藥有限公司，由無錫藥品檢驗所中藥室鑒定)；炎可寧片(批號：20080307361，廠家1)；炎可寧片(批號：050801，廠家2)；一清顆粒(批號：20080401，廠家3)；一清顆粒(批號：070702，廠家4)；清火片(批號：060901，廠家5)；清火片(批號：20070307，廠家6)；麻仁潤腸丸(批號：061001，廠家7)；麻仁潤腸丸(批號：8013108，廠家 8)。乙腈、甲醇為色譜醇，水為二次純化水，其它試劑均為分析純。

二、方法與結(jié)果

1、色譜條件

色譜柱為Lichrospher C18(4．6ram×250mm，5μm)，以乙腈一甲醇一水(7：30：63)為流動相，檢測波長為320nm，流速為1.0m L·min-1，進樣量為10μL。

2、溶劑的準備

⑴對照試液的準備

采用精密的儀器量取 12mg的土大黃苷，加入到容量為200mL的量杯中，再添加濃度為50%的甲醇，進行均勻的攪拌后，稀釋到固定刻度，作為對照試液。

⑵供試品試液的準備

采用精密的儀器量取0.1g的土大黃，加入25mL的甲醇。進行加熱與回流，一小時后進行過濾，量取10mL的過濾液，加入25mL的水，作為供試品試液。

⑶炎可寧片

選取10粒炎可寧片，去除糖衣，研磨成細末。然后量取0.2g左右的炎可寧片藥物，加入到錐形瓶內(nèi)。然后添加25mL的甲醇，進行加熱與回流，一小時后進行過濾，量取10mL的過濾液。然后加入25mL的水，作為供試品試液。

⑷一清顆粒

選取0.5g左右的一清顆粒，加入到錐形瓶內(nèi)。然后添加25mL的甲醇，進行加熱與回流，一小時后進行過濾。量取10mL的過濾液，加入25mL的水，作為供試品試液。

⑸清火片

選取10片清火片，研磨成細末，然后量取0.2g加入到錐形瓶內(nèi)。然后添加25mL的甲醇，進行加熱與回流，一小時后進行過濾，量取10mL的過濾液。然后加入25mL的水，作為供試品試液。

⑹麻仁潤腸丸

選取10丸麻仁潤腸丸，剪碎后，量取0.1g加入到錐形瓶內(nèi)。然后添加25mL的甲醇，進行加熱與回流，一小時后進行過濾，量取10mL的過濾液。然后加入25mL的水，作為供試品試液。

3、專屬性試驗

在上述色譜條件下，土大黃苷峰形良好，保留時間分別為10．32min，樣品中雜質(zhì)不干擾樣品測定?？梢钥闯?，土大黃藥材和廠家l的炎可寧片(廠家3的清火片，廠家5的一清顆粒，廠家 7的麻仁潤腸丸)供試品溶液在土大黃苷對照品相應保留時間處有峰出現(xiàn)，通過二極管陣列進一步檢測，土大黃苷對照品和廠家1的炎可寧片(廠家3的清火片，廠家5的一清顆粒，廠家7的麻仁潤腸丸)供試品溶液主峰的紫外光譜圖一致。以上 4個供試品送江蘇省藥品檢驗所進行質(zhì)譜分析鑒定，確認該峰為土大黃苷峰。廠家2的炎可寧片(廠家4的清火片，廠家6的一清顆粒，廠家8的麻仁潤腸丸)供試品溶液在10.32min附近沒有吸收峰。

三、討論

在此次實驗過程中，選用的有甲醇-水、乙腈-水、乙腈-甲醇-水，甲醇為0.05mol·L-1磷酸二氫鉀系統(tǒng)。實驗結(jié)果顯示，在運用甲醇-乙腈-水系統(tǒng)的過程中，土大黃苷的峰形較好，而且供試液的主峰可以和雜質(zhì)峰進行基線分割。因此選取乙腈-甲醇-水系統(tǒng)作為最佳流動相。由于二苯乙烯類化合物能夠溶解在甲醇、乙醇、乙酸乙酯中，同一批號的樣品應該依次采用甲醇、乙醇、乙酸乙酯、濃度為80%的乙醇。結(jié)果顯示，當提取溶液是甲醇時，對于土大黃苷提取的比較完整，而且其中含有的雜質(zhì)量比較小。因此，選取甲醇當做提取試液。但是，甲醇作為溶液時，土大黃苷的峰形前延比較嚴重，因此在處理樣品時，應該適當?shù)挠盟♂專源苏{(diào)整峰形。

在提取時間方面，考察了加熱回流0.5、1、1.5、2h，結(jié)果表明加熱回流1h可將土大黃苷提取完全。分析炎可寧片、清火片、一清顆粒和麻仁潤腸丸4種中成藥的處方和功能主治，大黃用量均比較大，都具有清火瀉下的作用。而土大黃幾乎沒有清火瀉下的作用，且臨床副作用較大，病人在不知情的狀況下長期服用，容易貽誤病情，造成不良反應，危害較大。在后續(xù)檢驗過程中，在多種含大黃中成藥中均發(fā)現(xiàn)使用土大黃代替大黃入藥的情況，具有一定的普遍性。因此筆者建議應盡快修訂大黃[檢查]項下土大黃苷檢測方法，并建立～種通用性好的HPLC補充檢驗方法或在具體品種[檢查]項下規(guī)定土大黃檢查，監(jiān)控中成藥中的土大黃苷，為檢測含大黃中成藥中是否使用土大黃代替大黃投料提供檢驗依據(jù)。

土大黃苷(rhaponticin, rhaponitin 或poniticin)分子，化學名為3-羥基-5-[(1E)-2-(3-羥基-4-甲氧基苯基)乙烯基]苯基-β-D-葡萄糖苷，為二苯乙烯的衍生物，屬于茋苷。藥典收載的大黃項下規(guī)定不可檢出土大黃苷。但近期研究表 明土大黃苷具有抗菌、改善微循環(huán)、降血脂、降血糖、抗腫瘤、抑制過敏反應、調(diào)節(jié)機體免疫防御系統(tǒng)、抗 血栓及抗氧化等作用。藥典規(guī)定藥用大黃中不得檢出土大黃苷，但隨 著提取分離以及分析技術(shù)的發(fā)展在眾多大黃屬植 物中分離或檢測出土大黃苷。研究表明：土大黃苷 及其代謝產(chǎn)物具有多種藥理活性，其中土大黃苷可能作為PPAR-γ的激動劑以降低血糖濃度達到治療糖尿病的作用且作用效果和噻唑烷二酮類藥物吡咯列酮相當尤其引人注目，土大黃苷很可能成為從天然產(chǎn)物中開發(fā)高效、低不良反應的糖尿病藥物。本文建立了HPLC法鑒別大黃中土大黃苷，同時采用本法對4種含大黃中成藥中土大黃苷進行檢查，確證其中是否以土大黃代替大黃投料。經(jīng)實驗證明，該方法通用性好，簡便準確，在4種含大黃中成藥的檢測中均無雜質(zhì)干擾，方法可行。該HPLC法檢測土大黃苷優(yōu)于藥典紙色譜法，更具有專屬性，準確性，同時還能應用于含大黃中成藥的監(jiān)控。

[1]徐穎，郭增軍，譚林．土大黃苷研究進展[J]．中國現(xiàn)代應用藥學雜志，2009，26(7)：549—550．

[2]陳志強，李貞景，傅志良，等．HPLC測定河套大黃中土大黃苷的含量[J]．分析試驗室，2009，28(1)：101—102．

R284.1

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1672-5018（2016）10-273-01