黃海玲 陳苑雯 廖選 張雅麗 曹鳳 劉暉 劉宏偉

(暨南大學附屬第一醫(yī)院整形外科，廣東 廣州 510630)

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·護理創(chuàng)新·

細胞輔助脂肪移植術(shù)中顆粒脂肪無菌低溫保存技術(shù)的應用及護理

黃海玲 陳苑雯 廖選 張雅麗 曹鳳 劉暉 劉宏偉

(暨南大學附屬第一醫(yī)院整形外科，廣東 廣州 510630)

脂肪移植； 脂肪源性干細胞； 抽脂術(shù)； 護理

Adipose transplantation; Adipose-derived stem cells; Liposuctio； Nursing

細胞輔助脂肪移植技術(shù)(Cell-assisted lipotransfer)是將自體脂肪源性干細胞(Adipose-derived stem cells，ADSCs)與脂肪細胞混合，聯(lián)合注射移植[1-2]。該技術(shù)涉及到細胞的分離、提取、運輸和保存等一系列操作程序，不同于普通脂肪移植獲取脂肪后馬上進行移植注射。如何在這期間保護顆粒脂肪活力就顯得非常重要。因此，在臨床操作中，從脂肪顆粒的獲取、分離、運輸?shù)揭浦财陂g，需對脂肪進行無菌低溫保存，以保持脂肪細胞良好的活性，提高組織成活率，并嚴防細菌污染的發(fā)生。我院于2011年6月—2015年5月應用自體細胞輔助脂肪移植技術(shù)對進行隆乳、面部年輕化治療加面部脂肪充填的患者，采取了一系列的操作方法[3]，取得了良好的臨床效果?，F(xiàn)報告如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取我院于2011年6月—2015年5月行自體細胞輔助脂肪移植技術(shù)的患者112例，其中隆乳89例，面部年輕化治療加面部脂肪充填23例；患者均為女性；年齡22～51歲，平均年齡36.75歲。所有患者抽脂術(shù)和脂肪注射移植術(shù)兩次手術(shù)均于24 h內(nèi)完成，顆粒脂肪于4 ℃恒溫冰箱內(nèi)保存6～21 h，平均保存15.8 h。注射移植時脂肪低溫保存時間60～145 min，平均低溫保存時間78 min。

1.2 方法 患者先行抽脂術(shù)獲取脂肪。其中111例患者采用局部腫脹麻醉，1例采用硬膜外麻醉；局部腫脹麻醉后，應用自制的獲取可移植脂肪顆粒裝置[4]，抽吸腹部、髂腰部和大腿脂肪；根據(jù)移植需要量獲取相應的脂肪量。抽吸出來的脂肪分成兩部分，一部分作為脂肪支架用于移植充填，脂肪支架放置于儲存桶內(nèi)存放于醫(yī)用4℃恒溫冰箱內(nèi)保存。另一部分脂肪放置于移送桶送細胞處理室富集提取ADSCs。當天下午或次日行注射移植術(shù)，術(shù)前脂肪支架與ADSCs混合，用注射器裝管后放置于存放器內(nèi)低溫保存。

1.3 結(jié)果 隨機抽查15例患者，抽脂時，脂肪回收瓶壁冰水溫度為1.3～10.3 ℃，平均溫度為(5.8±2.4)℃；脂肪回收瓶壁脂肪抽出物部位溫度7.6～12.8 ℃，平均溫度為(9.3±3.6)℃。儲存桶打包放冰箱前，桶內(nèi)活動板下溫度為11.6～16 ℃，平均溫度為(12.8±1.4)℃；注射器脂肪處管壁為15.4～17.5℃，平均溫度為(16.2±1.1)℃。脂肪注射時，開蓋時桶內(nèi)溫度為3.7～4.8 ℃，平均溫度為(4.1±0.3)℃；方盒里防水單上溫度為1.6～8.9℃，平均溫度為(5.3±1.8)℃；注射器脂肪處管壁溫度為8.5～15.8 ℃，平均溫度為(10.2±2.5)℃。同時對樣本進行檢測，即抽脂時保留脂肪、送分離提取脂肪源性干細胞脂肪、脂肪干懸液和保留脂肪顆粒，行ADSCs活性檢測和細菌培養(yǎng)，結(jié)果所有檢測標本顯示ADSCs生長良好，細菌培養(yǎng)均為陰性。術(shù)后隨訪全部患者未發(fā)現(xiàn)移植區(qū)感染，患者滿意度較高。

2 無菌低溫保存技術(shù)及護理

2.1 特殊用物 1L容量脂肪回收瓶3個(上海吸引器廠)，CV-20型STNC單向閥1個(廣州空氣壓縮機廠生產(chǎn))，抽脂機和抽脂器械一套(上海眾知天工醫(yī)療器械有限公司)，14 cm×16 cm不銹鋼盅1個，20 cm×33 cm不銹鋼儲存桶1～2個(自制)，18 cm×28 cm不銹鋼移送桶1～3個(自制)，29 cm×44 cm不銹鋼存放器1個(自制)，3.5 mm×35 cm平頭長針頭1支(自制)，海爾恒溫冰箱一臺，紅外線溫度計1個(CEM DT-810,-30～260 ℃)，小冰箱一個(或40 cm×35 cm泡沫箱一個)，500 mL無菌鹽水冰塊3塊，100 mL無菌鹽水冰塊12～14塊，冰沙適量。

2.2 抽脂獲取脂肪過程中的無菌低溫保存技術(shù)及護理 為了獲取顆粒均勻、適合移植的脂肪細胞，需要使用小管徑抽脂針(管徑2.5～3.5 mm)、(30±5)kPa的低壓力進行抽脂術(shù)獲取脂肪，這使得抽脂手術(shù)所需時間比較長，因此，獲取脂肪過程中脂肪顆粒要置于低溫環(huán)境。脂肪抽吸過程中，用不銹鋼盅內(nèi)裝500 mL無菌鹽水冰塊1塊加4 ℃無菌冰鹽水700 mL，脂肪回收瓶放入其中，使瓶內(nèi)所收集脂肪處于低溫環(huán)境，以保持脂肪獲取過程中能保持脂肪細胞良好活性。

2.3 等待分離提取脂肪源性干細胞過程中的無菌低溫保存技術(shù)及護理[5]

2.3.1 密閉無菌保存可移植脂肪顆粒儲存桶的制作 選用不銹鋼材料，制成直徑20 cm、高33 cm圓柱形桶；桶內(nèi)高15 cm處設(shè)一圈0.4 cm支撐突出；一塊直徑19.5 cm圓形平面不銹鋼薄板，平面設(shè)12個直徑為3.2 cm的圓形掏空；使用時把有12個掏空的不銹鋼圓形活動板放置于儲存桶內(nèi)支承突出處，此板可活動拿出；桶口設(shè)四個活動密封扣；蓋子內(nèi)貼密封膠板。蓋上蓋子，扣上4個密封扣后，桶內(nèi)處于密封狀態(tài)。

2.3.2 具體操作方法及護理配合 (1)脂肪裝管。用50 mL注射器連接內(nèi)徑3.5 mm×35 cm平頭長針頭，從脂肪回收瓶蓋吸入口抽吸脂肪，即操作過程中脂肪顆粒始終處于密閉中，盡可能不暴露在空氣中，根據(jù)移植需要量抽取相應脂肪量。抽好脂肪后注射器針頭端連接塞子。(2)儲存桶內(nèi)放置冰塊。打開已滅菌好的儲存桶蓋子，把2袋100 mL的無菌鹽水冰塊放進已滅菌好的儲存桶內(nèi)，再把有12個掏空的不銹鋼活動板放置于儲存桶內(nèi)支承突出處。裝好脂肪的注射器塞子端朝下放進桶內(nèi)圓形掏空處，讓注射器呈垂直狀。桶內(nèi)放冰塊的目的是為了在收集脂肪的過程中，桶內(nèi)脂肪處于低溫環(huán)境。(3)脂肪需要量收集完畢后，把桶內(nèi)融化那部分冰水去掉，蓋上蓋子，扣緊密封扣。密封蓋子一旦蓋上，直到取用脂肪時方能開蓋，避免中途開蓋導致污染。紅外線溫度計檢測儲存桶打包放冰箱前桶內(nèi)活動板下溫度和注射器脂肪處管壁溫度。(4)脂肪放進儲存桶后盡可能在1 h內(nèi)進4 ℃恒溫冰箱。用無菌包布將儲存桶無菌打包，再交給巡回護士。巡回護士在儲存桶外面貼好標簽，然后放進專門存放無菌脂肪的醫(yī)用4 ℃恒溫冰箱內(nèi)保存。標簽必須準確，以防不同患者的顆粒脂肪混淆不清，發(fā)生移植錯誤。

2.4 移送脂肪過程中的無菌低溫保存技術(shù)及護理 如果細胞處理室是和手術(shù)室分隔兩處，脂肪移送至細胞處理室的運輸過程中也要進行低溫保存。

2.4.1 密閉移送桶的制作 選用不銹鋼材料，制成直徑18 cm、高28 cm圓柱形桶；桶口設(shè)4個活動密封扣；蓋子內(nèi)貼密封膠板。蓋上蓋子，扣上4個密封扣后，桶內(nèi)處于密封狀態(tài)。

2.4.2 具體操作方法及護理配合 (1)把脂肪回收瓶的吸入口和引出口用短無菌管封口。(2)把脂肪回收瓶放進已滅菌的移送桶內(nèi)，蓋上蓋子，扣緊密封扣。(3)把移送桶無菌打包，放進小冰箱內(nèi)進行運送。沒有小冰箱可用內(nèi)裝冰沙的泡沫箱代替。

2.5 注射時可移植脂肪顆粒的無菌低溫技術(shù)及護理[6]

2.5.1 脂肪存放器的制作 選用不銹鋼材料，制成一個長方形大方盒，由盒體和蓋子組成。盒體由兩個獨立的內(nèi)、外盒組成，內(nèi)盒小外盒大，內(nèi)盒為42 cm×28 cm×7.5 cm，外盒為44 cm×29 cm×8 cm，內(nèi)外盒間有1 cm的空隙；蓋子也由內(nèi)外兩層組成，內(nèi)層為42 cm×28 cm、外層為44 cm×29 cm，內(nèi)外層間隔是1 cm的焊接死隙。蓋上蓋子后，盒內(nèi)形成相對封閉空間。

2.5.2 具體操作方法及護理配合 (1)巡回護士從4 ℃醫(yī)用冰箱內(nèi)取出儲存桶，核對標簽無誤后打開無菌包布，帶無菌手套后打開密封蓋子，再由手術(shù)臺上人員從罐內(nèi)拿出裝有脂肪顆粒的注射器放置于手術(shù)臺上。紅外線溫度計檢測開蓋時桶內(nèi)溫度。(2)把已滅菌的內(nèi)盒放進外盒，然后把10塊100 mL無菌冰塊放進盒內(nèi)，冰塊上面鋪上一次性使用治療巾。(3)脂肪源性干細胞混懸液和脂肪支架混合后，用20 mL螺紋注射器裝管后放置于冰塊盒內(nèi)治療巾上，蓋上蓋子。(4)注射時打開蓋子拿出注射器，再分裝到5 mL螺紋注射器進行注射。紅外線溫度計檢測方盒里防水單上溫度和注射器脂肪處管壁溫度。

3 討論

脂肪組織作為充填材料應用于臨床已有100多年歷史，特別是自體細胞輔助脂肪移植技術(shù)的問世[1]，不僅提高了脂肪成活率，而且使大容量脂肪移植(200～300 mL)可以一次取得成功，使得自體脂肪移植受到越來越多的醫(yī)生和患者的青瞇。由于技術(shù)要求增加了抽取脂肪的量和時間，這無疑增加了顆粒脂肪體外停留的時間。如何讓顆粒脂肪在體外能夠得到很好的保存而不喪失其絕大部分活力。

成為移植成功的關(guān)鍵，筆者的研究結(jié)果提示，4 ℃低溫保存對脂肪組織有重要意義，24 h內(nèi)可以很好的保護其活性，脂肪組織離體后若無法在1 h內(nèi)使用，應放入4 ℃冰箱中無菌低溫保存,與文獻[7-8]報道相似。因此，我們在臨床操作中，為能獲得無菌和較好細胞活性的脂肪組織，抽脂時，脂肪回收瓶應置于無菌手術(shù)操作臺，并將其置于無菌冰塊鹽水混合液中；在等待對脂肪和液體部分進行分離提取脂肪源性干細胞期間，用于移植的脂肪顆粒放置于自制的密封儲存桶內(nèi)，存放于專用存放無菌顆粒脂肪的醫(yī)用冰箱，4 ℃無菌低溫保存；運輸過程中脂肪顆粒放置于自制移送桶內(nèi)，要用小冰箱或內(nèi)裝冰沙的泡沫箱運送達細胞處理室；注射移植時，已準備好的脂肪應存放在自制的、內(nèi)裝冰塊的存放器盒內(nèi)低溫保存。采取上述無菌低溫保存方法目的是為了保持脂肪細胞良好活性，提高移植組織成活率和預防細菌污染的發(fā)生。

本研究使用的儲存桶、移送桶和存放器選用不銹鋼材料，因為不銹鋼的傳溫效果好,便于清洗滅菌。儲存桶內(nèi)的可活動掏空圓板，既可讓注射器保持垂直狀態(tài)利于脂肪靜置，又方便清洗消毒；儲存桶和移送桶的蓋子內(nèi)裝密封膠板及4個密封扣設(shè)計，加強了桶內(nèi)的密閉性，避免與空氣接觸而導致污染。存放器盒體和蓋子的雙層設(shè)計，是為了減少室溫環(huán)境下的熱傳導，讓盒內(nèi)可以維持較長時間的低溫環(huán)境。我們用紅外線溫度計對低溫保存操作方法進行檢測，結(jié)果顯示低溫效果比較理想。這一系列操作具有簡便、經(jīng)濟、實用、易于操作使用的特點，解決了細胞產(chǎn)品和支架材料的短期低溫保存問題，滿足了自體細胞輔助脂肪移植技術(shù)的順利完成，值得在實踐中推廣應用。

[1] Kotaro Yoshimura, Katsujiro Sato,Noriyuki Aoi. Cell-assisted lipotransfer for cosmetic breast augmentation:supportive use of adipose-derived stem/stromal cells[J]. Aesth Plast Surg， 2008, 32:48-55.

[2] 高景恒，袁繼龍，王志軍，等.CAL技術(shù)的研究與應用進展[J].中國美容整形外科雜志,2009,20(7):442-444.

[3] 黃海玲，何金愛，劉宏偉，等.自體細胞輔助脂肪注射隆乳的手術(shù)配合[J].護士進修雜志，2013，28(8)：742-744.

[4] 黃海玲，劉宏偉，佘文莉，等.介紹一種微創(chuàng)無菌快速獲取可移植脂肪顆粒裝置[J].中華整形外科雜志，2011，27(6)：467-468.

[5] 黃海玲，劉宏偉，歐偉光，等.密閉無菌保存可移植脂肪顆粒儲存桶的研制與應用[J].護士進修雜志，2014，29(13)：80-81.

[6] 黃海玲，劉宏偉，佘文莉，等. 可移植脂肪顆粒存放器的研制與應用[J]. 護士進修雜志,2014，29(18)：1715-1716.

[7] Daisuke Matsumoto MD, Tomokuni Shigeura MS, Katsujiro Sato MD.Influences of preservation at various temperatures on liposuction aspirates [J]. Plastic and Reconstructive Surgery,2007,120 (6):1510-1517.

[8] 陳苑雯，鐘鴻展，劉宏偉.顆粒脂肪體外處理方法對其存活質(zhì)量影響的研究進展[J].中國美容醫(yī)學，2013,22(1):204-207.

國家自然科學基金資助項目(編號：81272100)；廣東省醫(yī)學科研基金立項課題(編號：A2014391)；暨南大學第一臨床醫(yī)學院護理科研專項基金立項項目(編號：2013406)

黃海玲(1974-)，女，廣東羅定，本科，副主任護師，從事臨床護理工作

劉宏偉，E-mail：liuhongwei0521@hotmail.com

R472

B

10.16821/j.cnki.hsjx.2016.23.028

2016-05-12)

國家專利：國家實用新型專利(編號：ZL 201320451668.9)；國家實用新型專利(編號：ZL 201320452277.9)