陳云政 青海省門源縣農(nóng)牧和科技局 810300
肉雞感染雞傳染性支氣管炎病毒的診斷
陳云政 青海省門源縣農(nóng)牧和科技局 810300
2015年10月,青海省海北州某肉雞飼養(yǎng)場飼養(yǎng)的肉仔雞發(fā)生了以呼吸困難、食欲減退、飲欲增加、流淚、流鼻涕、咳嗽、打噴嚏、縮頭閉目和虛弱嗜睡為主要特征的疫病,經(jīng)臨床和實驗室診斷,確診為由感染IBV所致的雞傳染性支氣管炎。
傳染性支氣管炎;病毒;肉雞;診斷
2015年10月,青海省海北州某肉雞飼養(yǎng)場飼養(yǎng)的肉仔雞爆發(fā)了以呼吸困難、食欲減退、飲欲增加、流淚、流鼻涕、咳嗽、打噴嚏、縮頭閉目和虛弱嗜睡為主要特征的疫病,經(jīng)臨床初步診斷和實驗室診斷,最后確診為由感染IBV所致,現(xiàn)將整個診斷過程報道如下。
(1)材料與方法。病毒RNA提取試劑盒購自北京百泰克生物技術(shù)有限公司;一步法RT-PCR試劑盒購自寶生物工程(大連)有限公司
(2)臨床診斷。調(diào)查雞場的發(fā)病情況,觀察臨床癥狀和病理變化。
(3)實驗室診斷。無菌采集病死雞的氣管和腎臟等組織病料,以1∶5的比例加入滅菌生理鹽水后漿勻、碾磨,反復(fù)凍融3次,以10000r/分鐘離心10分鐘,吸取上清液,即得臨床病料樣品。將臨床病料樣品經(jīng)0.45μm濾膜過濾后,以尿囊腔方式接種11日齡SPF雞胚10枚,0.2mL/胚,同時用滅菌生理鹽水接種10枚SPF雞胚作為對照,37℃孵育120小時,棄去24小時內(nèi)死亡雞胚,24小時后死亡雞胚隨時取出,無菌收獲尿囊液,觀察死亡雞胚的病變情況,傳至3代。按照病毒RNA提取試劑盒說明書分別提取臨床病料樣品和第3代分離毒株的病毒基因組RNA。參照潘志剛等[5]的方法設(shè)計合成1對IBV特異性檢測引物,以提取的臨床病料樣品和第3代分離毒株的基因組RNA為模板。參照潘志剛等[5]的方法分別進行臨床病料樣品和第3代分離毒株的RT-PCR擴增,RT-PCR擴增結(jié)束后經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。
(1)臨床診斷結(jié)果。剛開始雛雞經(jīng)常擁擠在一起,隨后雛雞開始食量減少,飲水量增加,并開始排白色稀糞,此時采用土霉素進行藥物治療,病情未見好轉(zhuǎn)。隨著病情逐漸加重,已呈全雞群發(fā)病,出現(xiàn)流鼻涕、流淚、咳嗽、打噴嚏、伸頸張口喘氣、縮頭閉目、垂翅和虛弱嗜睡等癥狀,雞冠呈藍紫色,死亡率不斷增加,至臨診前死亡率已達到20%。剖檢病死雞可見主要病變在呼吸道和腎臟,鼻腔、氣管和支氣管內(nèi)充血,并伴有淡黃色黏液性滲出物,氣囊渾濁,腎腫大呈花斑狀,腎小管內(nèi)有尿酸鹽沉積。
(2)實驗室診斷結(jié)果。接種病料樣品的SPF,雞胚在接種36小時后出現(xiàn)死亡。死亡雞胚可見胚體矮小、卷曲呈球形,羊膜水腫增厚,即呈現(xiàn)典型的“侏儒胚”病變特征。部分胚體具有尿酸鹽沉積,剖檢雞胚可見腎臟腫大。傳至第3代,雞胚集中死亡時間在36~48小時,死亡雞胚的病變特征更加明顯。RT-PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示,臨床病料樣品和第3代分離毒株的RT-PCR擴增產(chǎn)物在位于459bp左右處均具有特異性條帶,其大小與潘志剛等[5]的報道一致,表明臨床病料樣品和分離毒株均為IBV陽性。
(3)綜合診斷結(jié)果。根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀和病理變化觀察,初步診斷為腎型雞傳染性支氣管炎,經(jīng)病毒分離與雞胚病變觀察和RT-PCR檢測等實驗室診斷,確診該雞場此次的疫病致病原為IBV。
IBV高度的基因突變率造成了IBV不同毒株抗原性的差異性和復(fù)雜的血清型,各血清型之間沒有或者僅有部分的交叉免疫保護作用,而目前我國IBV商品化的疫苗絕大多數(shù)均為呼吸型IBV毒株,該類疫苗對呼吸型IBV具有良好的保護作用,但對腎型IBV的保護率較低,導(dǎo)致了近年來腎型IBV迅速成為我國的地方優(yōu)勢流行毒株。腎型IBV與其他型IBV的典型臨床特征是排白色石灰樣糞便,典型的病理變化是腎臟有大量尿酸鹽沉積。此次病例的臨床診斷中就是根據(jù)此典型特征初步診斷為疑似腎型IBV感染。本研究在對病死雞病變臟器的采集與處理后,通過傳代SPF雞胚,使雞胚產(chǎn)生縮小卷曲的特征完全符合IBV的生物學(xué)特性,同時進行了RT-PCR檢測,RT-PCR檢測結(jié)果再次證實了此次疫病為腎型IBV感染,綜合多方面診斷后出具確診結(jié)果,使本次病例診斷的準(zhǔn)確性大大提高。
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