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        FLT3基因突變?cè)诩毙栽缬琢<?xì)胞白血病中的臨床意義

        2016-03-07 10:00:56許惠麗
        關(guān)鍵詞:基因突變

        許惠麗

        ·臨床醫(yī)學(xué)·

        FLT3基因突變?cè)诩毙栽缬琢<?xì)胞白血病中的臨床意義

        許惠麗

        目的探析FMS樣酪氨酸激酶3(FLT3)基因突變?cè)诩毙栽缬琢<?xì)胞白血病(APL)中的臨床意義。方法40例APL患者骨髓標(biāo)本,使用DNA酶切、RT-PCR以及PCR等技術(shù)檢測(cè)FLT3基因D835突變(FLT3-D835)和FLT3基因內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)(FLT3-ITD),并分析其與患者臨床療效和表現(xiàn)的關(guān)系。結(jié)果APL患者外周血白細(xì)胞(WBC)的陽性率,FLT3-ITD突變型患者高WBC(HW)比例明顯高于FLT3-ITD野生型(P<0.05);FLT3-D835突變型患者HW比例與FLT3-D835野生型比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論FLT3-ITD突變型的所有患者,都具備高外周血WBC計(jì)數(shù),但在FLT3-ITD野生型患者中,只有少數(shù)患者是高外周血WBC計(jì)數(shù)。

        急性早幼粒細(xì)胞白血??;FMS樣酪氨酸激酶3;基因突變

        早幼粒細(xì)胞白血病-維甲酸受體α(PML-RARα)融合基因被認(rèn)為是APL發(fā)生的重要機(jī)制,選用全反式維甲酸(ATRA)靶向治療能使大部分APL患者獲得完全緩解(CR),若對(duì)ATRA進(jìn)行單獨(dú)使用,則不能讓全部APL患者獲得長期無病生存[1]。所以,本文通過分析FLT3-D835、FLT3-ITD突變和APL患者臨床表現(xiàn)與治療關(guān)系,闡述FLT3基因突變?cè)贏PL中的臨床意義,現(xiàn)報(bào)告如下。

        1 資料與方法

        1.1一般資料 選取2015年1~12月本院收治的40例APL患者為研究對(duì)象,其中男24例,女16例,年齡15~57歲,平均年齡(30.12±9.25)歲。通過骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查,可確診為APL。按照FLT3突變可分為FLT3-ITD野生型(32例)與FLT3-ITD突變型(8例),同時(shí)還可分FLT3-D835野生型(32例)與FLT3-D835突變型(8例)。外周血WBC計(jì)數(shù)≥10×109/L為HW,WBC<10×109/L為低WBC(LW);早幼粒細(xì)胞和骨髓原細(xì)胞之和≥80%為高含量(HB),<80%為低含量(LB);出血癥狀可分為0、1、2級(jí),0、1級(jí)又合稱為A級(jí)(BA),2級(jí)則稱為B級(jí)(BB)。

        1.2方法 分析FLT3-ITD突變,設(shè)計(jì)引物12R與11F,基因組DNA的擴(kuò)增可采用PCR技術(shù),并對(duì)FLT3-ITD突變進(jìn)行分析。1*PCR反應(yīng)緩沖液是PCR擴(kuò)增體系,2.0 mmol/L MgCl2,基因組DNA 1 μg,0.2 mmol/L dNTPs,12R與11F引物各25 pmol,2.5 U的Tap DNA聚合酶,至終滅菌雙蒸水體積50 μl。反應(yīng)體系在94℃反應(yīng)5 min后,再按72℃2 min,55℃1 min,94℃45 s程序增擴(kuò)35個(gè)周期,而后在72℃繼續(xù)加長2 min。增擴(kuò)后,把2.0%瓊脂糖凝膠電泳融入到5 μl PCR產(chǎn)物后,對(duì)其進(jìn)行分析。

        1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        APL患者外周血WBC的陽性率,FLT3-ITD突變型患者HW比例明顯高于FLT3-ITD野生型(P<0.05);FLT3-D835突變型患者HW比例與FLT3-D835野生型比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。FLT3突變型與野生型HB、BB、CR率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

        表1 APL患者FLT3基因突變和臨床關(guān)系[n(%)]

        3 討論

        本文應(yīng)用PCR技術(shù),以40例APL患者為研究對(duì)象,探析了FLT3基因突變以及患者臨床療效與表現(xiàn)的關(guān)系。結(jié)果表明,8例具有FLT3-ITD突變,8例具有FLT3-D835突變。在FLT3-ITD突變型的8例患者中,均具備高外周血WBC計(jì)數(shù),但在FLT3-ITD野生型患者中,只有2例具備高外周血WBC計(jì)數(shù),通過上述可知,外周血WBC計(jì)數(shù)和FLT3-ITD突變具有相關(guān)性。通常FLT3-ITD突變APL患者具備高外周血WBC計(jì)數(shù)的原因主要包括FLT3酪氨酸激酶近膜區(qū)氨基酸序列,該序列串聯(lián)將會(huì)導(dǎo)致近膜區(qū)產(chǎn)生重復(fù),從而對(duì)激酶活性產(chǎn)生抑制,進(jìn)而激活下游的信號(hào)傳導(dǎo)通路,比如PI3K/AKT、RAS/MAPK以及STAT5等,并激活酪氨酸激酶,最終造成的細(xì)胞凋亡抑制與過度增殖有關(guān)[2-4]。

        本研究顯示,FLT3野生型和突變型患者CR率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),此結(jié)果可能和FLT3突變樣品數(shù)不足有關(guān)。

        [1]袁燕慧,歐陽建,陳兵,等.FLT3基因內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)突變?cè)诩毙栽缬琢<?xì)胞白血病中的臨床意義.白血病: 淋巴瘤,2015,24(4):220-223.

        [2]程輝,邱慧穎,高磊,等.急性早幼粒細(xì)胞白血病41例分子生物學(xué)特征及其臨床意義.白血病: 淋巴瘤,2013,22(5):275-277.

        [3]王迎,魏輝,劉兵城,等.三種PML/RARA亞型急性早幼粒細(xì)胞白血病臨床特點(diǎn)對(duì)比分析.山東醫(yī)藥,2015,55(27):7-10.

        [4]朱化超.FLT3-ITD基因在急性髓細(xì)胞白血病患者中的突變及對(duì)預(yù)后影響分析.臨床血液學(xué)雜志,2015,28(3):392-396.

        10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.08.017

        2016-01-14]

        467000 河南省平頂山市第一人民醫(yī)院血液科

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