陳云政 青海省門(mén)源縣農(nóng)牧和科技局 810300

肉雞感染雞傳染性支氣管炎病毒的診斷

陳云政 青海省門(mén)源縣農(nóng)牧和科技局 810300

2015年10月，青海省海北州某肉雞飼養(yǎng)場(chǎng)飼養(yǎng)的肉仔雞發(fā)生了以呼吸困難、食欲減退、飲欲增加、流淚、流鼻涕、咳嗽、打噴嚏、縮頭閉目和虛弱嗜睡為主要特征的疫病，經(jīng)臨床和實(shí)驗(yàn)室診斷，確診為由感染IBV所致的雞傳染性支氣管炎。

傳染性支氣管炎；病毒；肉雞；診斷

2015年10月，青海省海北州某肉雞飼養(yǎng)場(chǎng)飼養(yǎng)的肉仔雞爆發(fā)了以呼吸困難、食欲減退、飲欲增加、流淚、流鼻涕、咳嗽、打噴嚏、縮頭閉目和虛弱嗜睡為主要特征的疫病，經(jīng)臨床初步診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷，最后確診為由感染IBV所致，現(xiàn)將整個(gè)診斷過(guò)程報(bào)道如下。

（1）材料與方法。病毒RNA提取試劑盒購(gòu)自北京百泰克生物技術(shù)有限公司；一步法RT-PCR試劑盒購(gòu)自寶生物工程（大連）有限公司

（2）臨床診斷。調(diào)查雞場(chǎng)的發(fā)病情況，觀察臨床癥狀和病理變化。

（3）實(shí)驗(yàn)室診斷。無(wú)菌采集病死雞的氣管和腎臟等組織病料，以1∶5的比例加入滅菌生理鹽水后漿勻、碾磨，反復(fù)凍融3次，以10000r/分鐘離心10分鐘，吸取上清液，即得臨床病料樣品。將臨床病料樣品經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后，以尿囊腔方式接種11日齡SPF雞胚10枚，0.2mL/胚，同時(shí)用滅菌生理鹽水接種10枚SPF雞胚作為對(duì)照，37℃孵育120小時(shí)，棄去24小時(shí)內(nèi)死亡雞胚，24小時(shí)后死亡雞胚隨時(shí)取出，無(wú)菌收獲尿囊液，觀察死亡雞胚的病變情況，傳至3代。按照病毒RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)分別提取臨床病料樣品和第3代分離毒株的病毒基因組RNA。參照潘志剛等[5]的方法設(shè)計(jì)合成1對(duì)IBV特異性檢測(cè)引物，以提取的臨床病料樣品和第3代分離毒株的基因組RNA為模板。參照潘志剛等[5]的方法分別進(jìn)行臨床病料樣品和第3代分離毒株的RT-PCR擴(kuò)增，RT-PCR擴(kuò)增結(jié)束后經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

（1）臨床診斷結(jié)果。剛開(kāi)始雛雞經(jīng)常擁擠在一起，隨后雛雞開(kāi)始食量減少，飲水量增加，并開(kāi)始排白色稀糞，此時(shí)采用土霉素進(jìn)行藥物治療，病情未見(jiàn)好轉(zhuǎn)。隨著病情逐漸加重，已呈全雞群發(fā)病，出現(xiàn)流鼻涕、流淚、咳嗽、打噴嚏、伸頸張口喘氣、縮頭閉目、垂翅和虛弱嗜睡等癥狀，雞冠呈藍(lán)紫色，死亡率不斷增加，至臨診前死亡率已達(dá)到20％。剖檢病死雞可見(jiàn)主要病變?cè)诤粑篮湍I臟，鼻腔、氣管和支氣管內(nèi)充血，并伴有淡黃色黏液性滲出物，氣囊渾濁，腎腫大呈花斑狀，腎小管內(nèi)有尿酸鹽沉積。

（2）實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果。接種病料樣品的SPF，雞胚在接種36小時(shí)后出現(xiàn)死亡。死亡雞胚可見(jiàn)胚體矮小、卷曲呈球形，羊膜水腫增厚，即呈現(xiàn)典型的“侏儒胚”病變特征。部分胚體具有尿酸鹽沉積，剖檢雞胚可見(jiàn)腎臟腫大。傳至第3代，雞胚集中死亡時(shí)間在36～48小時(shí)，死亡雞胚的病變特征更加明顯。RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)顯示，臨床病料樣品和第3代分離毒株的RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在位于459bp左右處均具有特異性條帶，其大小與潘志剛等[5]的報(bào)道一致，表明臨床病料樣品和分離毒株均為IBV陽(yáng)性。

（3）綜合診斷結(jié)果。根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀和病理變化觀察，初步診斷為腎型雞傳染性支氣管炎，經(jīng)病毒分離與雞胚病變觀察和RT-PCR檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)室診斷，確診該雞場(chǎng)此次的疫病致病原為IBV。

3 討論

IBV高度的基因突變率造成了IBV不同毒株抗原性的差異性和復(fù)雜的血清型，各血清型之間沒(méi)有或者僅有部分的交叉免疫保護(hù)作用，而目前我國(guó)IBV商品化的疫苗絕大多數(shù)均為呼吸型IBV毒株，該類疫苗對(duì)呼吸型IBV具有良好的保護(hù)作用，但對(duì)腎型IBV的保護(hù)率較低，導(dǎo)致了近年來(lái)腎型IBV迅速成為我國(guó)的地方優(yōu)勢(shì)流行毒株。腎型IBV與其他型IBV的典型臨床特征是排白色石灰樣糞便，典型的病理變化是腎臟有大量尿酸鹽沉積。此次病例的臨床診斷中就是根據(jù)此典型特征初步診斷為疑似腎型IBV感染。本研究在對(duì)病死雞病變臟器的采集與處理后，通過(guò)傳代SPF雞胚，使雞胚產(chǎn)生縮小卷曲的特征完全符合IBV的生物學(xué)特性，同時(shí)進(jìn)行了RT-PCR檢測(cè)，RT-PCR檢測(cè)結(jié)果再次證實(shí)了此次疫病為腎型IBV感染，綜合多方面診斷后出具確診結(jié)果，使本次病例診斷的準(zhǔn)確性大大提高。

[1]賀會(huì)利，魏小兵，歐長(zhǎng)波，等.雞傳染性支氣管炎病毒研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，35（7）：73-77.

[2]謝洪斌，饒梅，杜丕永.雞傳染性支氣管炎的綜合防控建議[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘，2016，32（2）：168.

[3]宋新宇，劉兆霞，竇小龍，等.2012-2014年我國(guó)雞傳染性支氣管炎分子流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2016，33（1）：19-23.

[4]王敏生.雞傳染性支氣管炎的診斷與防控措施[J].家禽科學(xué)，2015，（12）：45-47.

[5]潘志剛，李軍港.禽傳染性支氣管炎病毒一步法RT-PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J].湖北畜牧獸醫(yī)，2014，35（3）：16-17.